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Salmonella



Introducción.
Características microbiológicas.

       El género Salmonella se incluye en la familia Enterobacteriaceae, integrada
por bacilos Gram negativos anaerobios facultativos. Poseen, por lo tanto, las
características generales de las enterobacterias: son fermentadores de la glucosa,
catalasa positivo, oxidasas negativo y suelen ser móviles; representa una
excepción Salmonella Gallinarum, siempre inmóvil.

       La nomenclatura de Salmonella es compleja. Se han usado diferentes
sistemas para referir a este género. Teniendo en cuenta que estas bacterias
tienen una muy importante homología general de su ADN, deberían ser
caracterizadas como dos únicas especies.(1)(2) Esta propuesta, formulada por Le
Minor y Popoff en la década de los ochenta, no ha sido completamente aceptada.
No obstante, y teniendo en cuenta la necesidad de uniformizar la comunicación
entre los distintos actores (médicos, veterinarios, químicos, etc.), la mayoría ha
optado por seguir una antigua propuesta de Kaufmann, con las más recientes
modificaciones (formuladas desde el Centro de Referencia colaborador de la
OMS, en el Instituto Pasteur); así, se divide el género en dos especies: Salmonella
enterica y Salmonella bongori, diferenciables entre sí por características
metabólicas tales como la hidrólisis del ONPG, el crecimiento en presencia de
KCN y otras.

        Salmonella enterica se subdivide, a su vez, en seis subespecies: enterica
(I), salamae (II), arizonae (IIIa), diarizonae (IIIb), houenae(IV), e indica (VI) que
corresponden a los antiguos subgéneros. Estas subespecies son diferenciables
bioquímicamente. (3) (4)

      Como todas las enterobacterias, el género Salmonella tiene tres tipos de
antígenos: somático (O), flagelar (H) y de envoltura, para Salmonella (Vi).

     Los antígenos somáticos son termoestables y su especificidad radica en el
componente polisacárido de la endotoxina, complejo proteína- lipopolisacárido.

       Los antígenos O se clasifican en mayores y menores; los mayores son los
que definen un grupo antigénico. Así, el factor antigénico 0:4 caracteriza el antiguo
grupo B, hoy llamado O:4, mientras que los antígenos menores tienen menor valor
discriminativo. Por ejemplo, el antígeno O:12 lo presenta toda Salmonella
perteneciente a los grupos A, B y D. Pueden encontrarse otros antígenos
menores generados por modificaciones químicas o por conversiones fágicas.



                                                                                  18
Los antígenos capsulares o de envoltura sólo lo presentan algunos
serotipos de Salmonella (Typhi y Dublin).

       Los antígenos flagelares son proteicos y termolábiles. Algunos serovars
sólo producen un único tipo de antígeno H, siendo, en consecuencia,
monofásicos. Sin embargo otros serotipos pueden producir alternativamente dos
tipos de antígenos H, por lo que se denominan bifásicos.

       Mediante el uso de reacciones antígeno anticuerpo se determina la fórmula
antigénica de una cepa y, a partir de dicha fórmula, se la clasifica en serovar o
serotipo siguiendo el esquema propuesto originalmente por Kauffman y White (que
agrupa todas las serovariedades conocidas, mas de dos mil quinientos).(4)


Nomenclatura.

        La nomenclatura recomendada por el Centro Colaborador O.M.S.
(empleada por el Centro Nacional de Salmonella) consiste en denominar una cepa
con fórmula antigénica 9,12: gm:- como Salmonella enterica subesp. enterica
serovar Enteridis. Sin embargo, dado que la controversia aún no ha sido resuelta,
es aceptable desde el punto de vista científico emplear una nomenclatura
simplificada, por ejemplo, Salmonella Enteritidis; así, esta denominación es
utilizada en muchas publicaciones y en los informes clínicos de los laboratorios de
Microbiología médica.(3)

       A fin de enfatizar que los serotipos no corresponden a especies o
subespecies distintas no se los escribe con letra itálica y sus nombres comienzan
con mayúscula. En un principio, se utilizaron nombres representativos, por
ejemplo, del origen geográfico donde el serotipo fue aislado por primera vez
(Salmonella Montevideo), o el del proceso infeccioso donde se aisló (S.Abortus-
ovis). Esta tradición ha quedado restringida a aquellas cepas pertenecientes a la
subespecie enterica. Cuando se trata de aislamientos correspondientes a las
demás subespecies, al igual que para S.bongori, se les designa por su fórmula
antigénica.(3)

       Salmonella enterica subespecie enterica agrupa a la mayoría de las
bacterias de este género que se asocian con animales de sangre caliente y con el
hombre, mientras que las demás subespecies y también S.bongori son habitantes
del ambiente y se asocian con animales de sangre fría.

       La mayoría de las bacterias incluidas en la subespecie enterica presentan
un conjunto de características metabólicas comunes. Fermentan glucosa con
producción de gas y también manitol, sorbitol y otros carbohidratos, pero no
lactosa ni sacarosa. Utilizan habitualmente citrato como única fuente de carbono
pero no malonato, lo que las diferencia de otras subespecies como arizonae. Su
fermentación es de tipo ácido mixta, con reacción negativa de Voges-Proskauer.
Son en general productoras de ácido sulfhídrico, y son ureasa y fenilalanina

                                                                                19
desaminasa negativas; descarboxilan orinitina y lisina. Son capaces de sobrevivir
durante muchos años en substratos simples manteniéndolas en lugar oscuro a
temperatura ambiente, y en recipiente cerrado.

      Dentro de la misma subespecie existen diferencias bioquímicas, por
ejemplo, S.Typhi que no utiliza citrato ni descarboxila ornitina y es débil productor
de ácido sulfhídrico.(5)


Patogenia.

       Salmonella presenta diferencias en cuanto a la especificidad del hospedero;
mientras algunos serovars no tienen una estricta adaptación a un huésped, siendo
capaces de producir enfermedades con diversas características en distintas
especies animales y en el hombre, otros serovars sí son específicos, como
S.Gallinarum para las aves o S.Typhi en el caso del hombre.

      Las Salmonellosis humanas pueden clasificarse en dos grandes grupos:
por un lado, las debidas a serotipos estrictamente humanos, que causan
habitualmente síndromes tifoídicos con presencia de bacterias en la sangre, y las
debidas a serotipos ubicuos, que provocan diarrea, vómitos y fiebre. La duración y
entidad de esta enfermedad es variable, dependiendo del estado general del
huésped, pudiendo ocasionalmente causar enfermedades generalizadas.


Epidemiología

       La Fiebre Tifoidea, la más grave de las Salmonellosis, continúa siendo un
problema mayor en muchos países en vías de desarrollo. Si bien resulta difícil
conocer su real impacto, la OMS estima que, anualmente, se registran diecisiete
millones de casos anuales, con unas seiscientas mil muertes (6).

        En Uruguay la Fiebre Tifoidea es, actualmente, una enfermedad
relativamente controlada.

       Desde 1995, año en que se implementó el programa V.E.T.A (vigilancia de
las enfermedades transmitidas por los alimentos), se ha constatado un aumento
en el número de brotes denunciados; el Departamento de Vigilancia
Epidemiológica del Ministerio de Salud Pública estudió cinco brotes en el año 1995
y cuarenta y un brotes en el año 1999, constatándose en dicho lapso un
predominio de brotes de origen bacteriano, siendo Salmonella sp. el agente más
frecuentemente aislado. Nos extenderemos más sobre esto en los capítulos
referidos a estudio de brotes; pero es interesante observar que este aumento del
número de brotes estudiado podría explicarse teniendo en cuenta los siguientes
factores: la obligatoriedad de la denuncia, la existencia de sub-registros anteriores,
el aumento en la notoriedad de los brotes (circunstancia que sensibiliza al público
y estimula la consulta médica frente a una gastroenteritis).

                                                                                   20
Además de lo anotado, probablemente exista aumento real en los brotes,
reflejado en el incremento del serotipo Enteritidis, responsable en los últimos años,
de la mayoría de aquéllos. Este serovar ha desplazado a Salmonella Typhimurium
como causa más frecuente de infección esporádica o de brotes de enfermedad de
origen alimentario.


Centro Nacional de Salmonella.

       El Centro Nacional de Salmonella recibe cepas aisladas para confirmación
de su identificación y caracterización serológica de laboratorios públicos y
privados, de diagnóstico clínico humano, veterinario y de alimentos de todo el
país; ocasionalmente ha recibido cepas aisladas en otros países de la región.

       Por otra parte, prepara sus propios antisueros hiperinmunes en conejos,
siguiendo las recomendaciones del Centro Colaborador O.M.S. del Instituto
Pasteur de París, con el que mantiene una correspondencia fluida. La misma ha
resultado muy útil frente a dudas y otras consultas, en los últimos años. Además
desde el año 2000 se integra el programa WHO-Salm-surv, que coordinan la
O.M.S., el Danish Veterinary Institute (DVI), el C.D.C y el Instituto Pasteur,
participando desde esa misma fecha, dentro de este programa, de un sistema de
control de calidad (EQAS) coordinado por el DVI.

       Las cepas recibidas para su caracterización son aisladas en medio nutritivo
y con un cultivo puro se confirma su identificación por las pruebas bioquímicas
habituales para el género. Se les realiza triple azúcar hierro, fenilalanina, urea,
Voges Proskauer, gelatina, lisina, arginina y ornitina de Moeller, manitol, maltosa,
sorbitol, dulcitol, adonitol, salicina.

       Con un cultivo en agar tripticasa soya en tubo inclinado se investigan los
antígenos somáticos por aglutinación en lámina, con gérmenes viables. Primero
los antígenos determinantes de grupo y luego de establecido éste, los antígenos
menores. En general se sigue un criterio de conveniencia, que resulta de probar
en primer término los grupos mas frecuentemente aislados: O.4; O:6,7,8; O:9; si
no se obtuviera una aglutinación positiva en esta primera etapa, se sigue con los
antígenos somáticos de grupos menos frecuentes.

       Luego de establecida la fórmula somática se investigan los antígenos
flagelares. Para ello se cultiva la cepa problema en placas de Sven-Gard. Se trata
de un agar nutritivo semisólido, que consiste en caldo nutritivo con el agregado de
7 gramos por litro de agar, en placa de Petri que sin ser invertidas, se siembran
con asa bacteriológica con un punto en el cetro de la placa y se incuban 24 horas
a 35°C. Las bacterias móviles se desarrollan extendiéndose sobre toda la
superficie del medio. La aglutinación se realiza también en placa, con los cultivos
bacterianos recogidos de la superficie y de zonas alejadas de la zona central
donde se sembró. Nuevamente se sigue un criterio de conveniencia, buscando

                                                                                  21
primero los antígenos flagelares de los serotipos mas frecuentes pertenecientes a
ese grupo somático.

       En un cultivo puro, la población de bacterias presente puede no estar
expresando las dos fases flagelares mencionadas, por lo que frecuentemente
debe realizarse una inversión de fases. Nuevamente se recurre a las placas de
Sven-Gard, pero esta vez con el agregado de una gota incluida de suero
hiperinmune contra la fase que la bacteria ya expresó. De esta manera, al verse la
movilidad favorecida por el medio semisólido, la población bacteriana deberá
expresar la otra fase que no está inhibida por el suero hiperinmune y por
aglutinación en lámina podrán detectarse estos antígenos expresados.

       Cuando se quiere demostrar la incapacidad de una bacteria de expresar
otra fase, o cuando estamos frente a una bacteria aparentemente inmóvil, o
cuando no fue suficiente la placa de Sven-Gard para lograr la inducción de la otra
fase de antígenos flagelares, se recurre a los tubos en U. Estos tubos, que son
finas varillas de vidrio a las que les ha dado la forma de una U, pueden inducir la
aparición de fases flagelares no bien expresadas anteriormente. La bacteria es
sembrada en una rama del tubo y, si expresa movilidad, es recogida en la otra
rama del tubo 24 o 48 horas después de una incubación a 35°C. Una vez
recogida, se la cultiva en una nueva placa de Sven-Gard, pudiéndose determinar
el resto de los antígenos flagelares. Si se tratara de una bacteria que no tiene
segunda fase o que es inmóvil, no se observará crecimiento en la otra rama del
tubo.

      El medio de cultivo empleado en el tubo en U es un agar nutritivo
semisólido por el agregado de 3 gramos de agar por litro de caldo nutritivo.

      De esta forma queda establecida la formula antigénica completa, con los
antígenos somáticos mayores y menores, los antígenos flagelares de primera y
segunda fase con todos sus factores.



RESULTADOS DEL CENTRO NACIONAL DE Salmonella Y COMENTARIOS.

       Con el fin de difundir información sobre la frecuencia y características de los
serotipos de las cepas estudiadas en el laboratorio del Centro Nacional de
Salmonella, en forma periódica se realizan comunicaciones.

       Es importante destacar que esta información puede no reflejar exactamente
la presencia o ausencia de determinados serotipos en nuestro país, ya que en
muchos casos de enfermedad gastrointestinal no se solicita una investigación
bacteriológica o las cepas aisladas por los diferentes laboratorios no se envían
para completar su tipificación. Además, debe tenerse presente que no siempre se
logra aislar o identificar el germen en el alimento que origina el brote.


                                                                                   22
Existen estudios sistemáticos en alimentos y en animales que se
corresponden con programas específicos, como por ejemplo, la búsqueda de
Salmonella en huevos llevada a cabo en el Instituto de Higiene durante el año
2001.

       Como resultado de estas investigaciones se registran aumentos en la
cantidad de cepas aisladas, disminuyendo nuevamente esta cantidad al
interrumpirse el programa. Estos descensos no reflejan necesariamente la realidad
epidemiológica, sino que sólo reflejan la suspensión de la búsqueda sistemática.

       Sin embargo, estos estudios han dado una visión de conjunto que, a lo
largo de los años, ha permitido ver un muy interesante comportamiento de los
serotipos.

      La colaboración de los laboratorios en el envío de cepas de origen humano,
animal, o de alimentos, ya sean aquéllos públicos o privados, municipales o
nacionales, ha sido un aporte de fundamental importancia a la hora de conocer el
comportamiento de los diferentes serotipos.

       A su vez, la devolución a los diferentes laboratorios de la información
obtenida ha generado la confianza y el compromiso de todos en la tarea, lo que ha
llevado a un mejor conocimiento del problema en nuestro país y ha permitido
entender los cambios que se han ido produciendo. La comunicación frecuente con
los Servicios de Vigilancia Epidemiológica de los Ministerios de Salud Pública y
Ganadería Agricultura y Pesca, ha facilitado una mejor comprensión de la realidad.

      En nuestro país, al igual que en otras regiones, se verifica una presencia
ocasional de Salmonella Typhi y un aumento de las infecciones transmitidas por
alimentos causadas por otros serotipo de Salmonella.

      Entre los años 1990 a 2000 el Centro Nacional de Salmonella           recibió
únicamente catorce cepas de Salmonella Typhi.

       En Uruguay S. Enteritidis se aisló esporádicamente hasta 1994 en seres
humanos, animales y alimentos. En el año 1995 se confirmó el primer brote de
dimensiones considerable causado por este serotipo que afectó a un importante
número de personas, distribuidas en una amplia área geográfica. A partir de este
suceso     el germen comenzó a aislarse con mayor frecuencia; en 1996,
S.Enteritidis representó el 10% de las cepas recibidas en el laboratorio del Centro
Nacional de Salmonella, siendo el segundo serotipo mas frecuente luego de
Typhimurium, esta proporción aumentó y a partir de 1997 pasó a ser el serotipo
mas frecuente, hasta situarse durante el año 2000, en el 79.6% del total de cepas
estudiadas. Figura 1. Es importante destacar la menor variedad de serotipos
aislados, en el último periodo, a pesar del aumento de cepas tipificadas.




                                                                                23
EVOLUCION DE TYPHIMURIUM Y ENTERITIDIS
                              1990 – 2000
                               Figura 1.



      200

                       Enteritidis        Typhimurium

      150



      100



       50



        0
          90

               91

                    92

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                                                               00
                                                            20




       En una primera comunicación, (7) se analizó el periodo 1975 – 1988, con un
total de 589 cepas. El serotipo mas frecuente fue Typhimurium, presentando
algunas variaciones según los orígenes y los años. En la tabla 1. se describen los
serotipos encontrados en este periodo, según origen.


                                                                               24
FRECUENCIA DE LOS DIFERENTES SEROTIPOS
                            SEGÚN ORIGEN 1975 –1988
                                     Tabla 1.

SEROTIPO HUMANOS        ALIMENTOS   ANIMALES   AMBIENTE   ALIMENTO   TOTAL
                                                          PARA
                                                          ANIMALES
Typhimurium    158      4           8          11                    181
Oranienburg    44                              14                    58
Agona          28       7           2          15         3          55
Panama         15                   1          30                    46
Newport        27       9           2          5                     43
Kunzendorf     30       1           8                                39
Anatum         4        9                      18                    31
Derby          19       7                                            26
Muenchen       19       1           5                                25
Montevideo     11       2                      9          3          25
Give           4                               6          2          12
Dublin                              10                               10
Brandenburg                                    4                     4
Bredeney                                       4          1          5
Senftenberg             2                      1          2          5
Sandiego       1                    1          1                     3
Meleangridis   2        1                                            3
Saintpaul      3                                                     3
Tennessee                                                 2          2
Gallinarum                          2                                2
Haardt         2                                                     2
4,12:-;-       2                                                     2
Stanley        1                                                     1
Minnesota                                                 1          1
Salinatis                                      1                     1
Virginia       1                                                     1
Menston                                                   1          1
Paratyphi B    1                                                     1
13:-:-         1                                                     1
TOTAL          373      43          39         119        15         589


      Es interesante observar las variaciones de ciertos serotipos. Typhimurium,
como fue mencionado, el serotipo más frecuente durante muchos años,
permanece mas o menos constante, aislándose de muestras humanas, de
animales, de alimentos y del ambiente. Otros serotipos aparecen y desaparecen
en diferentes períodos, mostrando una coincidencia llamativa como Derby y

                                                                             25
Newport, que se aíslan de muestras humanas y de alimentos en forma simultánea.
(Figuras 2 y 3). Es difícil determinar una relación causa – efecto en momentos en
que no se realizaban estudios sistemáticos de las enfermedades trasmitidas por
alimentos. Igualmente no dejan de llamar la atención estas coincidencias.


          VARIACIONES DE DIFERENTES SEROTIPOS 1975 -1988




          20




               Humanas          Alimentos




           0
               75/76   77/78   79/80   81/82   83/84   85/86   87/88

                           Salmonella Derby 1975-1988
                                       Figura 2.




                                                                              26
20




             Humanas       Alimentos




0
     75/76    77/78     79/80     81/82   83/84    85/86   87/88

                       Samonella Newport 1975 – 1988
                                 Figura 3.




                                                                   27
En el periodo 1989 – 1995, analizado en segundo término, (8) se estudiaron
370 cepas provenientes de 34 laboratorios de todo el país. El origen de las
mismas se describe en la tabla 2.



                        ORIGEN DE SEROTIPOS TIPIFICADOS
                                   1989 – 1995
                                     Tabla 2.


                 ORIGEN                                     N°
                 HUMANOS                                   238
                 ALIMENTOS                                 15
                 ANIMALES                                   75
                 ALIMENTO PARA ANIMALES                    38
                 AMBIENTE                                   4
                 TOTAL                                     370




       Se tipificaron 42 serotipos diferentes. La distribución anual de estos
serotipos se describe en la tabla 3.

      En todos los años, salvo 1989 y 1995 el serotipo más frecuente fue
Typhimurium. En 1989 lo fue Panamá (20/51), relacionado a un brote de infección
hospitalaria, fundamentalmente bacteriemias en el Servicio de Recién Nacidos del
Hospital Pereira Rossell.

       En 1995 el serotipo Enteritidis fue el más frecuente (60/125) en relación a
varios brotes de infecciones trasmitida por alimentos.

       De las 103 cepas de Typhimurium estudiadas en este periodo, 59 eran de
origen humano, 41 animal y 3 aisladas de alimentos.

       De las 68 cepas de Enteritidis aisladas, 62 provenían de muestras humanas
y 6 de alimentos. La mayor variedad de serotipos se encontró en los alimentos
para animales. A algunos de ellos se los podría llamar “exóticos”, ya que no se los
ha encontrado en relación con enfermedad en el hombre o en animales en nuestro
medio. De todas maneras evidencian una amplia diseminación de Salmonella que
no se corresponde con enfermedad, probablemente debido a dosis infectantes
muy bajas que no llegan a dar enfermedad clínicamente detectable o carencia de
algunos atributos de virulencia en algunos serotipos, o ambas causas. Serotipos
tales como Tennessee, Mbandaka y Fyris son algunos de ellos.



                                                                                28
FRECUENCIA DE SEROTIPOS
                                1989 – 1995
                                  Tabla 3.
SEROTIPO        1989   1990   1991   1992   1993   1994   1995   TOTAL
Typhimurium     14     18     12     12     20     11     16     103
Enteritidis     2                           1      5      60     68
Panama          20     3      3      1      2      9             38
Kunzendorf      3      2      7      2      5      5      5      29
Montevideo             1                    2      12     3      18
Newport         1      2                    2      4      4      13
Agona                  1             2      1      4      5      13
Dublin          3                           2             2      7
Senftenberg                          1             2      3      6
Livingstone                                        1      5      6
“rugosa”                      1             1      3      1      6
Muenchen                      1      1      2             1      5
Meleangridis    2      1                           1             4
Derby                  1      1      2                           4
Cerro                                              2      2      4
London                 1      1             1                    3
Menston                                                   3      3
Give                                                      3      3
Tennessee                                                 3      3
8,20:z4,z23:-                        1      1      1             3
Infantis                      1                           1      2
Oranienburg                   1             1                    2
Heidelberg                    2                                  2
Catanzaro                                          1      1      2
Fyris                                              1      1      2
Anatum                                             2             2
Mbandaka                                                  2      2
9,12:-:-        2                                                2
Gallinarum      1                                                1
Miami           1                                                1
SubspIIIb                     1                                  1
Hadar                                1                           1
Sandiego                             1                           1
Saintpaul                                          1             1
Bredeney                                           1             1
Havana                                                    1      1
Concord                                                   1      1
Glostrup                                                  1      1
4,12:-:1,2                           1                           1
6,7:-:1,2       1                                                1
6,7:k:-                                                   1      1
3,10:-:-                      1                                  1
13:d:-          1                                                1
TOTAL           51     30     32     25     41     66     125    370




                                                                         29
En el período comprendido entre 1996 y 1999 (9) se estudiaron 525 cepas
provenientes de 39 laboratorios del país. 313 cepas fueron de origen humano, 74
de animales, 36 de alimentos, 95 de alimentos para animales y 7 de origen
desconocido. Se tipificaron 29 serotipos diferentes. En 1996 se estudiaron 90
cepas, en 1997 lo fueron 102 cepas, 119 cepas en 1998 y 214 cepas en 1999. Al
inicio de este periodo, al igual que en la mayoría de los años anteriores,
Typhimurium fue el serotipo más frecuente, siendo sustituido por Enteritidis desde
1997.

       En el año 2000, se tipificaron 239 cepas, 163 Enteritidis, 34 Typhimurium y
42 pertenecientes a otros serotipos, pero llamativamente sólo se tipificaron
Enteritidis y Typhimurium de origen humano, mostrando ese año un claro
predominio de estos serotipos como agentes de enfermedad en el hombre. De un
total de 178 cepas aisladas de muestras humanas 152 fueron Enteritidis y 26
Typhimurium, siendo Enteritidis el serotipo más frecuente con un porcentaje de
aislamientos muy elevado (85%)

      En la Tabla 4 se muestran los diferentes serotipos tipificados en el período
1996 – 2000.

                               Serotipos aislados
                                 (1996 – 2000)
                                    Tabla 4.

           SEROTIPO          Nº              SEROTIPO              Nº
       Enteritidis          432        Essen                       2
       Typhimurium          154        Djugu                       2
       Montevideo            34        Livingstone                 2
       Agona                 27        London                      2
       Anatum                13        Virginia                    1
       Newport               12        Heidelberg                  1
       Havana                 8        Putten                      1
       Senftenberg            8        Reading                     1
       Give                   7        Congo                       1
       Catanzaro              5        Rissen                      1
       Glostrup               4        Westhampton                 1
       Dublin                 4        Berta                       1
       Oranienburg            4        Virchow                     1
       Typhi                  4        13:-:-                      1
       Fyris                  3        9.12:-:-                    7
       Canada                 3        18:z4?:-                    6
       Panama                 3        13:y:-                      1
       Gallinarum             2        Cepas rugosas               3
       Infantis               2
                                  TOTAL     764

                                                                               30
Es interesante analizar los datos obtenidos para Salmonella Entritidis y
Typhimurium en este último periodo.(Tabla 5). Typhimurium, con pequeñas
oscilaciones permanece constante, entre 22 y 48 aislamientos anuales, siendo en
1996 el serotipo mas frecuente. También se observan pocas variaciones en otros
serotipos que globalmente van de 24 a 53 cepas.

                   Principales serotipos. Distribución anual
                                 1996 – 2000
                                   Tabla 5.
                    1996        1997         1998        1999           2000
Typhimurium          48          22           23          27             34
 Enteritidis         10          27           72          160           163
   Otros             32          53           24          27             42
     Total           90         102          119          214           239


       Merece especial mención Salmonella Enteritidis, que como fue descrito,
desde mediados de la década pasada emergió en nuestro país como un
importante problema de Salud Pública, esto se ha relacionado con el consumo de
productos avícolas contaminados, crudos o insuficientemente cocidos (carne,
huevos).

      Parece evidente la relación entre este aumento y los cambios en las
costumbres de la población, tales como el hábito de comer fuera del hogar, la
ingesta de alimentos preelaborados o preparados en grandes cantidades, o la
comercialización masiva de algunos tipos de alimentos.

       En todo el mundo, en particular en los países desarrollados en la década
del 80 Salmonella Enteritidis, planteó un serio problema para las poblaciones que
buscaban la seguridad en el consumo de alimentos y consecuentemente para los
productores de estos que se vieron enfrentados a dificultades inesperadas. En la
Figura 4. se observa la evolución de la enfermedad producida por Salmonella en
U.S.A. en los últimos 30 años. (10 ) El aumento de S.Enteritidis observado, con
una tasa de 0.55/100.000 en 1976 que aumentó a 3.88/100.000 en 1995 obligó a
intervenciones que comienzan a ser evaluadas. (11)

       Por otra parte, y como comentario adicional, antes de volver sobre el
problema de S.Enteritidis, es interesante observar como el aumento de número de
casos en relación a brotes de dimensiones impresionantes, pueden hacer variar
cifras en una forma increíble como sucedió en U.S.A. en 1985 con el serotipo
Typhimurium y se muestra en las figuras 4 y 5.

       En la tabla 6. se describe el número de casos de enfermedad por
S.Enteritidis en años seleccionados en el Reino Unido, es fácil observar el
aumento del número hasta 1993 y su disminución luego de la implementación de
múltiples medidas, inclusive la vacunación del plantel avícola.(12)

                                                                               31
Salmonellosis en U.S.A. 1969 – 1999
                       Figura 4




Salmonella. Aislamientos por serotipo y por año en U.S.A.
                      1974 – 1999
                       Figura 5.




                                                            32
S.Enteritidis en el Reino Unido
                               Número de casos.
                            Años seleccionados(11)
                                     Tabla 6.

                          Año            N° de casos
                          1969           151
                          1970           913
                          1971           651
                          1980           879
                          1983           1774
                          1987           6858
                          1988           15427
                          1993           17371
                          1999           6700




      El franco predominio de Salmonella Enteritidis que se registra en Uruguay
no es un caso aislado en América Latina.

        En un estudio retrospectivo, realizado en colaboración con laboratorios de
la región, fueron revisados los serotipos de Salmonella tipificados en los Centros
de Referencia de cada país durante el año 2000. De un total de 9402 cepas
tipificadas, S.Enteritidis es por lejos, el serotipo predominante en todos los países
y en todos los tipos de aislamientos, ya sean humanos, de animales, de alimentos
para seres humanos, de alimentos para animales y del ambiente. Figura 6.

      El 80% de las cepas de animales fueron aisladas de aves de granja. El 51%
de las cepas de alimentos, de un total de 1577 cepas tipificadas provenían de
aislamientos de parrilleros y el 25% de éstas eran S.Enteritidis. El 1% de los
aislamientos de alimentos eran de huevo, siendo más del 60% S.Enteritidis; 5%
provenían de alimentos preparados, siendo más del 40% S.Enteritidis.(13)

       La contribución a este estudio producida por cada país fue muy dispar,
explicado parcialmente por las diferencias en superficie y población de cada uno
de ellos, aunque esto no siempre fue determinante. Seguramente también
incidieron en los diferentes aportes, políticas nacionales o regionales de estudio de
brotes, o políticas de mercado por ejemplo: países exportadores de alimentos, que
deben cumplir determinados requisitos de los compradores.




                                                                                  33
Los más frecuentes serotipos por fuente de aislamiento.
                 WHO Salm-surv South America Working Group.(12)
                                     Figura 6.

                 100

                  80
          Percentage
          of      60
          Salmonella
          strains 40
          serotyped
                  20

                    0

                          HUMAN        ANIMAL        FOOD        FEED         Env


               Ns=2476            Ns=2297        Ns=1577          Ns=2007           Ns=1045



                  S.Enteritidis      S.Enteritidis    S.Enteritidis   S.Enteritidis    S.Enteritidis
                  S.Typhimurium      S.Heidelberg     S.Typhimurium   S.Rissen         S.Heidelberg
                  S.Typhi            S.Typhimurium    S.Agona         S.Senftenberg    S.Agona


        Ns= number of Salmonella strains




       En Estados Unidos y Reino Unido se han tomado medidas que
contribuyeron a la disminución del número de casos debidos a Salmonella
Enteritidis. Entre éstas se destacan la participación en los programas de control de
calidad del huevo en la granja, la mejora en las prácticas de preparación de
alimentos, la educación de los manipuladores de alimentos y, en el caso de Reino
Unido, la vacunación de los planteles aviares.

       En la Conferencia Internacional de Enfermedades Infecciosas Emergentes,
en Atlanta, marzo del 2002, Mumma, G.A. y colaboradores del CDC, (11)
presentaron evidencias de la efectividad de los Programas de Control de Calidad
del Huevo para mitigar las infecciones por S. Enteritidis en U.S.A., la refrigeración
obligatoria del huevo de la granja a la mesa y las investigaciones de trazabilidad
probablemente juegan un papel fundamental y recomiendan su continuidad y
expansión.



                                                                                         34
Por otra parte en la misma conferencia Adak G.K. y colaboradores del
PHLS del Reino Unido (14) valoran positivamente el impacto sobre la Salud que
tuvo la introducción de la vacunación de los planteles de aves iniciada en 1996 en
esa región.

       Estos esfuerzos realizados y el comienzo de la visualización del éxito en el
control de S.Enteritidis, no dejan descansar a los investigadores, microbiólogos y
epidemiólogos, que asisten desde hace muy poco a un aumento alarmante de la
presencia de un fago tipo de S.Typhimurium el DT 104, con una marcada
resistencia a los antimicrobianos. (15) Por otra parte S.Newport multiresistente
está siendo aislada frecuentemente en brotes en varios estados de U.S.A. y
Argentina.(16) (17) (18)


       Aunque en nuestro país todavía no asistimos a la aparición de cepas con
características similares, no sería de extrañar su próxima emergencia, dado el uso
indiscriminado de antimicrobianos, para el tratamiento de enfermedades en el
hombre y los animales, pero también como estimulo en la producción animal en
todo el mundo.

       El accionar de Dinamarca con el control del uso de antimicrobianos en la
producción de alimentos, aunque muy distante de nuestras posibilidades, no deja
de ser un ejemplo a tener presente. (19)

        Siguiendo esta línea de acción, la prevención de estas enfermedades
transmitidas por los alimentos implica la adopción de nuevos procedimientos de
seguridad, que deberían involucrar el trabajo conjunto de organismos reguladores,
la industria y los productores, en un esfuerzo orientado hacia el mismo objetivo:
lograr alimentos más seguros para nuestras poblaciones.




Referencias bibliográficas.

1. Le Minor L, Popoff MY: Request for an opinion. Designation of Salmonella
   enterica sp. nov. nom., rev. as the type and only species of the genus
   Salmonella. Int J Syst Bacteriol 1987;37: 465 – 468

2. Reeves MW, Evins Gm, Heiba AA, Plikaytis BD Farmer JJ 3rd. Clonal nature of
   Salmonella Typhi and its genetic relatedness to other Salmonella as shown by
   multilocus enzyme electrophoresis, and proposal of Salmonella bongori
   com.nov. J Clin Microbiol 1989; 27(2): 313 – 320.



                                                                                35
3. Brenner FW, Villar RG, Angulo FG, Tauxe R, Swamiathan B. Guest
   commentary. Salmonella nomeclature. J Clin Microbiol 2000; 2465 –2467.

4. Popoff MY, Le Minor L: Formules antigeniques des serovars des Salmonella.
   WHO collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella. Institut
   Pasteur, Paris, 2001.

5. Ewing WH. Identification of Enterobacteriaceae. 4th. ed.   Elsevier, 1986

6. Typhoid Fever. WHO Fact Sheet N149. March 1997; http://www.who-int/inf-
   fs/en/fact149.html [consulta: 9 abril 2002]

7. Algorta G, Pivel de Gómez L, Montano de Ferla A, Bello de Moreira N. Origen y
   distribución de serotipos de Salmonella. 1975 – 1988. Jornadas Rioplatenses
   de Microbiología. Montevideo. 1989

8. Algorta G, Gazzo N, Bello de Moreira N, Montano A. Origen y distribución de
   serotipos de Salmonella. 1989 – 1995. 3er. Encuentro Nacional de
   Microbiólogos. Montevideo. 1996

9. Martínez A, Torres ME, Macedo M, Algorta G. Origen y distribución de
   serotipos de Salmonella. 1996 – 1999. XIV Congreso Latinoamericano de
   Patología Clínica. Montevideo. 2000

10. Graphs and Maps for Selected Notifiable Disease in the United States. MMWR
    2001 April 6; 48 (53) :17 – 82.

11. Mumma GA, Griffin PM, Meltzer MI, Braden CR, Tauxe RV. Evidence of
    Effectiveness of Egg Quality Assurance Programs, Mandatory Refrigeration,
    and Traceback Investigations To Mitigate Egg-Associated Salmonella
    Enteritidis Infections in the United States. International Conference on
    Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002.

12. Ward LR, Threrlfall J, Smith HR, O´Brien SJ. Salmonella Enteritidis Epidemic
    (carta). Science 2000 March 10; 287 (5459): 1753-4.

13. WHO Global Salm-Surv South America Working Group, WHO Global Salm-
    Surv. A WHO Global Salm-Surv Retrospective Study Examining Salmonella
    Serotypes in South America, 2000: Dominance of Salmonella Serotype
    Enteritidis. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta,
    2002.

14. Adak GK, Long SM, O´Brien SJ, Ward LR. Health Impact of the Salmonella
    enterica Serotype Enteritidis Phage Type 4 Epidemic. International Conference
    on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002.



                                                                                36
15. Threlfall EJ. Epidemic Salmonella Typhimurium DT 104 a Truly International
    Multiresistant clone. J Antimicrob Chemother 2000 Jul; 46(1): 7-10.

16. Smith K, Brender J, Stenzel S, Lindeman C, Adams J, Leano F. Comparison of
    Animal and Human Multidrug-Resistant Isolates of Salmonella Newport in
    Minnesota. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta,
    2002.

17. Pichel MG, Castaneda MC, Caffer MI, Monzon MC, Merino LA, Binsztein N.
    Molecular Epidemiology of an Outbreak Caused by Salmonella enterica serovar
    Newport in Argentina. International Conference on Emerging Infectious
    Diseases, Atlanta, 2002.

18. McCombs K.G.,Thomas S.M.,Segler S.D. , Bates M. R., Lee K. E., MacKenzie
    W.R., Lance-Parker S. Salmonella Newport in Georgia, 1998-2000.
    International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002.

19. Wegener HC. Integrated Surveillance and Control of Emerging Foodborne
    Diseases – The Successful Danish Experience. International Conference on
    Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002




                                                                              37

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Salmonella

  • 1. Salmonella Introducción. Características microbiológicas. El género Salmonella se incluye en la familia Enterobacteriaceae, integrada por bacilos Gram negativos anaerobios facultativos. Poseen, por lo tanto, las características generales de las enterobacterias: son fermentadores de la glucosa, catalasa positivo, oxidasas negativo y suelen ser móviles; representa una excepción Salmonella Gallinarum, siempre inmóvil. La nomenclatura de Salmonella es compleja. Se han usado diferentes sistemas para referir a este género. Teniendo en cuenta que estas bacterias tienen una muy importante homología general de su ADN, deberían ser caracterizadas como dos únicas especies.(1)(2) Esta propuesta, formulada por Le Minor y Popoff en la década de los ochenta, no ha sido completamente aceptada. No obstante, y teniendo en cuenta la necesidad de uniformizar la comunicación entre los distintos actores (médicos, veterinarios, químicos, etc.), la mayoría ha optado por seguir una antigua propuesta de Kaufmann, con las más recientes modificaciones (formuladas desde el Centro de Referencia colaborador de la OMS, en el Instituto Pasteur); así, se divide el género en dos especies: Salmonella enterica y Salmonella bongori, diferenciables entre sí por características metabólicas tales como la hidrólisis del ONPG, el crecimiento en presencia de KCN y otras. Salmonella enterica se subdivide, a su vez, en seis subespecies: enterica (I), salamae (II), arizonae (IIIa), diarizonae (IIIb), houenae(IV), e indica (VI) que corresponden a los antiguos subgéneros. Estas subespecies son diferenciables bioquímicamente. (3) (4) Como todas las enterobacterias, el género Salmonella tiene tres tipos de antígenos: somático (O), flagelar (H) y de envoltura, para Salmonella (Vi). Los antígenos somáticos son termoestables y su especificidad radica en el componente polisacárido de la endotoxina, complejo proteína- lipopolisacárido. Los antígenos O se clasifican en mayores y menores; los mayores son los que definen un grupo antigénico. Así, el factor antigénico 0:4 caracteriza el antiguo grupo B, hoy llamado O:4, mientras que los antígenos menores tienen menor valor discriminativo. Por ejemplo, el antígeno O:12 lo presenta toda Salmonella perteneciente a los grupos A, B y D. Pueden encontrarse otros antígenos menores generados por modificaciones químicas o por conversiones fágicas. 18
  • 2. Los antígenos capsulares o de envoltura sólo lo presentan algunos serotipos de Salmonella (Typhi y Dublin). Los antígenos flagelares son proteicos y termolábiles. Algunos serovars sólo producen un único tipo de antígeno H, siendo, en consecuencia, monofásicos. Sin embargo otros serotipos pueden producir alternativamente dos tipos de antígenos H, por lo que se denominan bifásicos. Mediante el uso de reacciones antígeno anticuerpo se determina la fórmula antigénica de una cepa y, a partir de dicha fórmula, se la clasifica en serovar o serotipo siguiendo el esquema propuesto originalmente por Kauffman y White (que agrupa todas las serovariedades conocidas, mas de dos mil quinientos).(4) Nomenclatura. La nomenclatura recomendada por el Centro Colaborador O.M.S. (empleada por el Centro Nacional de Salmonella) consiste en denominar una cepa con fórmula antigénica 9,12: gm:- como Salmonella enterica subesp. enterica serovar Enteridis. Sin embargo, dado que la controversia aún no ha sido resuelta, es aceptable desde el punto de vista científico emplear una nomenclatura simplificada, por ejemplo, Salmonella Enteritidis; así, esta denominación es utilizada en muchas publicaciones y en los informes clínicos de los laboratorios de Microbiología médica.(3) A fin de enfatizar que los serotipos no corresponden a especies o subespecies distintas no se los escribe con letra itálica y sus nombres comienzan con mayúscula. En un principio, se utilizaron nombres representativos, por ejemplo, del origen geográfico donde el serotipo fue aislado por primera vez (Salmonella Montevideo), o el del proceso infeccioso donde se aisló (S.Abortus- ovis). Esta tradición ha quedado restringida a aquellas cepas pertenecientes a la subespecie enterica. Cuando se trata de aislamientos correspondientes a las demás subespecies, al igual que para S.bongori, se les designa por su fórmula antigénica.(3) Salmonella enterica subespecie enterica agrupa a la mayoría de las bacterias de este género que se asocian con animales de sangre caliente y con el hombre, mientras que las demás subespecies y también S.bongori son habitantes del ambiente y se asocian con animales de sangre fría. La mayoría de las bacterias incluidas en la subespecie enterica presentan un conjunto de características metabólicas comunes. Fermentan glucosa con producción de gas y también manitol, sorbitol y otros carbohidratos, pero no lactosa ni sacarosa. Utilizan habitualmente citrato como única fuente de carbono pero no malonato, lo que las diferencia de otras subespecies como arizonae. Su fermentación es de tipo ácido mixta, con reacción negativa de Voges-Proskauer. Son en general productoras de ácido sulfhídrico, y son ureasa y fenilalanina 19
  • 3. desaminasa negativas; descarboxilan orinitina y lisina. Son capaces de sobrevivir durante muchos años en substratos simples manteniéndolas en lugar oscuro a temperatura ambiente, y en recipiente cerrado. Dentro de la misma subespecie existen diferencias bioquímicas, por ejemplo, S.Typhi que no utiliza citrato ni descarboxila ornitina y es débil productor de ácido sulfhídrico.(5) Patogenia. Salmonella presenta diferencias en cuanto a la especificidad del hospedero; mientras algunos serovars no tienen una estricta adaptación a un huésped, siendo capaces de producir enfermedades con diversas características en distintas especies animales y en el hombre, otros serovars sí son específicos, como S.Gallinarum para las aves o S.Typhi en el caso del hombre. Las Salmonellosis humanas pueden clasificarse en dos grandes grupos: por un lado, las debidas a serotipos estrictamente humanos, que causan habitualmente síndromes tifoídicos con presencia de bacterias en la sangre, y las debidas a serotipos ubicuos, que provocan diarrea, vómitos y fiebre. La duración y entidad de esta enfermedad es variable, dependiendo del estado general del huésped, pudiendo ocasionalmente causar enfermedades generalizadas. Epidemiología La Fiebre Tifoidea, la más grave de las Salmonellosis, continúa siendo un problema mayor en muchos países en vías de desarrollo. Si bien resulta difícil conocer su real impacto, la OMS estima que, anualmente, se registran diecisiete millones de casos anuales, con unas seiscientas mil muertes (6). En Uruguay la Fiebre Tifoidea es, actualmente, una enfermedad relativamente controlada. Desde 1995, año en que se implementó el programa V.E.T.A (vigilancia de las enfermedades transmitidas por los alimentos), se ha constatado un aumento en el número de brotes denunciados; el Departamento de Vigilancia Epidemiológica del Ministerio de Salud Pública estudió cinco brotes en el año 1995 y cuarenta y un brotes en el año 1999, constatándose en dicho lapso un predominio de brotes de origen bacteriano, siendo Salmonella sp. el agente más frecuentemente aislado. Nos extenderemos más sobre esto en los capítulos referidos a estudio de brotes; pero es interesante observar que este aumento del número de brotes estudiado podría explicarse teniendo en cuenta los siguientes factores: la obligatoriedad de la denuncia, la existencia de sub-registros anteriores, el aumento en la notoriedad de los brotes (circunstancia que sensibiliza al público y estimula la consulta médica frente a una gastroenteritis). 20
  • 4. Además de lo anotado, probablemente exista aumento real en los brotes, reflejado en el incremento del serotipo Enteritidis, responsable en los últimos años, de la mayoría de aquéllos. Este serovar ha desplazado a Salmonella Typhimurium como causa más frecuente de infección esporádica o de brotes de enfermedad de origen alimentario. Centro Nacional de Salmonella. El Centro Nacional de Salmonella recibe cepas aisladas para confirmación de su identificación y caracterización serológica de laboratorios públicos y privados, de diagnóstico clínico humano, veterinario y de alimentos de todo el país; ocasionalmente ha recibido cepas aisladas en otros países de la región. Por otra parte, prepara sus propios antisueros hiperinmunes en conejos, siguiendo las recomendaciones del Centro Colaborador O.M.S. del Instituto Pasteur de París, con el que mantiene una correspondencia fluida. La misma ha resultado muy útil frente a dudas y otras consultas, en los últimos años. Además desde el año 2000 se integra el programa WHO-Salm-surv, que coordinan la O.M.S., el Danish Veterinary Institute (DVI), el C.D.C y el Instituto Pasteur, participando desde esa misma fecha, dentro de este programa, de un sistema de control de calidad (EQAS) coordinado por el DVI. Las cepas recibidas para su caracterización son aisladas en medio nutritivo y con un cultivo puro se confirma su identificación por las pruebas bioquímicas habituales para el género. Se les realiza triple azúcar hierro, fenilalanina, urea, Voges Proskauer, gelatina, lisina, arginina y ornitina de Moeller, manitol, maltosa, sorbitol, dulcitol, adonitol, salicina. Con un cultivo en agar tripticasa soya en tubo inclinado se investigan los antígenos somáticos por aglutinación en lámina, con gérmenes viables. Primero los antígenos determinantes de grupo y luego de establecido éste, los antígenos menores. En general se sigue un criterio de conveniencia, que resulta de probar en primer término los grupos mas frecuentemente aislados: O.4; O:6,7,8; O:9; si no se obtuviera una aglutinación positiva en esta primera etapa, se sigue con los antígenos somáticos de grupos menos frecuentes. Luego de establecida la fórmula somática se investigan los antígenos flagelares. Para ello se cultiva la cepa problema en placas de Sven-Gard. Se trata de un agar nutritivo semisólido, que consiste en caldo nutritivo con el agregado de 7 gramos por litro de agar, en placa de Petri que sin ser invertidas, se siembran con asa bacteriológica con un punto en el cetro de la placa y se incuban 24 horas a 35°C. Las bacterias móviles se desarrollan extendiéndose sobre toda la superficie del medio. La aglutinación se realiza también en placa, con los cultivos bacterianos recogidos de la superficie y de zonas alejadas de la zona central donde se sembró. Nuevamente se sigue un criterio de conveniencia, buscando 21
  • 5. primero los antígenos flagelares de los serotipos mas frecuentes pertenecientes a ese grupo somático. En un cultivo puro, la población de bacterias presente puede no estar expresando las dos fases flagelares mencionadas, por lo que frecuentemente debe realizarse una inversión de fases. Nuevamente se recurre a las placas de Sven-Gard, pero esta vez con el agregado de una gota incluida de suero hiperinmune contra la fase que la bacteria ya expresó. De esta manera, al verse la movilidad favorecida por el medio semisólido, la población bacteriana deberá expresar la otra fase que no está inhibida por el suero hiperinmune y por aglutinación en lámina podrán detectarse estos antígenos expresados. Cuando se quiere demostrar la incapacidad de una bacteria de expresar otra fase, o cuando estamos frente a una bacteria aparentemente inmóvil, o cuando no fue suficiente la placa de Sven-Gard para lograr la inducción de la otra fase de antígenos flagelares, se recurre a los tubos en U. Estos tubos, que son finas varillas de vidrio a las que les ha dado la forma de una U, pueden inducir la aparición de fases flagelares no bien expresadas anteriormente. La bacteria es sembrada en una rama del tubo y, si expresa movilidad, es recogida en la otra rama del tubo 24 o 48 horas después de una incubación a 35°C. Una vez recogida, se la cultiva en una nueva placa de Sven-Gard, pudiéndose determinar el resto de los antígenos flagelares. Si se tratara de una bacteria que no tiene segunda fase o que es inmóvil, no se observará crecimiento en la otra rama del tubo. El medio de cultivo empleado en el tubo en U es un agar nutritivo semisólido por el agregado de 3 gramos de agar por litro de caldo nutritivo. De esta forma queda establecida la formula antigénica completa, con los antígenos somáticos mayores y menores, los antígenos flagelares de primera y segunda fase con todos sus factores. RESULTADOS DEL CENTRO NACIONAL DE Salmonella Y COMENTARIOS. Con el fin de difundir información sobre la frecuencia y características de los serotipos de las cepas estudiadas en el laboratorio del Centro Nacional de Salmonella, en forma periódica se realizan comunicaciones. Es importante destacar que esta información puede no reflejar exactamente la presencia o ausencia de determinados serotipos en nuestro país, ya que en muchos casos de enfermedad gastrointestinal no se solicita una investigación bacteriológica o las cepas aisladas por los diferentes laboratorios no se envían para completar su tipificación. Además, debe tenerse presente que no siempre se logra aislar o identificar el germen en el alimento que origina el brote. 22
  • 6. Existen estudios sistemáticos en alimentos y en animales que se corresponden con programas específicos, como por ejemplo, la búsqueda de Salmonella en huevos llevada a cabo en el Instituto de Higiene durante el año 2001. Como resultado de estas investigaciones se registran aumentos en la cantidad de cepas aisladas, disminuyendo nuevamente esta cantidad al interrumpirse el programa. Estos descensos no reflejan necesariamente la realidad epidemiológica, sino que sólo reflejan la suspensión de la búsqueda sistemática. Sin embargo, estos estudios han dado una visión de conjunto que, a lo largo de los años, ha permitido ver un muy interesante comportamiento de los serotipos. La colaboración de los laboratorios en el envío de cepas de origen humano, animal, o de alimentos, ya sean aquéllos públicos o privados, municipales o nacionales, ha sido un aporte de fundamental importancia a la hora de conocer el comportamiento de los diferentes serotipos. A su vez, la devolución a los diferentes laboratorios de la información obtenida ha generado la confianza y el compromiso de todos en la tarea, lo que ha llevado a un mejor conocimiento del problema en nuestro país y ha permitido entender los cambios que se han ido produciendo. La comunicación frecuente con los Servicios de Vigilancia Epidemiológica de los Ministerios de Salud Pública y Ganadería Agricultura y Pesca, ha facilitado una mejor comprensión de la realidad. En nuestro país, al igual que en otras regiones, se verifica una presencia ocasional de Salmonella Typhi y un aumento de las infecciones transmitidas por alimentos causadas por otros serotipo de Salmonella. Entre los años 1990 a 2000 el Centro Nacional de Salmonella recibió únicamente catorce cepas de Salmonella Typhi. En Uruguay S. Enteritidis se aisló esporádicamente hasta 1994 en seres humanos, animales y alimentos. En el año 1995 se confirmó el primer brote de dimensiones considerable causado por este serotipo que afectó a un importante número de personas, distribuidas en una amplia área geográfica. A partir de este suceso el germen comenzó a aislarse con mayor frecuencia; en 1996, S.Enteritidis representó el 10% de las cepas recibidas en el laboratorio del Centro Nacional de Salmonella, siendo el segundo serotipo mas frecuente luego de Typhimurium, esta proporción aumentó y a partir de 1997 pasó a ser el serotipo mas frecuente, hasta situarse durante el año 2000, en el 79.6% del total de cepas estudiadas. Figura 1. Es importante destacar la menor variedad de serotipos aislados, en el último periodo, a pesar del aumento de cepas tipificadas. 23
  • 7. EVOLUCION DE TYPHIMURIUM Y ENTERITIDIS 1990 – 2000 Figura 1. 200 Enteritidis Typhimurium 150 100 50 0 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 00 20 En una primera comunicación, (7) se analizó el periodo 1975 – 1988, con un total de 589 cepas. El serotipo mas frecuente fue Typhimurium, presentando algunas variaciones según los orígenes y los años. En la tabla 1. se describen los serotipos encontrados en este periodo, según origen. 24
  • 8. FRECUENCIA DE LOS DIFERENTES SEROTIPOS SEGÚN ORIGEN 1975 –1988 Tabla 1. SEROTIPO HUMANOS ALIMENTOS ANIMALES AMBIENTE ALIMENTO TOTAL PARA ANIMALES Typhimurium 158 4 8 11 181 Oranienburg 44 14 58 Agona 28 7 2 15 3 55 Panama 15 1 30 46 Newport 27 9 2 5 43 Kunzendorf 30 1 8 39 Anatum 4 9 18 31 Derby 19 7 26 Muenchen 19 1 5 25 Montevideo 11 2 9 3 25 Give 4 6 2 12 Dublin 10 10 Brandenburg 4 4 Bredeney 4 1 5 Senftenberg 2 1 2 5 Sandiego 1 1 1 3 Meleangridis 2 1 3 Saintpaul 3 3 Tennessee 2 2 Gallinarum 2 2 Haardt 2 2 4,12:-;- 2 2 Stanley 1 1 Minnesota 1 1 Salinatis 1 1 Virginia 1 1 Menston 1 1 Paratyphi B 1 1 13:-:- 1 1 TOTAL 373 43 39 119 15 589 Es interesante observar las variaciones de ciertos serotipos. Typhimurium, como fue mencionado, el serotipo más frecuente durante muchos años, permanece mas o menos constante, aislándose de muestras humanas, de animales, de alimentos y del ambiente. Otros serotipos aparecen y desaparecen en diferentes períodos, mostrando una coincidencia llamativa como Derby y 25
  • 9. Newport, que se aíslan de muestras humanas y de alimentos en forma simultánea. (Figuras 2 y 3). Es difícil determinar una relación causa – efecto en momentos en que no se realizaban estudios sistemáticos de las enfermedades trasmitidas por alimentos. Igualmente no dejan de llamar la atención estas coincidencias. VARIACIONES DE DIFERENTES SEROTIPOS 1975 -1988 20 Humanas Alimentos 0 75/76 77/78 79/80 81/82 83/84 85/86 87/88 Salmonella Derby 1975-1988 Figura 2. 26
  • 10. 20 Humanas Alimentos 0 75/76 77/78 79/80 81/82 83/84 85/86 87/88 Samonella Newport 1975 – 1988 Figura 3. 27
  • 11. En el periodo 1989 – 1995, analizado en segundo término, (8) se estudiaron 370 cepas provenientes de 34 laboratorios de todo el país. El origen de las mismas se describe en la tabla 2. ORIGEN DE SEROTIPOS TIPIFICADOS 1989 – 1995 Tabla 2. ORIGEN N° HUMANOS 238 ALIMENTOS 15 ANIMALES 75 ALIMENTO PARA ANIMALES 38 AMBIENTE 4 TOTAL 370 Se tipificaron 42 serotipos diferentes. La distribución anual de estos serotipos se describe en la tabla 3. En todos los años, salvo 1989 y 1995 el serotipo más frecuente fue Typhimurium. En 1989 lo fue Panamá (20/51), relacionado a un brote de infección hospitalaria, fundamentalmente bacteriemias en el Servicio de Recién Nacidos del Hospital Pereira Rossell. En 1995 el serotipo Enteritidis fue el más frecuente (60/125) en relación a varios brotes de infecciones trasmitida por alimentos. De las 103 cepas de Typhimurium estudiadas en este periodo, 59 eran de origen humano, 41 animal y 3 aisladas de alimentos. De las 68 cepas de Enteritidis aisladas, 62 provenían de muestras humanas y 6 de alimentos. La mayor variedad de serotipos se encontró en los alimentos para animales. A algunos de ellos se los podría llamar “exóticos”, ya que no se los ha encontrado en relación con enfermedad en el hombre o en animales en nuestro medio. De todas maneras evidencian una amplia diseminación de Salmonella que no se corresponde con enfermedad, probablemente debido a dosis infectantes muy bajas que no llegan a dar enfermedad clínicamente detectable o carencia de algunos atributos de virulencia en algunos serotipos, o ambas causas. Serotipos tales como Tennessee, Mbandaka y Fyris son algunos de ellos. 28
  • 12. FRECUENCIA DE SEROTIPOS 1989 – 1995 Tabla 3. SEROTIPO 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 TOTAL Typhimurium 14 18 12 12 20 11 16 103 Enteritidis 2 1 5 60 68 Panama 20 3 3 1 2 9 38 Kunzendorf 3 2 7 2 5 5 5 29 Montevideo 1 2 12 3 18 Newport 1 2 2 4 4 13 Agona 1 2 1 4 5 13 Dublin 3 2 2 7 Senftenberg 1 2 3 6 Livingstone 1 5 6 “rugosa” 1 1 3 1 6 Muenchen 1 1 2 1 5 Meleangridis 2 1 1 4 Derby 1 1 2 4 Cerro 2 2 4 London 1 1 1 3 Menston 3 3 Give 3 3 Tennessee 3 3 8,20:z4,z23:- 1 1 1 3 Infantis 1 1 2 Oranienburg 1 1 2 Heidelberg 2 2 Catanzaro 1 1 2 Fyris 1 1 2 Anatum 2 2 Mbandaka 2 2 9,12:-:- 2 2 Gallinarum 1 1 Miami 1 1 SubspIIIb 1 1 Hadar 1 1 Sandiego 1 1 Saintpaul 1 1 Bredeney 1 1 Havana 1 1 Concord 1 1 Glostrup 1 1 4,12:-:1,2 1 1 6,7:-:1,2 1 1 6,7:k:- 1 1 3,10:-:- 1 1 13:d:- 1 1 TOTAL 51 30 32 25 41 66 125 370 29
  • 13. En el período comprendido entre 1996 y 1999 (9) se estudiaron 525 cepas provenientes de 39 laboratorios del país. 313 cepas fueron de origen humano, 74 de animales, 36 de alimentos, 95 de alimentos para animales y 7 de origen desconocido. Se tipificaron 29 serotipos diferentes. En 1996 se estudiaron 90 cepas, en 1997 lo fueron 102 cepas, 119 cepas en 1998 y 214 cepas en 1999. Al inicio de este periodo, al igual que en la mayoría de los años anteriores, Typhimurium fue el serotipo más frecuente, siendo sustituido por Enteritidis desde 1997. En el año 2000, se tipificaron 239 cepas, 163 Enteritidis, 34 Typhimurium y 42 pertenecientes a otros serotipos, pero llamativamente sólo se tipificaron Enteritidis y Typhimurium de origen humano, mostrando ese año un claro predominio de estos serotipos como agentes de enfermedad en el hombre. De un total de 178 cepas aisladas de muestras humanas 152 fueron Enteritidis y 26 Typhimurium, siendo Enteritidis el serotipo más frecuente con un porcentaje de aislamientos muy elevado (85%) En la Tabla 4 se muestran los diferentes serotipos tipificados en el período 1996 – 2000. Serotipos aislados (1996 – 2000) Tabla 4. SEROTIPO Nº SEROTIPO Nº Enteritidis 432 Essen 2 Typhimurium 154 Djugu 2 Montevideo 34 Livingstone 2 Agona 27 London 2 Anatum 13 Virginia 1 Newport 12 Heidelberg 1 Havana 8 Putten 1 Senftenberg 8 Reading 1 Give 7 Congo 1 Catanzaro 5 Rissen 1 Glostrup 4 Westhampton 1 Dublin 4 Berta 1 Oranienburg 4 Virchow 1 Typhi 4 13:-:- 1 Fyris 3 9.12:-:- 7 Canada 3 18:z4?:- 6 Panama 3 13:y:- 1 Gallinarum 2 Cepas rugosas 3 Infantis 2 TOTAL 764 30
  • 14. Es interesante analizar los datos obtenidos para Salmonella Entritidis y Typhimurium en este último periodo.(Tabla 5). Typhimurium, con pequeñas oscilaciones permanece constante, entre 22 y 48 aislamientos anuales, siendo en 1996 el serotipo mas frecuente. También se observan pocas variaciones en otros serotipos que globalmente van de 24 a 53 cepas. Principales serotipos. Distribución anual 1996 – 2000 Tabla 5. 1996 1997 1998 1999 2000 Typhimurium 48 22 23 27 34 Enteritidis 10 27 72 160 163 Otros 32 53 24 27 42 Total 90 102 119 214 239 Merece especial mención Salmonella Enteritidis, que como fue descrito, desde mediados de la década pasada emergió en nuestro país como un importante problema de Salud Pública, esto se ha relacionado con el consumo de productos avícolas contaminados, crudos o insuficientemente cocidos (carne, huevos). Parece evidente la relación entre este aumento y los cambios en las costumbres de la población, tales como el hábito de comer fuera del hogar, la ingesta de alimentos preelaborados o preparados en grandes cantidades, o la comercialización masiva de algunos tipos de alimentos. En todo el mundo, en particular en los países desarrollados en la década del 80 Salmonella Enteritidis, planteó un serio problema para las poblaciones que buscaban la seguridad en el consumo de alimentos y consecuentemente para los productores de estos que se vieron enfrentados a dificultades inesperadas. En la Figura 4. se observa la evolución de la enfermedad producida por Salmonella en U.S.A. en los últimos 30 años. (10 ) El aumento de S.Enteritidis observado, con una tasa de 0.55/100.000 en 1976 que aumentó a 3.88/100.000 en 1995 obligó a intervenciones que comienzan a ser evaluadas. (11) Por otra parte, y como comentario adicional, antes de volver sobre el problema de S.Enteritidis, es interesante observar como el aumento de número de casos en relación a brotes de dimensiones impresionantes, pueden hacer variar cifras en una forma increíble como sucedió en U.S.A. en 1985 con el serotipo Typhimurium y se muestra en las figuras 4 y 5. En la tabla 6. se describe el número de casos de enfermedad por S.Enteritidis en años seleccionados en el Reino Unido, es fácil observar el aumento del número hasta 1993 y su disminución luego de la implementación de múltiples medidas, inclusive la vacunación del plantel avícola.(12) 31
  • 15. Salmonellosis en U.S.A. 1969 – 1999 Figura 4 Salmonella. Aislamientos por serotipo y por año en U.S.A. 1974 – 1999 Figura 5. 32
  • 16. S.Enteritidis en el Reino Unido Número de casos. Años seleccionados(11) Tabla 6. Año N° de casos 1969 151 1970 913 1971 651 1980 879 1983 1774 1987 6858 1988 15427 1993 17371 1999 6700 El franco predominio de Salmonella Enteritidis que se registra en Uruguay no es un caso aislado en América Latina. En un estudio retrospectivo, realizado en colaboración con laboratorios de la región, fueron revisados los serotipos de Salmonella tipificados en los Centros de Referencia de cada país durante el año 2000. De un total de 9402 cepas tipificadas, S.Enteritidis es por lejos, el serotipo predominante en todos los países y en todos los tipos de aislamientos, ya sean humanos, de animales, de alimentos para seres humanos, de alimentos para animales y del ambiente. Figura 6. El 80% de las cepas de animales fueron aisladas de aves de granja. El 51% de las cepas de alimentos, de un total de 1577 cepas tipificadas provenían de aislamientos de parrilleros y el 25% de éstas eran S.Enteritidis. El 1% de los aislamientos de alimentos eran de huevo, siendo más del 60% S.Enteritidis; 5% provenían de alimentos preparados, siendo más del 40% S.Enteritidis.(13) La contribución a este estudio producida por cada país fue muy dispar, explicado parcialmente por las diferencias en superficie y población de cada uno de ellos, aunque esto no siempre fue determinante. Seguramente también incidieron en los diferentes aportes, políticas nacionales o regionales de estudio de brotes, o políticas de mercado por ejemplo: países exportadores de alimentos, que deben cumplir determinados requisitos de los compradores. 33
  • 17. Los más frecuentes serotipos por fuente de aislamiento. WHO Salm-surv South America Working Group.(12) Figura 6. 100 80 Percentage of 60 Salmonella strains 40 serotyped 20 0 HUMAN ANIMAL FOOD FEED Env Ns=2476 Ns=2297 Ns=1577 Ns=2007 Ns=1045 S.Enteritidis S.Enteritidis S.Enteritidis S.Enteritidis S.Enteritidis S.Typhimurium S.Heidelberg S.Typhimurium S.Rissen S.Heidelberg S.Typhi S.Typhimurium S.Agona S.Senftenberg S.Agona Ns= number of Salmonella strains En Estados Unidos y Reino Unido se han tomado medidas que contribuyeron a la disminución del número de casos debidos a Salmonella Enteritidis. Entre éstas se destacan la participación en los programas de control de calidad del huevo en la granja, la mejora en las prácticas de preparación de alimentos, la educación de los manipuladores de alimentos y, en el caso de Reino Unido, la vacunación de los planteles aviares. En la Conferencia Internacional de Enfermedades Infecciosas Emergentes, en Atlanta, marzo del 2002, Mumma, G.A. y colaboradores del CDC, (11) presentaron evidencias de la efectividad de los Programas de Control de Calidad del Huevo para mitigar las infecciones por S. Enteritidis en U.S.A., la refrigeración obligatoria del huevo de la granja a la mesa y las investigaciones de trazabilidad probablemente juegan un papel fundamental y recomiendan su continuidad y expansión. 34
  • 18. Por otra parte en la misma conferencia Adak G.K. y colaboradores del PHLS del Reino Unido (14) valoran positivamente el impacto sobre la Salud que tuvo la introducción de la vacunación de los planteles de aves iniciada en 1996 en esa región. Estos esfuerzos realizados y el comienzo de la visualización del éxito en el control de S.Enteritidis, no dejan descansar a los investigadores, microbiólogos y epidemiólogos, que asisten desde hace muy poco a un aumento alarmante de la presencia de un fago tipo de S.Typhimurium el DT 104, con una marcada resistencia a los antimicrobianos. (15) Por otra parte S.Newport multiresistente está siendo aislada frecuentemente en brotes en varios estados de U.S.A. y Argentina.(16) (17) (18) Aunque en nuestro país todavía no asistimos a la aparición de cepas con características similares, no sería de extrañar su próxima emergencia, dado el uso indiscriminado de antimicrobianos, para el tratamiento de enfermedades en el hombre y los animales, pero también como estimulo en la producción animal en todo el mundo. El accionar de Dinamarca con el control del uso de antimicrobianos en la producción de alimentos, aunque muy distante de nuestras posibilidades, no deja de ser un ejemplo a tener presente. (19) Siguiendo esta línea de acción, la prevención de estas enfermedades transmitidas por los alimentos implica la adopción de nuevos procedimientos de seguridad, que deberían involucrar el trabajo conjunto de organismos reguladores, la industria y los productores, en un esfuerzo orientado hacia el mismo objetivo: lograr alimentos más seguros para nuestras poblaciones. Referencias bibliográficas. 1. Le Minor L, Popoff MY: Request for an opinion. Designation of Salmonella enterica sp. nov. nom., rev. as the type and only species of the genus Salmonella. Int J Syst Bacteriol 1987;37: 465 – 468 2. Reeves MW, Evins Gm, Heiba AA, Plikaytis BD Farmer JJ 3rd. Clonal nature of Salmonella Typhi and its genetic relatedness to other Salmonella as shown by multilocus enzyme electrophoresis, and proposal of Salmonella bongori com.nov. J Clin Microbiol 1989; 27(2): 313 – 320. 35
  • 19. 3. Brenner FW, Villar RG, Angulo FG, Tauxe R, Swamiathan B. Guest commentary. Salmonella nomeclature. J Clin Microbiol 2000; 2465 –2467. 4. Popoff MY, Le Minor L: Formules antigeniques des serovars des Salmonella. WHO collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella. Institut Pasteur, Paris, 2001. 5. Ewing WH. Identification of Enterobacteriaceae. 4th. ed. Elsevier, 1986 6. Typhoid Fever. WHO Fact Sheet N149. March 1997; http://www.who-int/inf- fs/en/fact149.html [consulta: 9 abril 2002] 7. Algorta G, Pivel de Gómez L, Montano de Ferla A, Bello de Moreira N. Origen y distribución de serotipos de Salmonella. 1975 – 1988. Jornadas Rioplatenses de Microbiología. Montevideo. 1989 8. Algorta G, Gazzo N, Bello de Moreira N, Montano A. Origen y distribución de serotipos de Salmonella. 1989 – 1995. 3er. Encuentro Nacional de Microbiólogos. Montevideo. 1996 9. Martínez A, Torres ME, Macedo M, Algorta G. Origen y distribución de serotipos de Salmonella. 1996 – 1999. XIV Congreso Latinoamericano de Patología Clínica. Montevideo. 2000 10. Graphs and Maps for Selected Notifiable Disease in the United States. MMWR 2001 April 6; 48 (53) :17 – 82. 11. Mumma GA, Griffin PM, Meltzer MI, Braden CR, Tauxe RV. Evidence of Effectiveness of Egg Quality Assurance Programs, Mandatory Refrigeration, and Traceback Investigations To Mitigate Egg-Associated Salmonella Enteritidis Infections in the United States. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 12. Ward LR, Threrlfall J, Smith HR, O´Brien SJ. Salmonella Enteritidis Epidemic (carta). Science 2000 March 10; 287 (5459): 1753-4. 13. WHO Global Salm-Surv South America Working Group, WHO Global Salm- Surv. A WHO Global Salm-Surv Retrospective Study Examining Salmonella Serotypes in South America, 2000: Dominance of Salmonella Serotype Enteritidis. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 14. Adak GK, Long SM, O´Brien SJ, Ward LR. Health Impact of the Salmonella enterica Serotype Enteritidis Phage Type 4 Epidemic. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 36
  • 20. 15. Threlfall EJ. Epidemic Salmonella Typhimurium DT 104 a Truly International Multiresistant clone. J Antimicrob Chemother 2000 Jul; 46(1): 7-10. 16. Smith K, Brender J, Stenzel S, Lindeman C, Adams J, Leano F. Comparison of Animal and Human Multidrug-Resistant Isolates of Salmonella Newport in Minnesota. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 17. Pichel MG, Castaneda MC, Caffer MI, Monzon MC, Merino LA, Binsztein N. Molecular Epidemiology of an Outbreak Caused by Salmonella enterica serovar Newport in Argentina. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 18. McCombs K.G.,Thomas S.M.,Segler S.D. , Bates M. R., Lee K. E., MacKenzie W.R., Lance-Parker S. Salmonella Newport in Georgia, 1998-2000. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002. 19. Wegener HC. Integrated Surveillance and Control of Emerging Foodborne Diseases – The Successful Danish Experience. International Conference on Emerging Infectious Diseases, Atlanta, 2002 37