1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28649
(51) A61B 16/00 (2006.01)
G01N 33/48 (2006.01)
G01N 33/50 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1244.1
(22) 20.09.2013
(45) 15.07.2014, бюл. №7
(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна; Латыпова
Залина Акрамовна; Анаятова Багдагуль
Жамалиевна; Омарбек Нуржан Сабажанулы
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) http://www.refeFent.ru/17119807/similar,
30.11.2007
(54) СПОСОБ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ
ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ-
МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ
РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА
ОРГАНИЗМ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
(57) Изобретение относится к медико-
биологической области и может быть использовано
при оценке безопасности генетически-
модифицированных организмов растительного
происхождения в опыте на лабораторных животных.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке способа
медико-биологической оценки, основанного на
изучении отдаленного во времени действия
генетически-модифицированных организмов на
генеративные функции пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
белых крыс до 5 поколения, с выявлением
структурных изменений на клеточном уровне при
гистологическом исследовании внутренних оргнов.
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных крыс, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели,
дополнительно включает исследования
генеративных функций, пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
животных, в рацион питания которых входил корм,
содержащий генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, с
определением эмбриотоксичности и тератогенности
до 5 поколения и выявление воздействия
генетичеки-модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрении на клеточном уровне, в качестве
экспериментальной модели используют
беспородных лабораторных белых крыс, затем
исследуют генеративные функции при ренатальном
и постнатальном развитии потомства лабораторных
крыс в более длительные сроки до 5 поколения с
выявлением патологических изменений в печени,
селезенке, репродуктивных органах проявляющихся
уменьшением размера матки, асимметрией ее
формы в виде гипоплазии одного из рогов матки,
отсутствием или уменьшением количества плодов,
незрелостью внутренних органов, отсутствием
одного из трех листков экто, энто-, мезо-дермы и
гистологическими изменениями в виде
неравномерной пролиферации желез с увеличением
количества бокаловидных клеток, инфильтрации
подслизистой основы лимфоцитами вплоть до
образования лимфоидных фолликул в желудке,
зернистой и гидропической белковой дистрофии
гепатоцитов с микрофокусами некроза в печени,
уменьшения размеров и количества лимфоидных
фолликул, отсутствия герминативных центров в
селезенке, гидропической, зернистой дистрофии
хрящевых клеток, фрагментацией, гипоплазии
миоцитов, частичной десквамации клеток
эктодермы плодов, которые дают оценку
воздействия генетически модифицированных
организмов на организм лабораторных животных,
устанавливают эмбриотоксичность и
тератогенность.
(19)KZ(13)A4(11)28649

2. 28649
2
Изобретение относится к медико-биологической
области и может быть использовано при оценке
безопасности генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения в опыте
на лабораторных животных.
Известен способ медико-биологической оценки
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели, а
также исследования репродуктивной токсичности
ГМО на лабораторных животных, которые
включают изучение влияния на генеративную
функцию, эмбриотоксического и тератогенного
действий, регистрируемых в пренатальном и
постнатальном периодах развития
[http://www.referent.ru/l/119807/similar]
ПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного
санитарного врача РФ от 30.11.2007 N 80 "О
НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ
ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО". Дата
документа 30.11.2007. Приложение 1, Медико-
биологическая оценка безопасности генно-
инженерно-модифицированных организмов
растительного происхождения. Методические
указания МУ 2.3.2.2306-07.
Недостатком указанного способа является то, что
он не охватывает исследование отдаленного
действия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
генеративную функцию, пренатальный и
постнатальный периоды развития потомства
лабораторных животных до 5 поколения,
гистологические исследования внутренних органов.
В качестве лабораторной модели используют
дорогостоящих крыс линии Вистар.
Задачей изобретения является разработка
способа оценки репродуктивной токсичности
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения на организм
лабораторных животных.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке способа
медико-биологической оценки, основанного на
изучении отдаленного во времени действия
генетически-модифицированных организмов на
генеративные функции, пренатальное и
постнатальное развитие потомства лабораторных
белых крыс до 5 поколения, с выявлением
структурных изменений на клеточном уровне при
гистологическом иследовании внутренних органов.
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных животных, включающий
гематологические, биохимические и
иммунологические показатели, дополнительно
включает исследование генеративных функций,
пренатальное и постнатальное развитие потомства
лабораторных животных, в рацион питания которых
входил корм, содержащий генетически-
модифицированные организмы, с определением
эмбриотоксичности и тератогенности до 5
поколения и выявление воздействия генетичеки-
модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрение на клеточном уровне.
Изучают 5 поколений лабораторных белых крыс:
родительское (F0), первое (F1), второе (F2), третье
(F3), четвертое (F4) и пятое (F5). Исходная колония
крыс (самки и самцы, возраст - 40-50 дней).
Животных делят на две группы опытную и
контрольную. Каждая группа состоит из 50 белых
крыс (30 самок и 20 самцов). В рацион питания
животных «опытной» группы включают корм,
содержащий 5% генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, крысы
«контрольной» группы получают традиционный
аналог исследуемого генетически-
модифицированного корма по 10 грамм на крысу.
Экспериментальные рационы животные получают
на протяжении всего срока эксперимента.
В каждой группе к началу спаривания не менее
15-20 самцов и 20-30 самок, у которых перед
началом опыта проверяют астральный цикл. Для
оплодотворения самок подсаживают к самцам в
соотношении 3:2 сроком на 1 эстральный цикл
(5 дней).
Крысят отсаживают от матерей на 30-й день
жизни, для продолжения эксперимента отбирают
потомство от разных самок (с целью рандомизации
исследований и избежание инцеста). В течение
эксперимента ведутся наблюдения за поедаемостью
корма.
Пренатальное и постнатальное развитие
потомства определяют на лабораторных животных.
Берут по 5 беременных самок из каждой группы,
подвергают эвтаназии на 19-20-й день
беременности. При вскрытии проводят
морфологическое исследование репродуктивных
органов: (матки и плаценты), плодов: определяют
количество мест имплантации и резорбции по
правому и левому рогу матки.
После чего проводят наблюдение постнатального
развития потомства. Для этого в первый день жизни
определяют величину помета в день родов,
подсчитывают количество живых и мертвых крысят,
особей разного пола, устанавливают внешние
уродства, измеряют массу тела. При эвтаназии у
лабораторных крыс осуществляют забор крови,
путем декапитации, в количестве 5-6 см3
для
дальнейших гематологических, биохимических и
иммунологических исследований.
Постнатальное развитие потомства оценивают в
течение первого месяца жизни. Для этого в первый
день жизни определяют величину помета в день
родов, подсчитывают количество живых и мертвых
крысят, особей разного пола, устанавливают
внешние уродства, измеряют массу тела. Массу тела
и краниокаудальный размер крысят измеряют на
2-е, 5-е, 10-е, 15-е, 20-е и 25-е сутки жизни. Также
определяли среднюю величину помета,
соотношение самцов и самок. Для продолжения
опыта отбирают второе поколение 30- дневных
белых крысят и сформировывают опытную и
контрольную группы по 30 самок и 20 самцов в

3. 28649
3
каждой. Далее повторяют серию опытов описанную
выше и так до пяти поколений.
Эмбриотоксичность и тератогенность
генетически-модифицированных организмов
растительного происхождения (ГМО) в
пренатальный и постнатальный периоды
определяют на лабораторных белых крысах и их
потомстве. У них устанавливают исходные
морфологические показатели органов размножения.
Для патоморфологических работ отбирают
образцы органов и тканей животных. После взятия
образцы фиксируют в 96° спирте и 10% растворе
формалина, далее подвергают парафиновой
проводке, заливке их в парафин. Для изучения
гистологической картины изготавливают
гистосрезы из опытных образцов тканей органов
экспериментальных животных. Срезы окрашивают
гемотоксилин эозином и рассматривают под
микроскопом.
Определяют следующие изменения в
постнатальном развитии потомства 3-5 поколений:
уменьшение общего количества крысят, средней
величины помета и процента выживаемости
животных; макро и микроскопические изменения у
животных: уменьшение размера матки, асимметрию
ее формы в виде гипоплазии одного из рогов матки.
Устанавливают отсутствие или уменьшение
количества плодов, а также определяют наличие и
количество гипоплазированных плодов.
Паренхиматозные органы, печень и селезенка,
дряблой консистенции. В печени наблюдают
зернистую и гидропическую белковую дистрофию
гепатоцитов с микрофокусами некроза. В селезенке
определяют уменьшение размеров и количества
лимфоидных фолликул, отсутствие герминативных
центров. Желудочно-кишечный тракта имеет
неравномерную пролиферацию подслизистой
основы лимфоцитами вплоть до образования
лимфоидных фолликул. У плодов животных
определяют незрелость внутренних органов,
отсутствие одного из трех листков (экто-, энто-,
мезо- дермы). Наблюдают гидропическую,
зернистую дистрофию хрящевых клеток,
фрагментацию, гипоплазию миоцитов, частичную
десквамацию клеток эктодермы.
Таким образом, после введения в рацион
кормления генетически-модифицированного корма,
лабораторным животным, изменяется макро и
микроскопическая структура внутренних органов
животных и их плодов, наблюдают признаки
эмбриотоксичности.
Заявляемый способ определения медико-
биологической оценки ГМО растительного
происхождения, отличается высокой
информативностью, поскольку феномен
репродуктивной токсичности высокочувствителен
ко всем изменениям. Срок проведения эксперимента
(до 5 поколений) дает возможность проследить
отдаленное действие ГМО растительного
происхождения на репродуктивную функцию и
организм животных в целом. Использование
разработаного способа отличается технической и
экономической доступностью.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ медико-биологической оценки
воздействия генетически-модифицированных
организмов растительного происхождения на
организм лабораторных животных, включающий
интегральные, гематологические, биохимические,
морфологические, иммунологические показатели,
исследование генеративных функций, пренатальное
и постнатальное развитие потомства лабораторных
животных, в рацион питания которых вводят корм,
содержащий генетически модифицированные
организмы растительного происхождения, с
определением эмбриотоксичности и тератогенности
и выявление воздействия генетически-
модифицированных организмов при
патологоанатомическом и гистологическом
рассмотрении на клеточном уровне,
отличающийся тем, что в качестве
экспериментальной модели используют
беспородных лабораторных белых крыс, у которых
исследуют генеративные функции при
пренатальном и постнатальном развитии их
потомства до 5 поколения, и, при выявлении
уменьшения размера матки, асимметрии ее формы в
виде гипоплазии одного из рогов, отсутствии или
уменьшении количества плодов, незрелости
внутренних органов, отсутствии одного из трех
листков экто-, энто-, мезодермы, а также, при
гистологических изменениях в виде неравномерной
пролиферации желез с увеличением количества
бокаловидных клеток, инфильтрацией подслизистой
основы лимфоцитами вплоть до образования
лимфоидных фолликул в желудке, зернистой и
гидропической белковой дистрофии гепатоцитов с
микрофокусами некроза в печени, уменьшении
размеров и количества лимфоидных фолликул,
отсутствии герминативных центров в селезенке,
частичной десквамации клеток эктодермы плодов, -
оценивают отдаленное отрицательное воздействие
генетически модифицированных организмов на
организм лабораторных животных.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч