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 I.E.T.C. Alberto Pumarejo
 Presentado por:
 John Marcelo
 Joel Pelufo
 Luis Fernado de la cruz
 Sebastián Santiago
 Grado: 9°2
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 El modelo destaca que la interacción es directa, lo cual
permite la purificación de la enzima mediante una columna
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 La actividad de la enzima también puede ser incrementada
mediante la auto-agregación de la enzima, lo cual permite
sugerir que la enzima podría presentar una transición de
monómero a dímero (20). Los solventes orgánicos como el
dimetilsulfóxido y los poli-alcoholes también simulan el
efecto estimulatorio de la CaM (3, 4, 6), lo cual sugiere que
también actúan removiendo la mencionada compuerta
auto-inhibitoria
 El modelo muestra de la remoción de la compuerta auto
inhibitoria mediante la unión de esta a diferentes ligados o
mediante proteólisis parcial. En todos los casos, la
resultante es la misma: Un incremento en la accesibilidad
de los sustratos
 Tomando en cuenta que la interacción de la Ca2+-ATPasa
con la CaM es directa, la enzima puede ser purificada a
homogeneidad a partir de membranas asiladas de
eritrocitos humanos, solubilizadas con detergente,
mediante la utilización de una columna de afinidad de
Calmodulina unida covalentemente a una matriz de
agarosa (1), de la cual se e luye al quedar el calcio del medio.
 El gel muestra una banda única de 140.000 Da.,
correspondiente a la Ca2+-ATPasa. A la izquierda, las
bandas corresponden a patrones de peso molecular
conocido.
 La actividad enzimática es expresada en micromoles
de ATP hidrolisado por mg. Proteína por minuto.
Control (O); Calmodulina (); Etanol (); Etanol plus
Calmodulina (); Ca2+-ATPasa tripsinizada (); Ca2+-
ATPasa tripsinizada plus etanol ().
 El transporte de calcio en vesículas invertidas de
eritrocitos humanos también es estimulado por el
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La bomba Ca++-ATPasa: regulación y purificación

  • 1.  I.E.T.C. Alberto Pumarejo  Presentado por:  John Marcelo  Joel Pelufo  Luis Fernado de la cruz  Sebastián Santiago  Grado: 9°2  Docente: Mónica dúchens  Trabajo de: biología
  • 2.
  • 3.
  • 4. .
  • 5.  La bomba Ca++-AT Pasa funciona de una forma muy parecida a la bomba Na+K+-AT Pasa: dos iones de Ca++ son transportados fuera del cito sol porcada molécula de ATP hidrolizado. La actividad de esta bomba está regulada de tal forma que si la concentración de Ca++ aumenta, la velocidad de bombeo aumenta hasta que la concentración citosólica se reduce a 0.1 molar. Entran 3 de Na Salen 2 de Ca 3x2
  • 6.  Se puede observar los 4 dominios de unión de calcio y el alto contenido de estructura a hélices.
  • 7.
  • 8.  Se puede observar como la Calmodulina se pliega alrededor del sitio de interacción con la quinasa. Este modelo expone la altísima flexibilidad de la Calmodulina.
  • 9.
  • 10.  El modelo destaca que la interacción es directa, lo cual permite la purificación de la enzima mediante una columna de afinidad con Calmodulina-agarosa.  La actividad de la enzima también puede ser incrementada mediante la auto-agregación de la enzima, lo cual permite sugerir que la enzima podría presentar una transición de monómero a dímero (20). Los solventes orgánicos como el dimetilsulfóxido y los poli-alcoholes también simulan el efecto estimulatorio de la CaM (3, 4, 6), lo cual sugiere que también actúan removiendo la mencionada compuerta auto-inhibitoria
  • 11.
  • 12.  El modelo muestra de la remoción de la compuerta auto inhibitoria mediante la unión de esta a diferentes ligados o mediante proteólisis parcial. En todos los casos, la resultante es la misma: Un incremento en la accesibilidad de los sustratos  Tomando en cuenta que la interacción de la Ca2+-ATPasa con la CaM es directa, la enzima puede ser purificada a homogeneidad a partir de membranas asiladas de eritrocitos humanos, solubilizadas con detergente, mediante la utilización de una columna de afinidad de Calmodulina unida covalentemente a una matriz de agarosa (1), de la cual se e luye al quedar el calcio del medio.
  • 13.
  • 14.  El gel muestra una banda única de 140.000 Da., correspondiente a la Ca2+-ATPasa. A la izquierda, las bandas corresponden a patrones de peso molecular conocido.
  • 15.
  • 16.
  • 17.  La actividad enzimática es expresada en micromoles de ATP hidrolisado por mg. Proteína por minuto. Control (O); Calmodulina (); Etanol (); Etanol plus Calmodulina (); Ca2+-ATPasa tripsinizada (); Ca2+- ATPasa tripsinizada plus etanol ().  El transporte de calcio en vesículas invertidas de eritrocitos humanos también es estimulado por el etanol de una manera dosis-dependiente, lo cual permite inferir que etanol puede estimular esta actividad