Détection de l’hémoglobine fœtale par la méthode de l’élution acide (technique de Kleinhauer-Betke)

1. (technique de Kleinhauer-Betke)
Par : S / Abdessemed

2. Abdsalah
 Détecter l’hémoglobine F présente dans
les globules rouges. Ce test très utile
lors de la réapparition ou de la
persistance de l’hémoglobine fœtale
dans les globules rouges et, aussi,
pendant la grossesse, lorsqu’on craint le
passage des globules rouges fœtaux Rh
positifs chez une mère Rh négative.

3. Abdsalah
 La présence de l’hémoglobine F est mise
en évidence par la technique de
Kleinhauer-Betke qui utilise la propriété
acido-résistante de l’hémoglobine F.
 L’hémoglobine adulte est éluée par une
incubation dans un tampon acide ;
l’hémoglobine F peut alors être colorée
par un colorant approprié.

4. Abdsalah
 Sang prélevé sur EDTA.
 Ethanol à 80%.
 Tampon acide :
-Solution A : Na2HPO4 0,2 mol/l (28,4 g/l)
-Solution B : acide citrique 0,1mol/l (21,01
g/l)
Mélanger 24,7 ml de la solution A et 75,3
ml de la solution B.
Le pH doit être de 3,2. Garder la solution
au réfrigérateur et vérifier le pH avant
chaque usage.
 Eosine à 1%

5. Abdsalah
1) Faire des frottis frais et fixer à
l’éthanol pendant 5 min.
2) Laver les frottis à l’eau et sécher à
l’air.
3) Placer les frottis verticalement dans
la solution tampon à 37° C en agitant de
haut en bas pour éviter les bulles d’air ;
l’élution est complète après 5 à 15 min.

6. Abdsalah
4) Laver les frottis à l’eau et les colorer
pendant 1 min dans la solution d’éosine.
5) Faire un témoin normal en utilisant du
sang normal d’adulte et un témoin anormal
avec un sang dans lequel on a mélangé
artificiellement des globules d’adulte et
des globules rouges fœtaux (ABO
compatibles).

7. Abdsalah
 L’hémoglobine F est acido-résistante.
 Les globules rouges contenant de
l’hémoglobine F sont colorés en rouge par
l’éosine.
 L’intensité de la coloration est en
rapport avec la quantité d’hémoglobine F
présente dans le globule rouge.
L’hémoglobine adulte est éluée à un pH
de 3,2.

8. Abdsalah

9. Abdsalah
 A la naissance, 60 à 80% du pigment du
sang de cordon est de l’hémoglobine F.
Chez l’adulte, il y a moins de 1 %
d’hémoglobine F dans le sang normal.
Des quantités plus importantes sont
présentes dans les thalassémies.

10. Abdsalah
 Un taux anormalement élevé
d’hémoglobine F se voit aussi au cours
de l’anémie de Biermer, des aplasies, de
la myélofibrose, des leucémies
myéloblastiques de divers types et des
syndromes myéloprolifératifs.

11. Abdsalah
 Dans les complications de la grossesse,
comme dans les grossesses molaires et
en cas d’hémorragie fœto-maternelle,
on observe également une augmentation
du taux de l’hémoglobine F.

12. Abdsalah
 Lorsqu’on craint une incompatibilité Rh,
cet examen est très utile pour détecter
la présence des globules rouges fœtaux
dans le sang de la mère. Dans ce cas, il
est nécessaire d’administrer à la mère, de
façon précoce, l’immunoglobuline anti –D.