Breve descripción de un estudio fitoquímico, aplicado al caso de Morinda panamensis.

2. Un estudio fitoquímico es …
Aislamiento e identificación del contenido de
metabolitos secundarios en una especie vegetal

3. Las investigaciones fitoquímicas
son realizadas con diferentes
objetivos, tales como la
determinación de los grupos de
sustancias presentes en ellas, el
análisis cuantitativo de los
compuestos activos, así como el
aislamiento de los compuestos de
interés para su posterior
identificación, caracterización
fisicoquímica o análisis estructural.

4. Adicionalmente, los estudios fitoquímicos son
importantes para otras disciplinas como la
quimiotaxonomía, ya que mediante el aislamiento
y caracterización de metabolitos secundarios se
proporciona información útil para lograr la
diferenciación entre las especies.

5. México cuenta con
una gran biodiversidad
y con una importante
tradición en el uso de
especies vegetales
para tratar diversos
padecimientos.
Se estima que en México actualmente existen más de
3,350 especies de plantas vasculares consideradas
medicinales. Sin embargo, sólo un pequeño porcentaje
de las plantas medicinales ha sido investigado desde
el punto de vista fitoquímico y farmacológico.

6. Entre las especies utilizadas como
planta medicinal por la población en
Yucatán se encuentra Morinda
panamensis, sin embargo esto se
debe a su similitud morfológica con
la especie Morinda citrifolia (noni).
M. citrifolia M. panamensis

7. Morinda panamensis

8. Objetivos en un estudio fitoquímico
Objetivo General
Contribuir, mediante el estudio fitoquímico de
diferentes extractos orgánicos, al conocimiento
químico de las hojas de Morinda panamensis Seem.
Objetivos Específicos
Realizar el aislamiento y purificación, por diversos
métodos cromatográficos, de los metabolitos
secundarios presentes en los extractos de
diclorometano, acetato de etilo y metanol de las hojas
de M. panamensis Seem.
Determinar la estructura química de los metabolitos
aislados, mediante técnicas espectroscópicas y
espectrométricas.

9. Para llevar a cabo un estudio fitoquímico se
requieren diversos materiales y equipos:
Cromatografía en RMN
columna
Cromatografía en
capa delgada
CG-EM
Equipo
Material y equipo Cromatografía de
espectroscópico y
cromatográfico permeación en
espectrométrico
gel
CLAE
Cromatografía en
fase reversa
EMAR
CLAE

10. Equipo espectroscópico y espectrométrico

11. Es muy importante la obtención del material vegetal
y los extractos. Por ejemplo:
Identificada por el Dr. Salvador
Flores Guido
Muestra de espécimen en el Herbario
“Alfredo Barrera Marín”
Desecación
Molienda
737 g Maceración
exhaustiva
con CH2Cl2.
CC SiO2
Fracciones Hx-AcOEt 68.5 g

12. Las metodologías que se siguen son del estilo…
R
CC SiO2
CH2Cl2-An
R1 R2 R3
CCDP CCDP
CH2Cl2-An 90:10 CH2Cl2-An 65:35
R1a R3a
R3b
R5 R6
CC SiO2 CC SiO2
CH2Cl2-AcOEt CH2Cl2-An
R6.5
R5.4 R5.5 CCDP
CCDP CCDP CH2Cl2-An 60:40
CH2Cl2-AcOEt 65:35 CH2Cl2-AcOEt 65:35 R6.5a
R5.4c R5.5a

13. Otro ejemplo:
Fracción P (1.43 g)
CC con Sephadex lipofílico
P1, P2 P3 (209 mg) P4 (28.4 mg) P6 (59 mg)
CC SiO2 CCDP Hx- CC SiO2
CH2Cl2-An AcOEt 70:30 CH2Cl2-An
Compuesto I Compuesto I P6.4 (12 mg)
P7 (25 mg) P8 (21 mg) CCDP
CH2Cl2-
CCDP CCDP AcOEt 1:1
Hx-An 70:30 CHCl3-An
80:20 Compuesto II (4 mg)
Compuesto IV
(5 mg) Compuesto V Compuesto III (2.6 mg)
(5 mg)

14. Se obtienen resultados del tipo..
Abundance
Cromatografía de Gases
T IC : L E V -F2 .D
8000000
7000000
6000000
5000000
4000000
3000000
2000000
1000000
6 .0 0 8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0 1 4 .0 0 1 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0 3 0 .0 0
T im e --> Cromatograma de la fracción F2

15. Se obtienen resultados del tipo..
Abundance
Espectrometría de masas:
Fracciones A - D Scan 954 ( 1 6 . 0 9 5 m in ) : le v - a lo r e n a . D ( - 9 1 2 ) ( - )
69
8000
A b u n d a n c e
6000
S c a n 9 5 4 ( 1 6 . 0 9 5 m in ) : le v - a lo r e n a . D (-9 1 2 ) (-)
6 9
8 0 0 0 4000 41
6 0 0 0
2000 95
4 0 0 0 4 1
137
2 0 0 0 9 5
1 3 7 175203231 2 7 32 9 9 3 4 13 6 7 4 1 04 3 64 6 24 8 9 5 2 1 5 5 0 5 8 7
0 1 7 5 2 0 3 2 3 1 2 7 32 9 9 3 4 13 6 7 4 1 04 3 64 6 24 8 9 5 2 1 5 5 0 5 8 7
0
5 0 1 0 0 1 5 0 5 0 2 0 0 1 0 205 0 1 3 00 0
5 23 05 00 250
4 0 0 300
4 5 0 350
5 0 0 5 5 04 0 06004 5 0 500 550 600
m / z -->
A b u n d a n c e m / z -->
Abundance
# 1 5 8 5 0 4 : S q u a le n e
6 9
8 0 0 0
# 1 5 8 5 0 4 : S q u a le n e
6 0 0 0 69
4 1
4 0 0 0
8000
2 0 0 0
9 5
1 3 7
1 6 3 1 9 12 1 7 2 7 32 9 9 3 4 13 6 7 4 1 0
0
5 0
6000
1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 0 6 0 0
m / z --> 41
4000

16. Se obtienen resultados del tipo..
Espectros de RMN-1H
1.10 1.00 0.90 0.80
ppm (t1)
5.00 4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00
ppm (t1)
Espectro de RMN-1H del compuesto R3a en CDCl3

17. Análisis de las señales del espectro RMN-1H
para la identificación de la molécula
-CH3
R3b
6.90 6.80 6.70 6.60 6.50
ppm (t1)
-HC=CH-
-CH2 -
1.00
1.00
1.00
1.22
4.26
3.96
3.08
3.04
7.00 6.50 6.00 5.50 5.00 4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00
ppm (t1)
Espectro de RMN-1H del compuesto R3b en CDCl3

18. Análisis de las señales del espectro RMN-13C para la
identificación de la molécula
R3b
-C=C -
-CH3
-CH2-
-CO- -C–O-
190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20
ppm (t1)
Espectro de RMN-13C de R3b en CDCl3.

19. Análisis de los experimentos bidimensionales, como el
COSY para determinar la conectividad en la molécula
R3b
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
ppm (t1)
7.50 7.00 6.50 6.00 5.50 5.00 4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00
ppm (t2)
Espectro de COSY de R3b.

20. Análisis de otro experimento para determinar la conectividad,
el HMBC, un experimento bidimensionales heteronuclear.
R3b
25
50
75
100
125
150
175
ppm (t1)
7.00 6.50 6.00 5.50 5.00 4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00
ppm (t2)
Espectro de HMBC de R3b.

21. Con los experimentos anteriores, y utilizando el experimento
HSQC podemos llegar a establecer la conectividad y
desplazamientos de la molécula, logrando su identificación.
R3b
C 13C(ppm) 1H (ppm)
1 41.4 --
2 49.5 2.32 (1H, d, J = 17.2);
2.50 (1H, d, J = 17.4)
3 196.9 --
4 127.7 5.95 (1H, sa)
5 160.3 --
6 79.2 --
7 144.9 6.83 (1H, d, J = 15.7)
8 130.3 6.46 (1H, d, J = 15.7) deshidrovomifoliol
9 197.4 --
10 28.4 2.30 (3H, sa)
11 22.9 1.10 (3H, sa)
12 24.3 1.01 (3H, sa)
13 18.6 1.88 (3H, sa)

22. …Y así se logra el aislamiento e identificación de los
metabolitos presentes en los diferentes extractos de
alguna porción (como las hojas) de una especie
vegetal.
blumenol A
Ácido rotungénico
Ácido ursólico
deshidrovomifoliol

23. Hojas de Morinda panamensis:
 fuente de metabolitos
secundarios de interés, con
estructuras químicas novedosas.
 metabolitos con potencial
actividad biológica contra diversos
padecimientos.