Nothern blot y fish, técnica

1. García Rubio Karla Itzel, Nadia Ivonne Elias
Tinajero , Mónica Guadalupe Jarquin Paulo,
García Alpizar Diana Laura, López Ramírez
Cecilia Alejandra

3. Técnica de biología molecular utilizada para el
estudio de la expresión génica mediante la
detección de ARN específico en una mezcla compleja
de ARN. Este método revela la identidad, la
cantidad, la actividad y el tamaño del producto del
gen en particular. Permite la identificación de ARN
en tejidos y organismos en diferentes etapas de
diferenciación y morfogénesis y además contribuye
a la identificación de condiciones anormales, de
enfermedad o infección, a nivel molecular.

4. • Primer procedimiento empleado para analizar
el tamaño molecular y la abundancia de ARN
selectivos en una mezcla de ARN.
• 1977 - Desarrollada por James Alwine, David
Kemp y George Stank en la Universidad de
Stanford.
• Obtuvo su nombre debido a la similitud del
proceso con el método Southern blot.
Los fragmentos de ARN purificados se separan
mediante electroforesis, se transfieren a una
membrana sólida y se exponen a una sonda de
ARN marcada con una sustancia radiactiva,
fluorescente o química que permite visualizar
cuando los fragmentos de ARN hibridan con la
secuencia complementaria de la sonda de ARN.

5. • Detecta y cuantifica ARN específico
• Es una técnica bien establecida
• Permite el estudio de la estructura del ARN
• Es una técnica laboriosa y tardada
• Requiere sondas específicas
• Menos sensibilidad y menos cuantificación
que otras técnicas

8. FISH en español se traduce a hibridación fluorescente in situ. Es una
técnica que se utiliza para detectar y localizar una secuencia de ADN
específica en un cromosoma. Con ayuda de una sonda se aplica
fluorocromo, el cual hace que el ADN emita fluorescencia que se
puede observar por medio de un microscopio de epifluorescencia. Los
cromosomas mas comunes a revisar son el 13, 18, 21 y el X y Y.
Los fluorocromos más comunes son:
• DAPI que emite luz azul
• GFP emite luz verde
• Rodamina emite luz roja

9. Son sondas que contienen
secuencias complementarias
de las secuencias repetidas
que se encuentran en los
centrómeros de los
cromosomas. Permite el
análisis de alteraciones en el
número de cromosomas
Estas sondas se hibridan a
una región particular de un
gen. Hibridan en una región
de ADN concreta del genoma,
dicha región puede
comprender la secuencia de
un gen o una región mayor,
banda cromosómica.
Son un grupo de sondas que
cada una hibrida a una
secuencia diferente a lo largo
de todo un cromosoma. Con
esto se puede marcar todo un
cromosoma generando un
cariotipo espectral.

10. • Se utiliza sobre células en metafase para detectar
microdeleciones espcíficas.
• Puede identificar ciertos reordenamientos específicos de
algunos tipos de cáncer.
• Se pueden apreciar mejor los cromosomas condensados y
separados
• Determina el número de copias de uno o más
cromosomas.
• Se puede realizar en 24 hrs ya que no requiere
cultivo de células.
• Un ejemplo es el estudio de aneuploidía.

13. EN LA FORMACIÓN DE LOS
ESPERMATOZOIDES, SE PUEDEN
PRODUCIR ERRORES DURANTE LA
MEIOSIS LO QUE PUEDE DAR
ORIGEN A ESPERMATOZOIDES CON
UN NÚMERO DE CROMOSOMAS
ALTERADO.
se realiza el análisis de un máximo
de 9 de los 23 cromosomas que
conforman el ADN del espermatozoide
y que suelen ser el 13, 15, 16, 17, 18,
21, 22, X e Y.

14. AUTOFLORECENCIA
• ALGUNOS MICROORGANISMOS PRODUCEN
AUTOFLUORESCENCIA, LA CUAL ENMASCARA LA
SEÑAL QUE EMITE LA PROPIA MUESTRA EN ESTUDIO.
ES EL CASO DE ALGUNAS ESPECIES BACTERIANAS
COMO SALMONELLA, ARQUEOBACTERIAS.
• LA FLUORESCENCIA TAMBIÉN SE PUEDE ENCONTRAR
EN EL MATERIAL QUE RODEA LAS CÉLULAS
MICROBIANAS; POR EJEMPLO, EN EL TEJIDO DE LAS
PLANTAS, LO CUAL ES UNA FLUORESCENCIA
BIOLÓGICA NATURAL.
• SON ESCASOS LOS ESTUDIOS QUE SE CENTRAN EN
EL ANÁLISIS DE AUTOFLUORESCENCIA Y CÓMO
EVITAR LA INTERFERENCIA CON FISH, SIN
EMBARGO, SE HA ENCONTRADO QUE EL MEDIO DE
CRECIMIENTO, LOS MÉTODOS DE FIJACIÓN Y EL
MEDIO DE MONTAJE INFLUYEN EN LA INTENSIDAD DE
LA SEÑAL.
• FORMAS DE EVITAR LA AUTOFLUORESCENCIA SON
MEDIANTE EL EMPLEO DE FISH CON OTRA TÉCNICA DE
DETECCIÓN, MANIPULANDO EL SISTEMA DE FILTROS
DURANTE LA VISUALIZACIÓN Y SISTEMAS QUE
PERMITAN AMPLIFICAR LA SEÑAL, O MEDIANTE EL
PROCESAMIENTO Y MANEJO DIGITAL DE LOS
ESPECTROS OBTENIDOS EN LA IMAGEN.

16. 1.Observar un patrón particular de expresión genética.
2.Los patrones de expresión obtenidos nos ayudan a conocer las
funciones de los genes.
3.Delecciones o errores en el proceso de transcripción.
4.Sobreexpresión de oncogenes y la desregulación de genes.
5.Conocer la secuencia.

17. 1.Diagnóstico de síndromes por microdeleción
2.FISH en Leucemia Mieloide
3.Diagnóstico en cáncer de pulmón.
4.Fish en cáncer de mama
5.Diagnóstico de melanoma

19. • Bueno Topete M, & González Cuevas J (2013). Técnicas de hibridación. Salazar
Montes A, & Sandoval Rodríguez A, & Armendáriz Borunda J(Eds.), Biología
molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. McGraw Hill.
https://accessmedicina.mhmedical.com/Content.aspx?bookid=1473&sectionid=102
743956
• Rodríguez Martinez, R., & Suescun Otero, G. (2013). Aplicaciones e inconvenientes
de la técnica Hibridación in situ Fluorescente (FISH) en la identificación de
microorganismos. Revista Científica Salud Uninorte, 29(2). Recuperado a partir de
https://rcientificas.uninorte.edu.co/index.php/salud/article/view/3173
• Andrew Cassidy, Julia Jones. Developments in in situ hybridisation. Methods. 2014
Nov;70(1):39-45. doi: 10.1016/j.ymeth.2014.04.006. Epub 2014 Apr 18.
• Arsham MS, Barch, MJ Lawce HJ. (2017). The AGT Cytogenetics Laboratory Manual.
4th Edition. Wiley-Blackwell.
• Boye Schnack Nielsen · Julia Jones. Practical Application of Fluorescent In Situ
Hybridization Techniques in Clinical Diagnostic Laboratories. PART II METHODS
FOR DNA ISH. 5th edition. Humana Press.
• Ryan Bishop. Applications of fluorescence in situ hybridization (FISH) in detecting
genetic aberrations of medical significance Bioscience Horizons. Volume 3. Number
1. March 2010.
• Zubair Ahmed Ratan, Sojib Bin Zaman et al. Application of Fluorescence In Situ
Hybridization (FISH) Technique for the Detection of Genetic Aberration in Medical
Science. Cureus. 2017 Jun 9;9(6):e1325. doi: 10.7759/cureus.1325.