Este documento describe el uso del hidróxido de potasio (KOH) para la identificación de estructuras fúngicas y bacterianas en el laboratorio de microbiología. Explica que el KOH es el método de elección para identificar hongos en muestras clínicas, pero que el cultivo sigue siendo el método estándar de oro. También describe diversos métodos modificados de KOH y sus aplicaciones para la detección de bacterias y el diagnóstico de enfermedades como la vaginosis y las micosis.
3. OBJETIVO GENERAL
Determinar la importancia del examen directo
KOH para la identificación de estructuras
fúngicas y sus diferentes aplicaciones en la
microbiología.
OBJETIVO ESPECIFICO
Conocer el fundamento del examen directo KOH
para identificar hongos así como los métodos
modificados que existen para este ensayo.
Aprender cuales son las diferentes aplicaciones
del KOH que no incluyan el estudio de hongos en
el área de la microbiología.
4. Es un compuesto químico inorgánico de
fórmula KOH, es una base fuerte de uso
común. En el laboratorio clínico su uso es
importante puesto que es un procedimiento
auxiliar para diagnóstico de:
Micosis
Diagnóstico de enfermedades vulvo/vaginales
Detección Bacterias Gram Negativas
5. Se denomina micosis (del griego μυκος,
hongo) a las infecciones sufridas en humanos
provocadas por un hongo.
6. Son unidades anatómicas y de crecimiento:
LA HIFA: son hongos pluricelulares.
LA LEVADURA, en hongos unicelulares.
7. Tomando en cuenta el grado de profundidad
anatómica que afecte el hongo:
Superficial
Sistémico o profundo
Oportunista
8. Las micosis
superficiales son las
afecciones producidas
por el parasitismo
fúngico que
comprometen las
capas externas de piel
(epidermis), cabello,
uñas, mucosas.
9.
10. SISTEMICAS
PROFUNDAS
Las micosis profundas son
las afecciones debidas al
parasitismo de hongos y
actinomicetos que ocupan
estructuras más profundas
que las córneas,
compromete dermis, tejido
subcutáneo y músculo
Las sistémicas tendencia
eventual a la generalización
en el organismo porque
compromete tejidos
profundos afectan a dos o
más órganos adyacentes
11.
12. Son las micosis producidas por hongos que
atacan a huéspedes con un estado alterado de
sus mecanismos inmunológicos de defensa,
principalmente los celulares, que son
fundamentales contra las infecciones fúngicas.
Compromete diversos órganos.
Topográficamente pueden ser superficiales,
subcutáneas o sistémicas, pero son causadas por
hongos inocuos. En un sujeto
susceptible, cualquier hongo puede ser un
oportunista.
13.
14.
15. Para alcanzar el éxito en el diagnóstico
micológico partiendo de una sospecha
clínica, es fundamental realizar
adecuadamente la recogida de la muestra a
partir de la lesión, su correcta manipulación
para mantener la viabilidad del agente
etiológico y evitar posibles contaminaciones
en su transporte y procesamiento.
16. Todas las muestras deben enviarse al laboratorio rápidamente,
sin conservantes.
Las muestras deben transportarse en un recipiente estéril,
humidificado y a prueba de vertidos; sin embargo, las muestras
dermatológicas pueden transportarse en un recipiente seco
(placa de Petri, papel de fotografía negro, entre dos portas).
En general, no deben introducirse en medios de transporte, a no
ser que sea fácil retirar la muestra del medio.
Los raspados corneales y hemocultivos deben sembrase
directamente en el medio de cultivo adecuado. Si esto no fuera
posible, se usarán medios de transporte adecuados o se
conservaran a 4 ºC.
17. Todas las muestras deben manejarse como si
tuvieran microorganismos potencialmente
peligrosos. Se rechazará en los siguientes
casos:
a) muestra no identificada,
b) transporte inadecuado o demasiado
prolongado,
c) muestra derramada,
d) cantidad insuficiente o inadecuada.
18. Es el medio de montaje de las muestras clínicas
más universalmente aceptado.
El KOH disuelve rápidamente los elementos
celulares, para observar los hongos (protegidos
por la pared celular).
El efecto clarificador del KOH puede demorar
desde 10 min hasta horas, en el caso de las
muestras de uñas, y puede reducirse calentando
ligeramente la preparación.
Se suelen utilizar dos concentraciones, una más
fuerte del 20-30% para uñas, y del 10% al 15%
para el resto de muestras.
19. Los inconvenientes de las soluciones de KOH
son, entre otros, que su reacción con el
material clínico puede crear unos artefactos
que pueden parecerse a los hongos, con lo
que se hace necesaria cierta experiencia en el
observador.
20. KOH Glicerol.
KOH-Dimetilsulfóxido (DMSO).
KOH-Colorante de Cobre (tinta Parker-KOH)
KOH Azul Algodón de Lactofenol
KOH Blanco de Calcofluor
21. La adición del glicerol previene la
degradación de los elementos fúngicos, evita
la formación de cristales y evita la
deshidratación de la preparación entre porta
y cubre, convirtiéndola en semipermanente.
22. La adición de DMSO acelera la clarificación,
evita la necesidad del calentamiento, la
cristalización y la formación de artefactos.
23. Con la intención de mejorar la visualización
de los hongos, para el diagnóstico de
Malassecia furfur específicamente se tiñen
intensamente de color azul. La tinta china se
utiliza en muestras de LCR y exudados. La
usamos siempre que busquemos
Criptococcus neoformans.
24. Se realizan las preparaciones a partir de
cultivos. El fenol destruye la flora
acompañante y organismos; el ácido láctico
conserva las estructuras fúngicas y el azul
algodón tiñe la quitina de las paredes
fúngicas.
25. Hay algunos hongos (“hongos dematiaceos”)
que producen enfermedades como
micetomas que se tiñen con gran dificultad
por eso el uso el blanco de calcofluor.
26. Otro uso del KOH en el laboratorio es para la
identificar la presencia de una bacteria
Gardnerella vaginalis.
27. Las aminas (trimetilamina, putrescina y
cadaverina) son producidas por la flora vaginal
mezclada y se detectan cuando las secreciones
vaginales se mezclan con hidróxido de potasio.
El olor de amina, que recuerda el olor a pescado
No se produce este olor en ausencia de
vaginosis.
El olor a aminas también puede encontrarse en
mujeres con trichomoniasis.
La prueba de amina empleada sola predice el
diagnóstico de vaginosis en forma exacta en el
94% de las pacientes
28. La determinación del Gram de las bacterias, también se puede
realizar de una forma más rápida y sencilla, empleando únicamente
solución acuosa de KOH al 3%.
Si se forma un hilo, la reacción se considera positiva y significa que
la bacteria pertenece al grupo de las gram negativas. Por el contrario
si después de unos minutos no se forma el hilo, la bacteria es un
miembro de las gram positivas.
29. Concluimos que el KOH es el método de elección directo para la
identificación de estructuras fúngicas, pero que el método “gold
estándar” sigue siendo el cultivo.
Determinamos que el examen directo de KOH este sirve para el
estudio de micosis de cualquier origen, según su localización.
Se conoció que los métodos modificados de KOH aumentan la
sensibilidad y especificidad de la prueba para la detección de
estructuras fúngicas, asi como su conservación
Observamos la importancia de observar cómo se realiza la toma,
transporte y conservación de la muestra, y su impacto en el
resultado.
Se estableció que la prueba de aminas tiene una especificidad
del 94% para el diagnóstico de Gardenerella vaginalis y el
impacto de su uso para la diferenciación de bacterias Gram
negativas de las bacterias Gram positivas
30. Cuando se use el KOH sin ningún método
modificado, se deberá contar con un personal
altamente calificado para la observación en el
microscopio y con mucha experiencia.
31. 1. Roberts GD. Detection of fungi in clinical specimens by phase-contrast microscopy. J Clin Microbiol 1975; 2: 261- 265.
2. Pontón J. Diagnóstico microbiológico de las micosis. Rev Iberoam Micol 2002; 19: 25-29.
3. García Ruíz JC, Hernández I, Muñoz F, Alvarez Blanco A, Pontón J. Cholangitis due to Aspergillus fumigatus in a patient with acute
leukemia. Clin Infect Dis 1998; 26: 228- 229.
4. Rüchel R, Schffrinski M. Versatile fluorescence staining of fungi in clinical specimens by using the optical brightener Blankophor. J
Clin Microbiol 1999; 37: 2694-2696.
5. Albornoz, M.: Campins, H.; Briceño M., T.; Santiago, R.; Yarzabal, L.A. Lecciones de Micología Médica. Caracas 1979. p32. 2
6. Conant, N.: Smith, D.T.; Baker, R.D.: Callaway, J. L.: Martin, D.S. Manual of Clinical Mycology. W.B. Saunders Company. Philadelphia &
London. 2nd Ed. 1962. p333.
7. Da Silva, C. Micología Médica. Ed. Sarvier. 1984. p405. 8. C
8. Clinical Laboratory Standards Institute. Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts. Approved Guideline,
M44-A. 2004. Wayne, Pa.
9. Cuenca-Estrella M, Gomez-Lopez A, Mellado E, Rodriguez-Tudela JL. Correlation between the procedure for antifungal susceptibility
testing for Candida spp. of the European Committee on Antibiotic Susceptibility Testing (EUCAST) and four commercial techniques.
Clin Microbiol Infect 2005; 11:486-492.
10. RNegroni, L.Guelfand, M.C.Perrone. MANUAL DE MEDIOS Y REACTIVOS DEL LABORATORIO DE MICOLOGIA 2008. Pág. 6
11. De Magalhaes-Lima K, Machado-Barbosa de Castro CM, Fonseca Nogueira CII, Carvahaes de Oliveira J, Delgado M, Sette de Melo RR.
Hongos filamentosos no dermatofitos: onicomicosis en cuatro pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana. Rev
IberomMicol 2008; 25:49-45.
12. Garg A, Venkateshk V, Singh M, Pathak KP, Kaushal GP, Agrawal SK. Onychomycosis in central India: a clinicoetiologic correlation. Int
J Dermatol 2004; 43:498-502.
13. Salas-Campos I, Gross-Martínez N, Carrillo-Dover P. Micosis superficiales diagnosticadas en el laboratorio de micología médica de la
Universidad de Costa Rica. Rev Costarricense de Ciencias Médicas 2007; 28(1,2): 29-35.
14. J. Alexandro Bonifaz Trujillo. Micología Médica Básica. 4a cuarta edición. | McGraw-Hill 2012, Español.
15. Roberto Arenas, Cuarta Edición de Micología Médica Ilustrada, Editorial McGraw-Hill 2011, Españo.l
