PCR-Reacción en cadena de la Polimerasa

O bien: Reacción en cadena de la Polimerasa Polymerase Chain Reaction PCR Reyes García Marco Antonio

Kary Mullis (1944 - ) Premio nóbel de química 1993 ,[object Object],“ Es una técnica que consigue encontrar la aguja en un pajar al tiempo que produce un pajar de agujas por amplificación selectiva”

La ADN polimerasa es una enzima que cataliza la síntesis de ADN a partir de desoxirribonucléicos y de una molecula de ADN plantilla o molde (DIANA) que es la que será "copiada". La muestra de ADN no necesariamente debe estar pura, puede encontrarse como parte de mezclas complejas. Debido a que el proceso requiere de altas temperaturas, se utilizan Polymerasas de organismos generalmente arqueas , que no se desnaturalicen por esta variante como: Thermofilus aquaticus (polimerasa Taq), Pyrococcus Furiosus (Pfu), Thermococcus litoralis (Vent) y Thermus Termophilus (Tth).

¡Para realizar una PCR necesitas!: ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]

Termociclador ,[object Object],Ejemplo: PCR del gen bla IMP gen responsable de la resistencia a IMIPENEM en pseudomonas aeruginosa 1 ciclo 94° C - 3min 30 ciclos 94° C - 1min. 55° C - 1min 72° C -1.5min 1 ciclo 72° C- 7min

PCR Iniciación ,[object Object],Esto sólo es necesario para ADN polimerasas que requieran activación por calor.

Desnaturalización ,[object Object],[object Object]

[object Object],Alineamiento/Unión del cebador . La polimerasa une el híbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN

Extensión/Elongación de la cadena ,[object Object],[object Object],Factor exponencial en la replicación

Elongación Final ,[object Object],Lectura Electroforesis Lectura del corrimiento de un gel de agarosa al 0.7% cargado con DNA amplificado por PCR habiendo utilizado iniciadores específicos para ß-Lactamasas. El gel fue teñido con Bromuro de Etidio y leido en un trasiluminador, el cual arrojó la presente imagen. La información de cada ´pozo se encuentra arriba.

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