cardiac manifestations in auto-immune diseases by Dr Silini.pptx
Lerat h parthogénèse 2014
1. PATHOGENÈSE DES LÉSIONS
HÉPATIQUES DU VHC :
Mécanismes moléculaires
Dr. Hervé LERAT, PhD.
INSERM U955
Département de Virologie Moléculaire et Immunologie
Physiopathologie et Thérapeutique des Hépatites Virales Chroniques (Pr. Pawlotsky)
Hôpital Henri Mondor, Créteil, France.
3. Hépatocarcinomes viro-induits :
rôle direct et/ou indirect des protéines virales?
Infection VHC
Réponse immunitaire de l’hôte
Protéines virales
Lésions
hépatiques
Cirrhose
?
CANCER
5. Modèles animaux pour l’étude des
pathologies induites par le VHC
Modèles d’infection
Primates non-humains
Chimpanzé
Ouistiti
Problème de disponibilité et de coût.
6. core E1
E2
NS2
NS3
NS4a
Promoteur Albumine
p7
Modèle in vivo de souris transgéniques pour le VHC (FL-N/35)
NS4b NS5a
NS5b
SV40 PolyA
Génotype 1b
micro-injections
C57Bl6J x C3H/HeJ
FOIE
ADN HCV +
X C57BL6J ou C3H
ARN VHC +
Lerat et al., Gastroenterology 2002
FL-N/35
FL-N
7. core E1
E2
NS2
NS3
NS4a
Promoteur Albumine
p7
Modèle in vivo de souris transgéniques pour le VHC (FL-N/35)
NS4b NS5a
NS5b
FL-N
SV40 PolyA
Génotype 1b
micro-injections
C57Bl6J x C3H/HeJ
CHC
FOIE
Stéatose
ADN HCV +
X C57BL6J ou C3H
ARN VHC +
+CCl4
fibrogenèse
Lerat et al., Gastroenterology 2002
8. CHC induit par le VHC:
Mécanismes Moléculaires?
Rôle direct des protéines virales?
10. Inhibition de la voie apoptotique FAS dans le foie des souris VHC
FasL
Membrane cellulaire
Fas
VHC (NS5A)
calpaïne
mitochondrie
caspase 8
Bid
cytochrome C
caspase 3
Etape vers le
cancer
APOPTOSE
caspase 9
CIDE-B
fragmentation ADN
VHC
(NS2)
11. Lésions de l’ADN – La famille GADD
GADD34
GADD153
GADD45a
GADD45g
GADD45b
Senseurs de stress
G0
M
CyclinB1
Lésions de
l’ADN
GADD45β
G1
G2
Cdc2
S
Q
VHC
Histone H3
Histone H1
Lamine
P
P
P
Arrêt du cycle
cellulaire (G2/M)
Les protéines du VHC induisent la méthylation du promoteur de GADD45β:
inhibition de sa transcription : évasion du point de contrôle.
12. Effects of c-Myc over-expression
G0
M
Abnormal
G1-S progression
ROS production
(reactive oxygen species)
VHC
G1
S
c-Myc
c-Myc c-Myc
c-Myc
Genomic instability
DNA damage
SSB
G2
DSB
Normal
Cancer
13. Signalling events activating Akt – Downstream effects
Human
hepatoma cells
Mice
wt
p=0.02
300
FL-N/35
p=0.02
250
Relative Akt activity (%)
Relative Akt acitvity (%)
250
200
150
100
50
200
150
100
50
Hepatic lysates
Primary cells
p = 0,006
200
p = 0.003
100
0
0
0
300
p = 0.01
P-AKT/total AKT (EtOH = 100%)
300
Human liver
400
Huh7 Huh7
+ SGR
EtOH
HBV +
HCV +
Non-tumoral tissue
AKT is activated in the context of HCV infection and HCV protein expression.
Higgs et al. Oncogene, 2013
24. HCV, liver fibrosis and regeneration:
HCV infection
HCV protein
expression
Hepatocyte
cell cycle
perturbation
?
DNA
damage
Higgs et al. Cancer Research, 2010
Chouteau et al. J Hepatol 2012
Higgs et al. Oncogene, 2013
25. HCV, liver fibrosis and regeneration:
HCV
ROS
ATM
P
p53
Chk 2
ATR
Chk 2
P
Chk 1
Chk 1
Degradation
P
p21
p53
cdc25a
cdc25a
Ub
Ub
Ub
P
Cyclin E
Rb
Cdk2
Rb
E2F
E2F
S phase genes
(Cyclin A)
Delayed
The modulation of the oxidative stress-DNA damage-cell cycle axis by HCV protein expression results in a
delayed G1/S phase.
26. Conclusions
Modèle reproduisant les principales pathologies induites par le
VHC
Niveau d’expression similaire à l’infection chronique chez l’homme
Absence de réponse immunitaire (pas d’inflammation ni de cirrhose)
La cirrhose n’est pas un pré requis au développement de CHC :
en accord avec données cliniques (méta-analyse, Maisonneuve
2009)
Démonstration d’effets cytopathiques directs des protéines
virales en absence de cirrhose.
Inhibition de l’apoptose (voie FAS)
Inhibition de l’expression du suppresseur de tumeur GADD45β
Stimulation de l’expression de l’oncogène c-myc
Activation de la kinase AKT
Inhibition de la sécretion des VLDL (MTP)
Stimulation de la lipogenèse
Fibrogenèse associée à une réaction ductulaire due à une inhibition de
la prolifération hépatocytaire (ROS, lésion de l’ADN)
27. PERSPECTIVES:
Co-morbidity (non-viral) factors in virally-induced HCC
•
Main objective: To induce liver inflammation in HCV mice. HCC incidence?
MCD or DIO
FLN/35 or HLE mice
HCC incidence
and mechanisms
Mdr2 KO
FLN/35 or HLE mice