Fundamento, pasos y técnica de la tinción de Gram

1. TINCIÓN DE GRAM
DEFINICIÓN FUNDAMENTO
PASOS TÉCNICA
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2. TINCIÓN DE GRAM: DEFINICIÓN
La tinción de Gram es una tinción diferencial
muy utilizada en Bacteriología para observar
bacterias en muestras clínicas.
Debe su nombre a Christian Gram (1984)
 Morfología bacteriana
 Diferenciación bacteriana
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3. TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
El fundamento de la tinción de Gram se basa
en las diferencias de la pared celular de las
bacterias Grampositivas y Gramnegativas.
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4. TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las Bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano
(retiene el complejo colorante-mordiente)y dos
clases de ácido teicoico
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5. TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
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6. TINCIÓN DE GRAM: FUNDAMENTO
La pared celular de las bacterias Gram negativas
tiene una capa de peptidoglucano más fina
(facilita la salida del complejo colorante-
mordiente)
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7. TINCIÓN DE GRAM: PASOS
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8. TINCIÓN DE GRAM: PASOS
El cristal violeta penetra en todas las células
bacterianas a través de la pared bacteriana
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9. TINCIÓN DE GRAM: PASOS
El lugol actúa como mordiente haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la
pared de la célula bacteriana.
El I2 entra en las células y forma un complejo
insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
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10. TINCIÓN DE GRAM: PASOS
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega,
sirve para realizar la decoloración, ya que en
la misma es soluble el complejo I2-cristal
violeta.
Los organismos Gram positivos no se
decoloran, mientras que los Gram negativos sí
lo hacen.
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11. TINCIÓN DE GRAM: PASOS
Para poner de manifiesto las células Gram
negativas se utiliza una coloración de
contraste. Habitualmente es un colorante de
color rojo, como la safranina o la fucsina.
Después de la coloración de contraste las
células Gram negativas son rojas, mientras que
las Gram positivas permanecen azules.
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12. TINCIÓN DE GRAM: TÉCNICA
 Realizar un frotis fino.
 Dejar secar.
 Fijar con metanol.
 Añadir Violeta de Genciana (1 minuto)
 Lavar con agua.
 Añadir Lugol
 Lavar con agua
 Decolorar con alcohol-acetona
 Lavar con agua
 Añadir colorante de contraste (1 minuto)
 Lavar con agua
 Dejar secar
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