La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es una técnica que permite amplificar millones de veces una secuencia específica de ADN a través de ciclos repetidos de copia fiel. Inventada en 1985 por Kary Mullis, utiliza una polimerasa termoestable procedente de la bacteria Thermus aquaticus para copiar un fragmento de ADN delimitado por cebadores, multiplicándolo exponencialmente a altas temperaturas en una termocicladora. El resultado permite detectar cantidades muy pequeñas de material genético.

2. La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción
enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia
específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la
secuencia blanco es copiada fielmente.
† Inventada en 1985 por KaryB.Mullis
† Premio Nobel de Química, 1993

3. La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un fragmento de ADN
utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene
de la bacteria Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas (79°C a 85°C), de ahí su
nombre comercial mas conocido: taq polimerasa.

4. † DNA molde o templado:
contiene la región que queremos amplificar.
† Primers:
Secuencias cortas de DNA (oligonucleótidos) que delimitan la zona que
queremos amplificar. Deben ser complementarios a cada uno de los extremos
de la región a amplificar. Se sintetizan in vitro de un modo preciso para que a
partir de su región 3‟, la polimerasa inicie la síntesis en dirección correcta
† Mezcla de los 4 deoxirribonucleótidos trifosfato que componen el DNA.
† DNA Polimerasa: polimerasa capaz de resistir elevadas temperaturas
(TaqPol)
† Termocicladora: Una máquina que haga ciclos controlados de temperatura (Máquina
de PCR, PCRra)

5. 95° C 1 minuto
54° C 45 segundos
72° C 2 minutos

6. Al final de la PCR, para saber si la reacción transcurrió eficientemente, los
ampliaciones son visualizados a través de una electroforesis en geles de agarosa.

7. PCR anidada
En esta variante de PCR, el producto de una amplificación es utilizado como molde
para realizar una segunda amplificación con iniciadores que se ubican dentro de la primera
secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente específica

8. PCR múltiple.
Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con mas de 2 primers, para amplificar
varias regiones al mismo tiempo.

9. PCR in situ
Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consiste
en una reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos generados
pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se realiza para ello una primera amplificación
del ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ convencional con sondas de
ADN/ARN. De esta manera puede detectarse cantidades pequeñísimas del material genético

10. PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR).
Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de una transcriptasa
inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc.
 1.er paso: retrotranscripción a partir del ARN.
 2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc.
 3.er paso: PCR estándar.

11. La PCR cuantitativa o PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena
de la polimerasa utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el
producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico
PCR en tiempo real.

12. † Huella digital genética
† Test de paternidad
† Detección de enfermedades
hereditarias
† Comparación de la expresión
génica
† Clonamiento de genes
† Análisis de ADN antiguo