El documento explica los conceptos fundamentales de la absorbancia y la espectrofotometría. Define la absorbancia como la relación entre la intensidad de luz incidente y transmitida a través de una muestra, la cual depende de la concentración de analitos en la muestra según la Ley de Beer-Lambert. Describe los componentes clave de un espectrofotómetro como las fuentes de luz, monocromadores, detectores y cubetas, y cómo se usa la espectrofotometría para cuantificar analitos.
2. ABSORBANCIA
También conocida como Densidad öptica (OD) la
Absorbancia se define como la relación (logarítmica)
entre la intensidad de la luz que incide sobre una
muestra y la intensidad de esa misma luz que es
transmitida a través de esa muestra. Cuando una luz
de una longitud de onda determinada, seleccionada
por un filtro, incide sobre una muestra, parte de esa
luz es absorbida. La luz no absorbida pasa a través de
la muestra y es recogida por un detector colocado en
el otro lado del pocillo de la microplaca, frente a la
fuente de luz.
3. Como la cantidad de luz
absorbida por la muestra está en
relación con su concentración (Ley
de Lambert-Beer), la absorbancia
se emplea para la cuantificación de
ácidos nucleicos y proteinas así
como en reacciones
colorimétricas, como por ejemplo
test de ELISA.
4. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslúcido, una parte
de esta luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante
atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad de luz absorbida, mayor
será la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz será
transmitida por dicho cuerpo. Como se ve, la absorbancia y la
transmitancia son dos aspectos del mismo fenómeno. La absorbancia,
a una determinada longitud de onda lambda, se define como:
5. Donde I es la intensidad de la luz que pasa por la muestra
(luz transmitida) y I0 es la intensidad de la luz incidente.
La medida de la absorbancia de una solución es usada con
mucha frecuencia en laboratorio clínico, para determinar la
concentración de analitos tales como colesterol, glucosa,
creatinina y triglicéridos en sangre. Cada uno de estos
analitos se hace reaccionar químicamente con
determinados compuestos, a fin de obtener una solución
coloreada. A mayor intensidad de color, mayor será la
absorbancia de la solución en una determinada longitud de
onda. La absorbancia es entonces directamente
proporcional a la concentración del analito en sangre.
Para medir esta absorbancia, se hace incidir un haz de luz
con determinada intensidad y longitud de onda, sobre la
solución, y se mide la luz transmitida al otro lado de la
cubeta que contiene dicha solución. Estas técnicas están
comprendidas en el área de la espectrofotometría.
6. Cuando la absorbancia se calcula por unidad de longitud, por otra
parte, se utiliza la idea de densidad óptica. Esta magnitud alude
específicamente al nivel que absorbe un elemento óptico de acuerdo
a la unidad de distancia.
La espectrofotometría indica que la absorbancia se calcula dividiendo
la intensidad de la luz que atravesó una muestra por la intensidad de
la luz que existía antes de ingresar a dicha muestra. En otras
palabras: se relaciona la intensidad que sale o se transmite con la
intensidad que ingresa o incidente.
18. COMPONENTES DE LOS
INSTRUMENTOS QUE SE EMPLEAN EN
LA ESPECTROSCOPIA ÓPTICA
Fuentes de radiación
Selectores de longitud de onda
Detectores
Procesadores de Señales y dispositivos de lecturas
Cubetas
19. 1. FUENTES DE RADIACIÓN
En los estudios espectroscópicos, la fuente
deberá generar un haz de radiación que
tenga potencia suficiente y así facilitar la
detección y la medición. Con voltaje de salida
estable, es necesario utilizar una fuente
regulada para la estabilidad requerida.
Son de dos tipos:
Fuentes continuas
Fuentes de Líneas.
20. FUENTES
Fuentes continuas.- la radiación
varía solo de manera gradual con la
longitud de onda. Fuentes que
emiten un continuo de longitudes de
onda.
Fuentes de líneas.- emiten un
número restringido de bandas de
radiación, abarca un margen
reducido de longitudes de onda.
21. FUENTES CONTINUAS
Fuentes Continuas de radiación
Visible
Una lámpara común de filamento
de tungsteno proporciona un
espectro continuo desde 320 a 2500
nm. Su intensidad varía con la cuarta
de potencial del voltaje. Por esta
razón generalmente necesita una
fuente de voltaje estabilizada
electrónicamente. Opera
23. FUENTES CONTINUAS
Lámpara de tungsteno/halógeno contiene una
cantidad de yodo dentro de la caja de cuarzo
que aísla el filamento. El cuarzo permite que el
filamento opera una temperatura de 3500 K
con lo cual se producen intensidades mayores
y aumenta el intervalo de la lámpara en la
región ultravioleta. Su duración es más del
doble que la de tungsteno.
Tiene mayor intervalo de long. de onda, mayor
intensidad y duración.
24. FUENTES CONTINUAS DE RADIACIÓN
UV
Lámparas de deuterio (de hidrógeno),
se utilizan para proporcionar una
radiación continua en el intervalo de
160 a 380 nm.
Estas fuentes son las más utilizadas en
UV.
25. LÁMPARA DE DEUTERIO
Consiste en un tubo cilíndrico con
una ventana de cuarzo de la que sale
la radiación. El tubo contiene
deuterio a baja presión. La excitación
se lleva acabo aplicando unos 40 V
entre el electrodo calentado cubierto
de óxido y un electrodo de metal.
Para la intensidad constante, fuente
de energía regulada.
26. FUENTES CONTINUAS DE RADIACIÓN IR.
La Rad. IR se produce calentando
sólidos inertes.
Globar.- consiste en una varilla de
carburo de silicio de 5 por 50 nm.
Emite una rad. En una región de 1 a
40 μm cuando se calienta
eléctricamente a 1500 ºC
aproximadamente
27. FUENTES CONTINUAS DE RADIACIÓN IR
Emisor de Nernst es un cilindro de 2
por 20 nm formando óxidos de
circonio y de itrio, emite rad. IR
cuando se calienta a una
temperatura elevada, por el paso de
la corriente eléctrica.
Las espirales de alambre de nicromo
calentadas eléctricamente también
sirven como fuente de Rad. IR.
28. 2. SELECTORES DE LONG. DE ONDA
Normalmente los instrumentos
espectroscópicos
vienen equipados con uno o más
dispositivos que restringen la radiación que se
va a medir a una banda estrecha para que se
absorba o emita por el analito. Estos
dispositivos aumentan mucho la selectividad y
sensibilidad de un instrumento.
Además, para las mediciones de abs. , la
banda estrecha aumenta la posibilidad de que
el instru-
mento responda linealmente con la
concentra-
29. MONOCROMADORESMonocromador.-Mecanismo para identificar
la radiación policromática en longitudes de
onda que la componen
Son de dos tipos, uno de ellos utiliza una red
para dispersar la radiación en sus longitudes
de onda individuales.
El otro utiliza un prisma para este fín.
Normalmente los equipos comerciales usan
redes.
31. MONOCROMADOR
Ancho efectivo.- es el
intervalo de longitudes
de onda o frecuencias de
un pico de Abs. o emisión
a la mitad de la altura del
pico.
32. ANCHO DE BANDAVa a depender de la calidad del elemento
dispersante de la anchura de la rendija y la distancia focal del
monocromador. Un monocromador de alta calidad tendrá un
ancho de banda efectiva en pocas décimas de nánometro, o
en menos en la
visible y UV. ( 1 a 20 nm)
33. FILTROSFiltro de Absorción.- Medio colorido (por lo común un vidrio)
que transmite una banda
relativamente estrecha del espectro visible
banda efectiva de 5 a 20 nm.
Filtro de interferencia.- Filtro óptico que proporciona anchos
de banda estrechos gracias a la interferencia constructiva
450 nm ,T= 66%, ancho de banda efectivo
10 nm.
35. 3. DETECTORES Y TRANSDUCTORES
Un detector es un dispositivo que indica la existencia de
algún fenómeno físico. Ojo humano.
Un transductor es un tipo especial de detector que
transforma señales como intensidad de luz, pH, masa y
temperatura
en señales eléctricas que posteriormente
se pueden ampliar, manipular y finalmen-
te convertir en números proporcionales a
la magnitud de la señal original.
36. El transductor ideal para la radiación electromagnética responde
rápidamente a niveles bajos de energía radiante en una amplia
región de longitudes de onda. Además
produce una señal eléctrica que se puede
ampliar fácilmente y con un nivel de ruido re-
lativamente bajo.
Muchos detectores tienen una señal cte. cono-
cida como corriente oscura.
La corriente oscura es la que se produce en
ausencia de luz.
37. TIPOS DE TRANSDUCTORESDetectores de fotones
• 1) fototubos
• 2) tubos fotomultiplicadores
• 3) fotodiodos de silicio
• 4) celdas fotovoltaicas
Detectores Térmicos
Par térmico, Bolómetros, Celdas neúmati-
cas y celdas piroeléctricas.
38. TIPOS DE TRANSDUCTORES
Detectores de fotones.- responde a los
fotones , se basan en la interacción de la
radiación con la superficie reactiva para
producir e¯ (emisión de fotones)
promover e¯a estados de energía en los
que puedan conducir electricidad
(fotoconducción) solo UV y Visible e IR
cercano tienen energía suficiente para
producir estos procesos.
39. Detectores Térmicos.- responden al calor.
Detector de IR que produce calor como consecuencia de
la absorción de radiación.
En el IR los fotones carecen de energía suficiente para
causar fotoemisión por lo que se utilizan detectores
térmicos.
Sus características son inferiores a los de fotones.
40. DETECTORES DE FOTONES
1.- Fototubos.- Un fototubo consiste
en un cátodo semicilíndrico y un
ánodo de alambre sellados al vacío
dentro de una cubierta transparente.
Cuando se aplica el potencial entre
los electrodos , los fotoelectrones
fluyen al ánodo produciendo
corriente eléctrica. Estos tubos
producen una corriente oscura ( se
debe a los emisión de e¯ inducida
¯
41. 2.- Tubos fotomultiplicadores (TFM)
Tiene una construcción similar a la del fototubo, más
sensible. La superficie del cátodo similar a la del
fototubo. Los e¯ emitidos son acelerados hacía el dínodo
(marcado 1) que se mantiene a un potencial 90 V más
positivo que el cátodo.
Cada uno de los fotoelectrones acelerados que chocan en
el dínodo , produce unos e¯ más , acelerados al dínodo 2.
cuyo voltaje es 90 V más que le dínodo 1 y se repite el
proceso. Cada dínodo restante , origina 10 a la 6 y 10 a
la 7 e¯, esta cascada de e¯ se recoge en el ánodo.
42. 3.- Fotodiodos de silicio. El Si es
semiconductor, Grupo IV A , 4 e¯ de valencia .
Se aumenta su conductividad con un
elemento del grupo III A o VA, del VA el As 4
de sus 5 e¯ forman enlaces covalentes con el
As , dejan un e¯ libre que produce la
conductividad del cristal-
(tipo n).
43. Cuando el Si es recubierto con un elemento del
grupo III A, como el Ga. Solo tiene 3 e¯
Se forma un exceso de agujeros que aumenta la
conductividad. (tipo p)
pn .- + están en la región p (agujero) falta un e¯,
- son los n (1 e¯).
Un detector de silicio es más sensible que el
fototubo pero menos sensible que el
fotomultioplicador.
¯
44. 4.- Celdas fotovoltaicas.-Una celda fotovoltaica (o fotocelda) es
más simple, consiste en un electrodo plano de cobre o hierro
sobre el que se deposita una capa de material semiconduc-
tor , como selenio u óxido de cobre(I) . La superficie externa del
semiconductor se cubre con una fina película transparente de
oro, plata o plomo que sirve como segundo electrodo colector.
Detecta la visible, es sólido y de bajo costo, no necesita fuente
externa pero no es muy sensible.
45. Detectores de calor.- consiste en una fina
superficie ennegrecida que abs. La rad. IR y
como consecuencia aumenta la temperatura.
El aumento se transforma a señal eléctrica
que posteriormente se amplia y se mide. Las
mediciones en el IR son significativamente
menos precisa que la UV- Visible.
Algunos detectores térmicos.- par térmico,
bolómetros, celdas neumáticas y celdas
piroeléctricas.
46. 4. PROCESADORES DE
SEÑALES Y DISPOSITIVOS DE
LECTURAS.El procesador de señales es un dispositivo
electrónico que amplifica a la señal eléctrica
proveniente del detector; además puede alterar la
señal de corriente directa (cd) a alterna (ca)(o ala
inversa) , cambiarla de fase y filtrarla para
eliminar los componentes no deseados. Puede
decirse que el procesador también realiza
operaciones matemáticas con las señales para
diferenciarlas, integrarlas y convertirlas en log.
Los modernos lectura digital, escalas ,
registradores, monitores de microcomputadoras
47. 5. CUBETAS
Los recipientes para la muestra, conocidos
como celdas o cubetas, deben tener ventanas
que sean transparentes en la región del espec-tro de interés.
Las mejores celdas tienen ventanas que son -
perpendiculares, para disminuir las pérdidas -
por reflexión.
48. La calidad de los datos espectroscópicos de-
pende en gran medida de la forma como se uti-
lizan las celdas y su mantenimiento. Las mar-
cas de huellas digitales, grasa u otros depósi-
tos sobre las paredes alteran las características
de transmisión de las celdas. Es necesario una
limpieza minuciosa, no tocar las ventanas. No
secarlas en horno o la flama, sufren daño físico
se calibran con una solución de Absorción.
49. Limpieza y manejo de las celdas:
Las celdas se desgastan y se rayan con el uso
se deben de calibrar periódicamente una con – otra para
detectar diferencias ópticas.
La limpieza más eficaz es limpiar las ventanas
con papel para lentes humedecido con metanol éste se evapora
y las ventanas quedan libres - de contaminantes.
Es mejor que papel seco, por los residuos.
51. MÉTODOS DE TRABAJO
Los cuatro métodos de operar en colorimetría o
espectrofotometría se asemejan en que una muestra
desconocida se compara con muestras conocidas o
patrones, pero difieren en el modo de hacer esta
comparación.
Método de compensación.
Método de las series patrón.
52. MÉTODO DE COMPENSACIÓNLa muestra desconocida, que debe contener el reactivo
necesario para el desarrollo del color, se coloca en un
tubo o cilindro que tiene la base transparente. Una
disolución patrón de la misma sustancia y con el color
desarrollado de igual modo, se coloca en un segundo
tubo o cilindro, idéntico al anterior. La profundidad
(espesor, camino óptico) de la disolución patrón se fija
en un valor conveniente y la profundidad de la
disolución desconocida se varia hasta que la luz situada
bajo los tubos se observe, mirando desde arriba, con
idéntica intensidad (transmisión). En términos de la ley
de Bouguer-Beer:
53. Al ser la misma sustancia la que está presente en los
tubos que contienen la disolución patrón y la
desconocida, la absortividad a es la misma para ambas.
Cuando las dos disoluciones tienen igual transmitancia,
P1/P0, y de aquí que b1c1=b2c2.
Las concentraciones son inversamente proporcionales a
los caminos ópticos en el punto de equicoloración. Las
transmitancias observadas son idénticas, porque hay el
mismo número de partículas absorbentes en el camino
óptico.
54. El método de compensación es el empleado en el
colorímetro de Dubosc. La luz procedente de una fuente
adecuada, tal como la luz solar difusa o de una lámpara de
tungsteno, se refleja en los cilindros colorimétricos que
contienen las disoluciones mediante un espejo. Los cilindros
están montados de tal forma que se puedan mover
verticalmente por un tornillo de cremallera. Los cilindros se
elevan hasta que los émbolos se sumerjan bien la disolución.
Uno de los cilindros se fija en una posición conveniente y el
otro se sube o baja hasta que los colores en las dos mitades
del ocular sean equiparables. El espesor de cada solución
bajo el embolo se lee en la escala impresa en los
acoplamientos de cilindro. Normalmente se halla un
promedio de varias medidas para hacer los cálculos. La
exactitud es del orden del 2 al 5%, aunque depende de
muchos factores.
55. MÉTODO DE LAS SERIES PATRÓN
Se prepara una serie de disoluciones patrón del constituyente que
se analiza; la concentración de una disolución difiere de la
concentración siguiente en una cantidad adecuada. Se desarrolla el
color en la muestra desconocida del mismo modo que en las
disoluciones patrón y la desconocida se compara con las patrones.
Esta comparación puede ser por uno de los dos métodos
siguientes.
a) Comparación directa o de igualación. Se prepara la serie de
disoluciones patrón en tubos largos y estrechos de idéntico
diámetro y aforado para conseguir igual profundidad; la disolución
desconocida se coloca en un tubo de iguales características. Se
observan desde la parte superior los tubos colocados en una
gradilla, mientras se ilumina por la parte inferior. Así se determina
la disolución patrón que es semejante a la desconocida; esta, por
tanto, contiene la misma cantidad del constituyente que se desea
determinar que el patrón al que se asemeja. Los tubos empleados
son normalmente los llamados tubos Nessler.
56. b) Comparación indirecta. En este método el <<color>> se mide
como transmitancia o absorbancia en un aparato usando algún
tipo de fototransformador en lugar del ojo. La medida es la lectura
de un medidor o la posición de un registro grafico en una grafica.
Cada serie de patrones se mide en tandas, y las lecturas, o alguna
función con ella relacionada, se representa en función de la
concentración obteniéndose así una curva de calibración. El
problema, preparado de la misma forma que los patrones se mide
también y la lectura del instrumento se convierte en concentración
con auxilio de la curva de calibración. El método esta exento de los
errores personales de comparación visual de color. Es posible
obtener una exactitud del orden del 0.05% de error .relativo y ,
modificando la técnica, incluso hasta del 0.01% de error relativo.
57. Es posible calcular la concentración de una disolución desconocida
mediante la medida de la transmitancia o de la absorbancia de una
sola disolución patrón y del problema, haciendo uso de las leyes
de la espectrofotometría. Conociendo la concentración de la
disolución patrón, el camino óptico y la transmitancia o la
absorbancia medida, se puede calcular la absortividad a mediante
la relación – log T = A = abc. Los cálculos basados en varias
medidas con disoluciones patrones son más seguros que los
basados en una sola medida de una concentración conocida.
58.
59. FOTOMETROSEn el colorímetro Duboscq los componentes son únicamente una
fuente de energía radiante, cubetas para contener la disolución,
prismas reflectantes y lentes para dirigir la luz transmitida hacia el
ojo del observador, que se usa como receptor.
En los aparatos sencillos se utilizan filtros de vidrio o gelatina
(Wrattan) para eliminar o disminuir la energía radiante de algunas
longitudes de onda y dejar pasar las de otras regiones
seleccionadas. En los espectrofotometros, el haz procedente de la
fuente lumínica se dispersa en un espectro continuo al pasar a
través de un prisma, o red de difracción. En estos instrumentos el
haz que pasa a través del prima puede reflejarse y dar
dispersiones adicionales. Para este propósito también puede
utilizarse un prisma y una red de difracción. Los prismas y/o las
redes de difracción, con sus accesorios, lentes, espejos y rendijas,
se llaman monocromadores.
62. INSTRUMENTOS COMERCIALES
El modelo Bausch and Lomb Spectronic 20 utiliza una red de
difracción duplicada, un circuito eléctrico con un código de colores
y tubos de ensayo especiales para las cubetas de absorción. Tiene
lectura directa en transmitancias y absorbancias. El bajo costo y el
estrecho paso de la banda espectral le hacen especialmente
adecuado para aplicaciones analíticas en trabajos de rutina.
El espectofotometro Beckman Modelo B, es un aparato de precio
medio que cubre la zona de longitudes de onda comprendidas
entre 325 y 1.000 mµ. Es un aparato de lectura directa con varias
posiciones de expansión de escala del selector de sensibilidad
para medidas de disoluciones de gran absorbancia. Se pueden
acomodar cubetas de absorción hasta de 10 cm de camino óptico.
63.
64. El espectofotometro Beckman Modelo DU tiene óptica de cuarzo y
cubre la zona de longitudes de onda de 200 a 2.000 mµ. Es un
instrumento de cero, graduado para leer transmitancias o
absorbancias. El Beckman Modelo DB tiene óptica de cuarzo. El haz
de energía que procede del monocromador pasa alternativamente
a través de la muestra y de la disolución de referencia por medio
de un espejo vibrador, obteniéndose así un efecto de “doble haz
simultaneo”, con lectura directa de en transmitancias o
absorbancias. Esta provisto de conexiones para un accesorio de
registro grafico.
Los espectrofotómetros de registro grafico mas caros son lo de
Beckman, los modelos DK-1 y DK-2 y el Cary, modelo 14. Estos
aparatos cubren las regiones del ultravioleta visible e infrarrojo
próximo, con alto poder de resolución. Son aparatos de gran
versatilidad para registro grafico de transmitancias y absorbancias,
expansión de escala y velocidad variable de registro.
65. Los espectofotometros de infrarrojo de registro grafico (Perkin-
Elmer, Baird, Berckman) con óptica de sal gema cubren la zona de
longitudes de onda de 2 a 16 µ; las partes ópticas hechas con
otros materiales se utilizan para otras regiones de longitudes de
onda o para mayor poder de resolución. Están provistas de
accesorios para análisis de gases, líquidos y disoluciones, y sólidos
finamente dispersos. Los espectrofotómetros de infrarrojo
encuentran amplia aplicación en la determinación de
constituyentes de compuestos orgánicos (en algún grado también
de compuestos inorgánicos). Se utilizan mucho estos aparatos en
laboratorios de control e investigación para el análisis de
compuestos orgánicos.
66. PUESTA A UN METODO ESPECTROFOTOMETICO
Gran cantidad de iones inorgánicos en disolución acuosa absorben
suficiente energía radiante en la región del visible, lo que permite
su determinación espectrofotométrica directa, incluso en muy
bajas concentraciones.
Cuando se encuentra un sistema coloreado prometedor o un color
producido en una reacción, es preciso una investigación para
desarrollar una determinación espectrofotométrica adecuada del
constituyente. Muchos de los factores a tener en cuenta se
enumeran y se discuten brevemente a continuación.
1. Selección de la longitud de onda analítica. Se estudia en el
espectrofotómetro al disolución del constituyente que se analiza,
después de desarrollado el calor mediante un reactivo adecuado
determinándose su espectro de absorción. Si no hay interferencias
de los otros componentes de la muestra en disolución, se escoge
la longitud de onda del máximo de absorción para medidas
futuras.
67. 2. Efecto del exceso de reactivo. Una cantidad fija del constituyente
que se busca se trata con cantidades crecientes del reactivo que
desarrolla el color. Se mide la absorbancia a la longitud de onda
previamente seleccionada.
Si la reacción formadora de color es prácticamente completa
cuando están presentes cantidades estequiometrias a los reactivos,
la adicion de mas cantidad de reactivo dará lugar a pequeños
incrementos de la absorbancia si es que la hace aumentar algo. Por
otra parte, si la reacción es completa, la adicción de cantidades
crecientes de exceso de reactivo desplazara el equilibrio hacia la
formación de más especie coloreada y dara lugar a un aumento de
la absorbancia.
68. 3. Efecto del tiempo. Algunas reacciones de formación de color son
muy rápidas, otras son muy lentas. Además, algunas especies
coloreadas experimentan <<desvanecimientos>> debidos a la
descomposición por la luz y/o por el calor, o, aparentemente, por
reposo. Lo ideal es que la reacción de formación de color sea
rápida, de tal forma que los resultados analíticos puedan
obtenerse con rapidez.
4. Efecto del pH. En el caso ideal deberá existir un amplio margen
de pH en el cual la absorbancia no variase, cuando el control de pH
es muy critico, se deben utilizar disoluciones adecuadas de gran
capacidad reguladora; o bien, se ajusta el pH de la solución al
valor deseado mediante un pH metro.
69. 5. Efecto de la temperatura. Se requieren a veces temperaturas
elevadas para aceleraer la formación del producto coloreado; pero
puede también aumentar la velocidad de decoloración. El control
de la temperatura puede ser necesario no solo para el desarrollo
del calor si no también durante la medida de la absorbancia; esto
es muy importante cuando se utilizan disolventes orgánicos que
tienen un elevado coeficiente de dilatación.
6. Conformidad con la ley de Beer. Una relación lineal entre
concentración y absorbancia simplifica el procedimiento de
calibración, así como los cálculos en el análisis; también da la
seguridad de que las condiciones de análisis que se han
establecido son satisfactorias.
70. 7. Efecto de las sustancias extrañas. El reactivo formador de calor
debería ser específico o muy selectivo para el constituyente que se
analiza. Las sustancias extrañas no deberían impedir la reacción de
formación del color, ni dar otro análogo (espectro de absorción).
Se deben hacer pruebas siempre con las sustancias extrañas que
estén presentes en la muestra a analizar.
Otros factores a considerar son la estabilidad del reactivo
formador de calor, la carencia del sistema a medir en precipitados
o dispersiones colídales (en que es muy difícil de reproducir la
distribución de tamaños de partícula) y selección del disolvente
adecuado.
7. Precisión del método. Se deben hacer medidas de muestras
repetidas para evaluar la precisión del método. La mejor forma de
expresar la presicion es mediante la desviación típica.
