1. Dokumen tersebut membahas tentang pengantar dasar-dasar imunoasai (serologi) yang mencakup konsep dasar reaksi antara antigen dan antibodi, komponen penting antibodi, dan berbagai jenis uji serologi seperti uji presipitasi, aglutinasi, dan imunofluoresensi. 2. Beberapa teknik uji serologi yang dijelaskan antara lain uji ELISA, RIA, dan uji aliran samping menggunakan label seperti enzim dan

1. KULIAH PENGANTAR DASAR2
IMUNOASAI
Jusak Nugraha
2015

2. PENGANTAR IMUNOASAI
(SEROLOGI) DASAR
 Imunologi  mempelajari reaksi tubuh terhadap
masuknya Ag & efek dari Ab yang terbentuk / telah ada
pd Ag tsb.
 Perkembangan Imunologi membutuhkan sarana untuk
mengukur derajat imunitas / [Ab] dalam tubuh.
 Reverse Serologi : Bila Ab diket untuk menentukan
Ag yang tak diketahui.
 Uji serologi (Imunoasai).
 IMUNOASAI: UJI SEROLOGI + Reverse Serologi

3. 1. Konsep Dasar Imunoasai
Reaksi Ag dan Ab ; terdiri dari beberapa tahap
a. Tahap awal : Ag + Ab  Ag-Ab
b. Tahap Desosiasi : Ag-Ab  Ag + Ab
c. Tahap keseimbangan ( equilibrium ):
Ag + Ab <=> Ag- Ab
Afinitas Ab thd Ag ukuran kekuatan ikatan Ag-
Ab Makin besar afinitasnya, makin banyak ikatan
Ag-Ab pada saat equilibrium.

4. -S-S-
-S-S--S-S-
Regio
variabel
L H L H
Fc
Fab
Gambar 1. Struktur dasar dari molekul antibodi
L = Light Chain H = Heavy chain
2. Komponen yg terpenting dalam serologi yaitu
ANTIBODI

5. Beberapa Istilah penting dlm Imunoasai
Ikatan Ab-Ag adalah spesifik seperti kunci-anak
kunci. Reaksi silang dapat terjadi dengan struktur
mol Ag lain yang mirip dengan Ag pasangannya
tergantung dari :
- profil spesifitas Ab-nya &
- kemurnian Ag-nya
Ab yang amat spes. = Ab dengan binding sites
yang hanya dapat mengikat Ag dengan struktur
molekul yang unik saja.
a. Spesifitas dari Ab

6. x
y
z
x
y
z
Antigen I Antibodi I
Antigen II
v
w
x v
w
x
X
Y
Z
X
Y
Z
V
W
X
X
Y
Z
Gambar 2. Kompleks dua antigen yang memiliki satu
epitop yang sama (X) dan berbagai macam antibodi
yang mungkin terbentuk
Antibodi II

7. b. Ukuran kuantitas Ab
Ada beberapa cara tentukan konsentrasi Ab dalam
serum.
- Kualitatif pos. /neg.  adanya perubahan fisik dari
bahan pemeriksaan.
- Semi kuantitatif ; ditentukan dengan pengenceran
serum secara progresif  Titer
- Kuantitatif ; ditentukan dengan menggunakan
beberapa sera baku  kurva baku. Akurasi dicek
dengan serum kontrol.
Hasilnya diinterpolasi ke dalam kurva baku.

8. Gambar 3. Kurva baku uji ELISA
0
Kadar Bahan
X
OD
5 g/dl

9. VALIDITAS KLINIS (NILAI DIAGNOSTIK)
IMUNOASAI.
SENSITIVITAS Dx =
FNTP
TP

Pd. Pend. Peny. TTT
SPESIFISITAS Dx =
FPTN
TN

Pd. Bukan Pend. Peny. Tsb.
EFISIENSI Dx =
N
TNTP 
 N = Pend. + Bukan Pend.
NRN Dx =
NRP Dx =
FNTN
TN

FPTP
TP


10. FAKTOR-2 DASAR YG MEMPENGARUHI IMUNOASAI
Sifat dari Ag. Ab diberi nama sesuai dengan cara
penentuan yang paling sens. Mis : aglutinin, presipitin
dll
Elektrolit dan pH2
1
Waktu dan suhu. Reaksi Ag-Ab terjadi dalam 2 tahap
a. Ikatan spesifik Ab dg Ag/Hapten yang sesuai
b. Terjadi reaksi yg dapat dilihat (presipitasi dll)
3
Mekanisme Daya Tahan Nonspesifik
Bahan yg normal/abnormal terdapat dalam
sekret/cairan tubuh.
4
Rasio Ag dan Ab5

11. Prozone,
Tak ada presipitasi
Equivalent zone,
Presipitasi
Post zone,
Tak ada presipitasi
Gambar 4. Berbagai macam rasio Ag – Ab dan
implikasinya
= ANTIBODI
= ANTIGEN

12. BAHAN PEMERIKSAAN UTK IMUNOASAI
MACAM BAHAN : serum , plasma, css
Usahakan jangan hemolisis
Inaktivasi C  56°C, 30 menit
Ag untuk Imunoasai. Sebaiknya dibuat
sendiri dari strain lokal, lebih baik yang
multistrains.

13. IMUNOASAI
KADAR BAHAN
RENDAH ( ng/ml, pg/ml ) TINGGI (mg/ml,ug/ml)
Hasil reaksi tak tampak
FAKTOR PENGUAT (LABEL)
IF RIA EIA
Homogen Heterogen
= ELISA
Hasil reaksi DAPAT
DILIHAT
 RID
 UJI AGLUTINASI
ICA

14.  UJI PRESIPTASI
 UJI AGLUTINASI
 UJI FIKSASI KOMPLEMEN
 UJI NETRALISASI TOKSIN
I. IMUNOASAI TAK BERLABEL
Ada 2 jenis imunoasai.
I. IMUNOASAI TAK BERLABEL
II. IMUNOASAI BERLABEL
JENIS IMUNOASAI

15. Ag yang
larut Antibodi
PRESIPITASI
Gambar 5. Prinsip dasar uji presipitasi
UJI PRESIPITASI

16. Ag.
Serum dengan Ab
Inkubasi
Presipitasi
Gambar 6. Uji presipitasi tabung

17. Serum
dengan Ab
Ag
Aplikasi : Uji VDRL
Mikro
Rotasi
(dengan rotator)
Presipitasi (+)
Tak ada Presipitasi (-)
Gambar 7. Uji presipitasi lempeng (Slide)

18. 1 2
Agar
Ag. dlm
sumur 1
Ab. dlm
sumur 2
Gambar 8 . DIFUSI GANDA SEDERHANA
1 2
Garis presipitasi
Ag. dlm
sumur 1
Ab. dlm
sumur 2

19. GAMBAR 9. Uji ELEK

20. Antisera
dalam agar
GAMBAR 10. R.I.D
1
3
4
5
6
7
8 2
Sera baku
Tes serum
Tes serum
Tes serum
Tes serum
Tes serum

21. APLIKASI KLINIS UJI PRESIPITASI
Uji Tabung : VDRL - Makro
Uji Slide : VDRL - Mikro
Uji Tabung Kapiler : Penentuan CRP
Uji Difusi Ganda Sederhana : Uji ELEK
RID : Penentuan kelas Ig

22. Ag. pada permukaan sel
Ab.
Aglutinasi
Gambar 11. Prinsip dasar reaksi aglutinasi
UJI AGLUTINASI
Tak larut

23. + -
Gambar 12. Uji Aglutinasi Slide

24. Gambar 13. Uji Aglutinasi tabung
Serum ( Ab )
Susp.
Ag
Inkubasi
Aglutinasi

25. AGLUTINASI TAK LANGSUNG
A. AGLUTINASI PASIF
B. Ab TAK LENGKAP
a. Ab Monovalen
b. Lokasi Tersembunyi / Ukuran Terlalu Kecil ( Ig. G )

26. + +
Ag Larut
Partikel
Partikel disalut Ag
Ab dalam serum
Aglutinasi
Gambar 14. Uji aglutinasi pasif

27. APLIKASI KLINIS UJI AGLUTINASI
 Uji Slide (lempeng): uji Widal slide
 Uji Tabung : uji Widal tabung
 Aglutinasi Tak Langsung: uji Rose-Waaler
III. UJI HEMAGLUTINASI : KULIAH Bank Drh
IV. UJI LISIS IMUN & FIKSASI KOMPLEMEN
Hampir sama dengan uji aglut. tak langsung,
Hanya Anti – Ig diganti C  Lisis Imun

28. Komplemen
Sensitized cell
Ab
Ag pada
permukaan sel
= Komplemen
Gambar 15 . Prinsip dasar uji lisis imun
Uji Lisis Imun

29. Gambar 16 . Uji Fiksasi Komplemen
A.
C C
Tak ada
Lisis
Komplemen Komplemen
Terikat
Sensitized SDM
B.
C C Lisis
Komplemen Komplemen
Bebas
Serum
dgn. Ab
Serum
tanpa Ab
Uji Positif
Uji Negatif

30. A.
Gambar 17. Uji Netralisasi Toksin
Contoh : Uji ASO
Tak
hemolisisSDM
Kompleks
SO-ASO
SO ASO
SOB.
Reaksi Positif
Serum
tanpa ASO
SO
SDM
Reaksi Negatif
Hemolisis

31. II. IMUNOASAI BERLABEL
1. CAT FLUORESENS: IF
2. RADIOISOTOP: RIA
3. ENZIM: IMUNOASAI ENZIM ( EIA )
A. EIA HOMOGEN
B. EIA HETEROGEN (ELISA)
C. UJI IMUNO-PEROKSIDASE
4. EMAS KOLOIDAL:
ASAI IMUNOKROMATOGRAFIK (ICA)

32. CUCI
Mikroskop
Fluoresens
Ab diket berlabel cat
fluoresens
Ag tak diket.
Fiksasi pada
slide
Kompleks Ag-Ab
Berfluoresensi
Gambar 18. Prinsip dasar uji imunofluoresens
langsung.
1. IMUNOASAI FLUORESENS (IF)

33. CuciAg diket.
Ab tak
diket
Cuci
Mikroskop
Fluoresens
Kompleks Ag – Ab
tak tampak
AHG dilabel
Fluorescein
Kompleks Ag – Ab – AHG
berfluoresensi
Gambar 19. Prinsip dasar uji imunofluoresens
tak langsung.

34. KELEMAHAN UJI IF
 Peralatan canggih dan mahal
 Perlu tenaga terlatih
 Per hari maks 25 slide / analis
 Sukar dibuat otomatis
 Pelaksanaan agak kompleks & membosankan

35. Gambar 20. Prinsip dasar Uji RIA
R = label radioisotop
R
RR
R
R
R
R
R
R
Radiation
Counter
2. Uji RIA

36. PEMISAHAN Ag / Ab BERLABEL yg TERIKAT
drp yg BEBAS
 Paper Electrophoresis
 Presipitasi
 Adsorbsi
 IMOBILISASI pd FASE PADAT

37. Gambar 21. Prinsip dasar Uji RIA kompetitif
R
R
R
R
R
R R
RADIATION
COUNTER
Cuci

38. KELEMAHAN UJI RIA
 Butuh alat mahal & tenaga terlatih
 Waktu paruh reagens amat pendek ( 1,5 – 2 bln )
 Perlu perlindungan khusus pd petugas lab.
 Perlu tempat pembuangan reagens yang khusus

39. BERBAGAI MACAM EIA :
A. EIA yang HOMOGEN; label berbeda sifat
tergantung pada keadaan reagensianya
TERIKAT/TIDAK pada lawan reaksinya
 TAK MEMBUTUHKAN PEMISAHAAN
B. EIA yang HETEROGEN; label TAK berbeda sifat
baik reagensinya dalam keadaan terikat maupun
BEBAS pada lawan reaksinya  PERLU
PEMISAHAAN bag. terikat dari yang bebas
3. Imunoasai Enzim (EIA)

40. SUBSTRAT
BERKROMOGEN
PRODUK
berwarna
Ab pada
Fase padat
Ag berlabel
enzim
Gambar 22. Prinsip dasar uji ELISA kompetitif
Uji ELISA
Ag dlm serum

41. SUBSTRAT
berkromogen
PRODUK
berwarna
Ag
Ab I pada
Fase padat
Ab II berlabel
enzim
Gambar 23. Prinsip dasar double antibody sandwich ELISA

42. Gambar 24. Prinsip dasar uji ELISA tak langsung
Ab
PRODUK
berwarna
SUBSTRAT
berkromogen
Ag pada
Fase padat
Anti –Ig berlabel
enzim

43. 4. ICA / Uji Aliran Samping ( lateral flow test )
atau uji strip Asai Berlabel Spt IFA, RIA & EIA
BEDA DENGAN IFA & RIA
Tak perlu alat canggih Dibaca dg mata
telanjang
Amat
praktis
BEDA DENGAN EIA / DOT EIA Tak perlu substrat
berkromogen
* Waktu pemeriksaan <
* Konjugat dg label colloidal gold Amat sensitif
Waktu pemeriksaan <<  90 det – 15 men
* Bantalan Abs Aliran reagen ke lateral > cepat

44. Jadi : ICA  Sarana lab yang  Praktis
 Andal
Amat dibutuhkan di negara sedang berkembang
DASARNYA : Tiap legan yang dapat diikat pada
partikel padat berwarna (mikrosfer)
 dapat dipakai untuk uji ICA
Contoh : tes kehamilan, Strepthroat, Chlamydia
& ICT-TB

45. PRINSIP DASAR ICA (UJI STRIP)
Dapat dipakai untuk melacak analit maupun Ab.
I. ICA untuk melacak analit.
Ada 2 cara pendekatan utama yaitu :
• NON- KOMPETITIF (Langsung) &
• KOMPETITIF / HAMBATAN KOMPETITIF

46. GAMBAR 25
Bila sampel berisi analit ikatan analit-konjugat  ikut
aliran lateral  ditangkap oleh Ab ke 2 pd grs pengikat 
warna.
Syarat: 1. Mol. analit cukup besar (  2 epitope)
2. [analit] < [Ab pengikat] atau [Ab pelacak]

47. Sisa konjugat bergerak terus ( diisap oleh bantalan Abs) 
ditangkap oleh Ab spec. spes. pada garis kontrol warna
Gambar 26
= emas koloidal
= Ag/analit
= Ab pelacak (konjugat)
= Ab pengikat (Ab ke 2)
= Ab spesies spesifik pd grs kontrol
Sample Flow

48. II. ICA untuk melacak antibodi
Dipakai 2 prinsip dasar asai tak langsung (indirect
assay)
1. Ab (serum)  Ag (capture line) 
kompleks Ag-Ab   konjugat  Ag-Ab-
Konj (di garis pengikat)
2. Ab  konjugat  diikat Ag pada garis
pengikat (capture line)  sisa konjugat
dihisap oleh absorben pad  diikat oleh
antikonjugat (contol line)

49. Ab
AH Glob berlabel
coloidal gold
Ag Antikonjugat

Gambar 28

50. Sample pad
(bantalan
sampel)
Conjugate pad
(bantalan
konjugat)
Capture line (garis pengikat)
Mengandung Ag
1 epitop protektif
2 epitop infeksi berat
Garis kontrol/control line
(mengikat sisa konjugat)
Absorbance pad
(bantalan
absorban)
1 2
1 2 Kontrol
TB aktif
1 2 Kontrol
1 2 Kontrol
Tertular tidak sakit
Teknik salah/reagens rusak
Contoh aplikasi ICT-TB.

51. Session I
selesai..!!

52. PENENTUAN
C-REAKTIF PROTEIN (CRP)
Dr. Jusak Nugraha, dr, MS, SpPK
(KGH,K-Im,KT-I)
Bagian Patologi Klinik
FK UNAIR / RSUD Dr. Soetomo, Surabaya

53. APA ??? - Tergolong dalam Protein Fase
Akut - Serum normal; jumlah kecil
- Radang /nekrosis ; dapat sampai
1000 X
INDIKASI PEMERIKSAAN.
1. Membantu menegakkan Dx kead. penyakit
radang/ nekrosis
2. Mengikuti hasil Tx peny. radang akut/nekrosis.

54. Gambar 43. Sintesis dan aktivitas biologis dari CRP
HEPAR
IL-1, IL-6
PGE1
CRP
Mengikat bakteria  presipitasi
Aktivitas & motilitas fagosit 
Aktivasi C ( klasik & alternatif )
Menghambat agregasi trombosit (Adrenalin
ADP maupun kolagen)
Mempunyai daya ikat selektif
terhadap Limfosit T.
COLCHICIN
NEKROSIS
JARINGAN

55. Gambar 44. Perubahan kadar CRP-serum setelah suatu
operasi tanpa penyulit
Jam setelah operasi

56. PRINSIP DASAR PENENTUAN CRP
Merupakan reverse serology.
Ada 2 prinsip dasar dari berbagai cara yg dipakai
1. UJI PRESIPITASI
CRP  Ag yang akan ditentukan, dg anti –
CRP yang diketahui.
2. UJI AGLUTINASI PASIF
Merupakan reverse passive
agglutination test

57. Anti – CRP pada
partikel
CRP dalam
serum
AGLUTINASI
Gambar 45. Prinsip dasar REVERSE
PASSIVE AGGLUTINATION TEST

58. CARA PEMERIKSAAN.
1. CARA PRESIPITASI KAPILER
Tinggi presipitat diukur dalam
mm; 1 mm = + , 2 mm=++.
2. CARA AGLUTINASI LATEKS
Pos.  0,5 mg/dl. Neg  encerkan
1:10
3. R.I.D : Ukur diameter cincin presipitasi.
Tentukan kadar CRP dg kurva baku.
HARGA NORMAL : RIA 1,3 mg/1 ( 0,068-8,2 mg/1
)
4. Nephelometris : Amat sensitif. (Tes hs-.
CRP)

59. Positi
f
Negati
fGambar 47. Uji aglutinasi slide / lempeng

60. NILAI KLINIS/FISIOPATOLOGIS.
Liniaritas & aselaritasnya amat baik .
PENGGUNAAN KLINIS.
1. Uji penyaring peny. organik ; pada
radang / nekrosis CRP 
2. Penentuan aktivitas peny. radang ; punya
kelebihan daripada indikator nonspesifik lain ( LED,
pyrexia dll ).
3. Membantu Dx & evaluasi hasil Tx dr peny.
infeksi.
( Septikemis pada anak, SLE disertai infeksi )

61. Session II
Selesai..!!

62. PENENTUAN FAKTOR RHEMATOID
( RHEUMATOID FACTOR )
UJI ROSE – WAALER DAN MODIFIKASINYA
Dr. Jusak Nugraha, dr, MS SpPK
(KGH, K-Im,KT-I)
Bagian Patologi Klinik
FK UNAIR / RSUD Dr. Soetomo, Surabaya

63. Apa ???
Faktor rhematoid ( RF )= otoantibodi (Ig
M, Ig G, Ig A ) yang ditujukan thd Ig G
(anti-Ig G) & terbentuk dalam stadia agak
lanjut dari penyakit artritis rhematoid (
RA )
UJI ROSE-WAALER / AGLUT. LATEKS.
Hanya Ig M anti-Ig G yg dapat
ditentukan.
INDIKASI PEMERIKSAAN.
Membantu menegakkan Dx &
menentukan prognosis penyakit RA

64. Ag X ( EBV )  SENDI
SEL-2 IMUNOKOMPETEN Limfosit --
B
T-
Suppressor (
terganggu )
T-Helper
Sel
Plasma
RF ( Anti-Ig G )
Ig M, Ig G & Ig A
Anti X – Ab
(terut. Ig G)
IMUNOPATOGENESIS ARTRITIS REMATOID
Gangguan
glikosilasi

65. + +
Ag Larut
Partikel
Partikel disalut Ag
Ab dalam serum
Aglutinasi
Gambar 48. Aglutinasi

66. UJI ROSE-WAALER.
SERUM * Waterbath 50°C, ½
jam
Encerkan secara serial ( 1/32 –
1/1792 )
Tambahkan susp SDM ( 5 % ) yg
sensitized
INKUBASI 4°C 18 jam
Baca adanya aglutinasi (HN
1:32)
* Untuk hilangkan aglutinin nonspesifik (Ab
heterofil), serum & SDM domba yang dipadatkan (
4 : 1 ), inkubasi 40 men, 2 kali.

67. Gambar 49. Uji Rose-

68. Gambar 50. Uji Rose-Waaler. Untuk
memastikan hasil positif atau negatif

69. NILAI KLINIS/FISIOPATOLOGIS .
Tidak begitu baik. Faktor2 yang perlu
diperhatikan
1. Pos pada 70 – 80 % pend RA ( 6 – 12 bl )
2. Pos. stad dini/titer amat tinggi  prog.
jelek
3. 20 – 30% kasus RA tes tetap neg  prog.
baik
4. Korelasi pos. dg nod subcutan, arthritis
pergelangan tangan asimetris dg
deformitas &
manifestasi viseral RA

70. 5. Hasil pos terdapat juga pada :
a. SLE ( 30 – 50 % )
b. Scleroderma ( 30% )
c. Sjörgen’s syndrome ( 75% )
d. Endocarditis lenta
e. Hepatitis menahun & agresif
f. Beberapa peny. virus (Herpes zoster,
influenza A, Viral hepatitis)
g. Orang normal : 4 - 6%
6. Peny. Sendi dg hasil tes yg negatif :
Gout, Artrosis, Demam rhematik, Ankylosing
spondylitis, Reiter’s disease & psoriatic
arthritis

71. Session V selesai…!!

72. PENENTUAN
ANTISTREPTOLISIN O (ASO)
Dr. JusakNugraha, dr, MS, SpPK
(KGH,KIm,KT-I)
Bagian Patologi Klinik
FK UNAIR / RSUD Dr. Soetomo, Surabaya

73. ASO ???  Ab thd enzim proteolitik SO.
SO ???  Produk ekstra-seluler dr -
hemolitik streptococcus group A,C humanus
& G dari Lancefield
Aktivitas biologik ; merusak dinding SDM
INDIKASI PEMERIKSAAN.
1. Bantu menegakkan Dx demam
rhematik & glomerulonephritis akut.
2. Meramalkan, relapse pada demam
rhematik

74. Streptolisin O, S
Streptokinase
Hyaluronidase
Diphosphopyridine
nucleotidase
Desoxyribonuclease A,
B, C,
a
b
c
d
Gambar 56. Struktur antigen  -hemolitik streptococcus group A dari
Lancefield. a = kapsul, b= komponen permukaan
dari dinding sel (CSMA) , c= dinding sel, d= komponen intraseluler.

75.  -hemolitik streptococcus group A
CSMA
SO SS STREPTOKINASE
Hyaluronidase
DNAse
SEL - SEL IMUNOKOMPETEN
Anti
CSMA
ASO (Spesifik)
ASS (tak
spesifik)
REAKSI SILANG DG ENDOCARD & GBM
DEMAM RHEMATIK
ANTIBODI

76. A. Tak ada
hemolisisSDM
Kompleks SO-
ASO
SO ASO
SOB.
Reaksi Positif
Serum tanpa
ASO
SO
SDM
Reaksi Negatif
Hemolisis
Gambar 57. Prinsip dasar uji Antistreptolisin O

77. Gambar 58. Prinsip dasar uji aglutinasi lateks
ASO
AGLUTINASI
(POSITIF)
SO, JUMLAH
TERTENTU ASO
SO pd
LATEKS
Serum pend.
(ASO > 200 iu)

78. HARGA NORMAL :
Batas atas ; 200 iu/ml. Pd 20 % orang
normal>200 iu/ml
Dipengaruhi usia & geografi/iklim.
- Bayi baru lahir ; > tinggi daripada Ibunya  
dengan tajam dalam beberapa minggu
- Usia sekolah ; titer mulai sp titer usia
dewasa
- Usia lanjut ; titer lagi.
- Titer normal  bila makin dekat katulistiwa

79. NILAI KLINIS/ FISIOPATOLOGIS .
- Kurang baik ; 20 % orang normal  ASO  200
iu
- Periksa 1X  tak punya arti DX yang
penting.
- ASO pos  ada/pernah infeksi dengan
Streptococcus,
dan tak berarti penderita suatu peny. tertentu
( demam rhematik ).
- Penyakit-2 hepar, ginjal & hyperlipidemia  pos.
semu
o.k. inhibator nonspesifik  absorbsi/LAT

80. TERIMA KASIH ATAS
PERHATIAN ANDA