1. V. TAXONOMÍA DE LOS PROCARIOTAS
Tema 41. Técnicas de identificación bacteriana.

2. Técnicas de identificación bacteriana.
I. Concepto y tipos de diagnóstico
II. Técnicas utilizadas en el diagnóstico directo
1. Técnicas de microbiología clásica
2. Técnicas inmunológicas.
3. Técnicas de biología molecular
4. Otras técnicas específicas.
III. Técnicas utilizadas en el diagnóstico indirecto

3. Técnicas de identificación bacteriana.
I. Concepto y tipos de diagnóstico
II. Técnicas utilizadas en el diagnóstico directo
1. Técnicas de microbiología clásica
2. Técnicas inmunológicas.
3. Técnicas de biología molecular
4. Otras técnicas específicas.
III. Técnicas utilizadas en el diagnóstico indirecto

4. I. Concepto y tipos de diagnóstico
DIAGNÓSTICO DIRECTO: se identifican los microorganismos, sus antígenos,
sus metabolitos
DIAGNÓSTICO INDIRECTO: se identifican los anticuerpos frente a los
microorganismos

5. Diagnóstico directo:
•Se analiza cualquier muestra
Diagnóstico indirecto:
*la muestra estudiada es siempre la sangre

6. II. Técnicas utilizadas en el
diagnóstico directo.
1. Técnicas de microbiología clásica
2. Técnicas de biología molecular
3. Técnicas inmunológicas
4. Otras técnicas específicas.

7. 1. TÉCNICAS DE MICROBIOLOGÍA CLÁSICA
• Observación macroscópica y
microscópica
• Enriquecimiento y aislamiento
• Cultivo puro
• Identificación
2. TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS: para
identificar Ag
• IF: inmunofluorescencia
• RIA: radioinmunoanálisis
• ELISA: enzimoinmunoanálisis
• CIE: contrainmunoelectroforesis

8. 3. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
•PCR + SONDAS ESPECÍFICAS
4. OTRAS TÉCNICAS ESPECÍFICAS
•BIOENSAYO: ensayos en animales de
experimentación o en cultivos celulares
•CROMATOGRAFÍA GASEOSA: ácidos
grasos(Mycobacterium)
•TEST DEL ALIENTO (Helicobacter)

9. II. Técnicas utilizadas en el
diagnóstico directo
1. Técnicas de microbiología clásica
Etapas:
-Toma de muestra
-Análisis macroscópico
-Microscopía
-Enriquecimiento
-Aislamiento
-Identificación

10. Toma de muestras: primera etapa
La muestra a tomar y la forma de hacerlo
dependerá del tipo de enfermedad
infecciosa
•Orina: ITU
•Heces: infección intestinal
•Esputo: infección respirartorio inferior
•Sangre: infección sistemica
•Secreciones: ETS
•Otras
Los recipientes serán estériles

11. Tosferina: como el
microorganismo es muy lábil el
paciente tose sobre la muestra

12. Muestras usadas en el diagnóstico directo
Las muestras de Dispositivo para tomar una
heces se toman muestra de orina
enrecipientes directamente en la vegija
anchos

13. Toma de
muestra del
respiratorio
inferior y
superior
Escobillón estéril

14. Toma de muestra de sangre
Toma de muestra del LCR
(meningitis)

15. Examen macroscópico de la muestra:
segunda etapa
Puede orientar el diagnóstico
Esputo: color, presencia de sangre
Orina: turbidez, olor, color
LCR: turbidez
Heces: pus, sangre, restos celulares

16. Examen microscópico de la muestra: segunda etapa
Según cada caso se recurrirá a una
técnica microscópica (óptica,
fluorescencia, contraste de fase)
y tipo de tinción (Gram, Ziehl-Neelsen)
Muy útil cuando…
La bacteria tiene una morfología muy típica:
Neisseria, Vibrio, Treponema
La bacteria no se puede cultivar

17. Mycobacterium: tinción de AAR
Ejemplos:
Neisseria: tinción de Gram
IF
Treponema: contraste de fase

18. Enriquecimiento: cuarta etapa
(opcional)
•Si la muestra esta diluida
•Si la bacteria que se desea aislar
presenta una característica útil
para su enriquecimiento

19. Ejemplos
AISLAMIENTO DE VIBRIO
CHOLERAE
-Enriquecimiento selectivo en
agua de peptona alcalina.
DESPUÉS
-Aislamiento en TCBS
(tiosulfato, citrato, bilis y
sacarosa)
-Sensibilidad al O/129.

20. Staphylococcus aureus: puede crecer en
presencia de sales
Enriquecimiento con NaCl 10% (TSB;
Giolitti Cantoni)

21. DESPUES: Medios selectivos para Staphylococcus aureus
Baird-Parker (telurito)
Manitol salado

22. Aislamiento: quinta etapa
Se utilizan
Medios ordinarios
Medios enriquecidos
Medios selectivos
Medios diferenciales
Medios de enriquecimiento
Su tipo depende del análisis y juega un
papel decisivo el buen criterio del analista

23. Aislamiento Medios TCBS para Escherichia coli
Medios selectivos y diferenciales para las enterobacterias Medio ordinario

24. A veces es aconsejable usar
incubación en bajas
tensiones de oxígeno para
favorecer el aislamiento o
actividad de determinadas
bacterias
Ej: crecimiento y hemolisis
de Streptococcus

25. Identificación: sexta etapa, utilizando
pruebas hechas en el laboratorio o
miniaturas comercializadas

26. Ejemplos
Pruebas Bioquímicas, fisiológicas y nutricionales
Betahemolisis
Sistema API
DNAsa

27. Sistema API

28. Antibiograma: séptima etapa
•No siempre se realiza
•No es una técnica de identificación
•Para seleccionar los antimicrobianos a
ensayar debería tenerse ya el
microorganismo identificado

29. ANTIBIOGRAMA: Técnica de Müeller-Hinton
Disco impregnado de antibiótico

30. II. Técnicas utilizadas en el
diagnóstico directo.
1.Técnicas de microbiología clásica
2.Técnicas de biología molecular
3. Técnicas inmunológicas.
4. Otras técnicas específicas.

31. Hibridación con sondas específicas marcadas

32. AMPLIFICACIÓN DEL DNA DE LA MUESTRA POR PCR

33. Técnicas de identificación bacteriana.
I. Concepto y tipos de diagnóstico
II. Técnicas utilizadas en el diagnóstico directo
1. Técnicas de microbiología clásica
2. Técnicas de biología molecular
Tecnicas
Inmunológicas
2. Técnicas inmunológicas. Directas
4. Otras técnicas específicas.
III. Técnicas utilizadas en el diagnóstico indirecto
Tecnicas inmunológicas indirectas

34. TECNICAS INMUNOLÓGICAS EN EL DIAGNOSTICO DIRECTO
•Se investigan los microorganismos mediante sus antígenos.
•La muestras pueden ser diversas
•Reactivo: el Ab
TECNICAS INMUNOLÓGICAS EN EL DIAGNOSTICO
INDIRECTO (serología)
•Se investigan los anticuerpos formados frente a un
microorganismo.
•La muestra es el suero
•Reactivo: el Ag

35. Existen ya pruebas comercializadas para identificar
a los microorganismos patógenos más importantes

36. 1. Reacciones de precipitación: medio sólido
Cuando el Ag
y el Ab se
mezclan en
las
proporciones
adecuadas
se forma un
precipitado

37. Inmunodifusión (precipitación) Ag
Un suero
que puede
tener Ab
Anillo de precipitación

38. Inmunoelectroforesis: inmunodifusion + electroforesis
1. electroforesis: las mezcla de
Ag se separa
2. Se enfrentan al anticuerpo
3. Si son específicos precipitan
juntos

39. Reacciones de aglutinación:
Medio líquido: se hacen en tubos o en placas
de microtitulación. Diagnóstico indirecto
Distintas muestras
Muestra positiva
La concentración de Ab va disminuyendo
ASLO (anti-estreptolisina O): Se buscan Ab frente a la
estreptolisina O de Streptococcus pyogenes (diagnóstico
de la fiebre reumática)

40. Aglutinación en medio líquido

41. Aglutinación en látex para Staphylococcus
aureus
Se mezcla un colonia con Ab específicos contra la
proteína A
Se observa la aparición o no de grumos

43. Inhibición de la hemaglutinación
Al bloquear el microorganismo con sus Ab específicos
(presentes en el suero del enfermo) no se da la
hemaglutinación

45. Fijación del Complemento
-Ab +Ab El C se une
sólo si Ag y
Ab han
reaccionado
Como el C está libre produce la lisis de los hematíes que a
su vez han reaccionado con su Ab; en el tubo de la derecha
no es posible porque el C se ha consumido en la otra
reacción

46. 4. Inmunofluorescencia (IF, IFD)

47. Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI)

50. Bacteria (Legionella) teñida con anticuerpos
fluorescentes y vista al microscopio de luz UV

51. 6. Enzimoinmunoanálisis
(ELISA)

53. Inmunoblot o
Inmunotransferencia