El proceso de la calibracion en Quimica Clinica es uno de los pasos mas criticos que define la calidad de los resultados en las pruebas. Sin embargo en la literatura tradicional se encuentra muy poco material que explique de forma clara, precisa y facil como realizarlo de manera que los principiantes en esta materia comprendan de manera practica y teorica en que consiste la calibracion de las pruebas. Ademas la automatizacion de los analisis en quimica clinica han dotado a los laboratorios de modernos equipos de Quimica clinica, con caracteristicas modernas y de vanguardia, pero que aun necesitan de los criterios que el profesional en laboratorio clinic debera considerer para poder validar las calibraciones del equipo.

1. “CALIBRACIONES, FORMAS DE
CALCULO Y MATERIALES DE
CONTROL EN QUIMICA
CLINICA”
Por Lic. Wilfredo Gochez,

2. Calibraciones, formas de calculo y materiales de
control en Quimica Clinica.
 El proceso de la calibracion en Quimica Clinica es uno de los pasos mas criticos que
define la calidad de los resultados en las pruebas.
 Sin embargo en la literatura tradicional se encuentra muy poco material que
explique de forma clara, precisa y facil como realizarlo de manera que los
principiantes en esta materia comprendan de manera practica y teorica en que
consiste la calibracion de las pruebas. Ademas la automatizacion de los analisis en
quimica clinica han dotado a los laboratorios de modernos equipos de Quimica
clinica, con caracteristicas modernas y de vanguardia, pero que aun necesitan de
los criterios que el profesional en laboratorio clinic debera considerer para poder
validar las calibraciones del equipo.

4.  Para comenzar se debe definir el termino calibracion para que todos tengamos un
concepto definido a que se refiere este proceso.
 DEFINICION CALIBRACION:
 La palabra calibracion se deriva del termino: “CALIBRADOR” que es sinonimo de
ESTANDAR. Lo cual quiere decir que Calibrador es igual a Estandar. Ahora
definamos que es un Estandar segun la CLSI (Clinical Laboratory Standar Institute),
se define como estandar: Aquella substancia altamente pura cuya concentracion
especifica de un analito, substrato o enzyme es conocida y esta no varia. La
tolerancia de pureza segun ACS es de 100% mas o menos 0.02. Estas substancias
son fabricadas con materias primas de la mas

5.  Alta pureza con calidad de AR (Analitycal Reagent), UP (Ultra pure), QP (
Quimicamente pura) segun la ACS(American Chemical Society).
 Dependiendo de la matriz de la cual este Estandar este hecho asi se definen los
tipos de calibrador, que pueden ser Estandares primaries o secundarios. Ambos
estan hechos con materiales de alta calidad certificados cuya concentracion es
garantia de que es exactamente segun lo define el fabricante y las variaciones son
practicamente inexistentes. Lo cual nos permite tomarlos como material de
calibracion confiablez, siempre y cuando tengan las certificaciones de pureza
necesarias.

6.  El CLSI es una organizacion sin fines de lucro ubicada en Waye PA, USA ( Estados
Unidos) cuyo objetivo es mejorar la calidad de los resultados de laboratorio clinico
por medio de la estandarizacion de procesos unificados y mejorados en busqueda
de la excelencia cientifica.
 Ahora sabemos que un Estandar no es una susbstancia comun y corriente, si no al
contrario, una sustancia de valor conocido que no varia y la cual ha sido fabricada
con las mas altas y mejores materias primas, lo cual garantiza su pureza y
concentracion. Siempre hay que evaluar la calidad de los reactivos a usar y la
calidad del agua destilada. (Ver clase sobre este tema)

7. Concentración
Magnitud

8.  Muy bien, ahora que ya defiimos que es un Calibrador o Estandar entonces
definamos que significa la palabra calibrar:
 “Se define CALIBRAR como: obtener un factor de Calibracion para ser usado en la
medicion cuantitativa de una prueba usando un espectrofotometro o analizador de
quimica clinica”.
 Entonces recordemos que es un factor de calibracion?
 DEFINICION FACTOR DE CALIBRACION:
 “El factor de calibracion es la relacion matematica entre una substancia de valor o
concentracion conocida y que se utiliza para determiner la concentracion de otras
substancias desconocidas”.

9.  Cuya formula matematica es la siguiente:
 FC = ( Concentracion Estandar/ Abs. Estandar)
 El FC x Abs. de la Muestra desconcida = Concentracion Muestra
 Que es igual a la formula:
 Abs. Muestra / Abs. Estandar x Concentracion Estandar.
 Ej. Determine la concentracion de glucose y el FC tomando en cuenta los siguientes
datos:
 ST Glucosa = 0.34 Concentracion ST glucose= 100 mg/dl
 Muestra desconocida 1: 0.30
 Muestra desconocida 2: 0.68

10.  Aplicando la formula:
 FC = 100 / 0.34 = 294
 Muestra 1:
 294 x 0.30 = 88.2 mg/dl o igual a: 0.30 / 0.34 x 100 = 88.2
 Muestra 2:
 294 x 0.68 = 200 mg/dl o igual a: 0.68 / 0.34 x 100 = 200
 Muy bien con este sencillo ej. aplicamos la formula del FC y ademas comprobamos
que es el mismo resultado que relacionar abs. de Estandares y muestras. El uso de
FC es mas practico cuando necesitamos aplicarlo en el calculo de varios resultados
simultaneous.

11.  Ademas los FC son utiles como parametros de referencia para conocer del estado
del equipo, reactivos y estandares, y son de gran ayuda en la deteccion de errores
de tipo sistematico.
 Entonces definiremos el proceso de CALIBRACION como:
 La obtencion de un factor de calibracion (FC) por prueba para ser utilizado en el
calculo de la concentracion de una sustancia desconocida. Usando Estandares de la
mas alta calidad y pureza disponibles en el mercado. Para garantizar que este
proceso se realize correctamente se deberan corer simultaneamente los sueros
control de nivel normal y anormal (I , II) obteniendo resultados, deseables, entre las
1 Dst y maximo 2 Dst. (Ver clase de Control de Calidad Interno)

12.  Este mismo principio que se usa en equipos manuales y semi automatizados, es el
que usan los aparatos de Quimica Automatizados, por ello es primordial que se
comprenda este proceso para poder facilitar el uso posterior de equipos
automatizados.
 Otro parametro a analizar son los factores que intervienen en las reacciones
quimicas, ya que estos son los que directamente inciden en los resultados finales
de las pruebas, y debemos tenerlos en consideracion para mantener controlado
todo el entorno que pueda afectar los resultados finales en la cuantificacion de los
analitos, substratos o enzimas en quimica clinica.

13.  Factores que intervienen en las pruebas quimicas(Puntos criticos):
 1- Protocolo de los Reactivos
 2- Tiempos de incubacion y lecturas
 3- Temperaturas de reaccion y pH
 4- Relacion de volumenes exactos de Muesta / reactivos
 5- Formas de Calculo
 6- Instrumentacion usada para la medicion de la reaccion.
 Etc.
 Vale aclarar que solo estamos considerando la fase analitica, en esta presentacion, sin
embargo las otras 2 fases juegan un rol critic en los resultados finales (Fases Pre y Post
Analiticas).

17.  De todos los puntos criticos que inciden directamente en las reacciones
estudiaremos uno de los mas importantes y que muchas veces es uno de los temas
mas olvidados en la literature de Quimica clinica, debido a la relative novedad en
estos metodos, nos referimos a las formas de calculo.
 DEFINICION: Formas de Calculo
 Se define como formas de calculo a la relacion matematica que expresa la reaccion
quimica (estequiometria) que ha ocurrido en el tubo de ensayo o en la cuveta de
reaccion del equipo, y que sirve para cuantificar en forma exacta la cantidad de la
substancia, analito, enzyme que esta presente al final de la reaccion.

18.  Estas formas de calculo vienen expresadas en los protocolos de las tecnicas, pero
deben ser insertados en las fichas tecnicas de los equipos semi y automatizados
para que se cumpla a cabalidad la estequiometria de la reaccion y esta pueda ser
medida de forma satisfactoria. En casos de proceos manuals, el operador tendra
que llevar los tiempos, incubaciones, lecturas y calculus respectivos para poder
cuantificar la reaccion.
 Existen diferentes formas de calculo usadas para distintas cuantificaciones de
pruebas, pero en este capitulo estudiaremos las mas importantes y de uso
frecuente en los laboratorios clinicos.
 El uso de estas depende mucho de la clase de equipos utilizados y su tiempo de
fabricacion. Los equipos mas nuevos son los que generalmente traen incorporados
en sus softwares estas formas de calculo.

19.  DIFERENTES FORMAS DE CALCULO:
 1- Punto final (End Point)
 2- Tiempo fijo (Fixed Time)
 3- Modo diferencial (Diferential Mode)
 4- Modo Cinetico (Kinetic Mode)
 5- Multiestandar (Curvas de Calibracion)
 6- Modo Corte (Cutt – Off)
 7- Etc.

23.  Las reacciones de Punto Final son expresadas en la siguiente ecuacion:
 R1 + Mx --------- Abs Donde: R1= Reactivo 1 o 2
 Mx= Volume de Muestra (suero,etc)
 Abs= Absorvancia final(unica)
 Estas reacciones son aquellas que desarrollan un color que es directamente
proporcional a la concentracion de la muestra (Ley de Beer-Lamber) o sea la
Absorvancia es directamente proporcional a la concentracion de la muestra. Son
reacciones visibles a simple vista y fueran las primeras en usarse en quimica clinica
a travez de la colorimetria. Ej. Glucosa, Colesterol, Trigliceridos, Ac. Urico, Albumina,
Proteinas totals, etc. Estas se realizan en los rangos de la luz visible.

24.  Las reacciones de Tiempo fijo, son aquellas que se expresan en la siguiente ecuacion:
 RT + Mx ---- Abs1 --Abs2 Donde: RT= Reactivo de trabajo
 Mx= volume de muestra
 Abs1, 2= Abs 1 (inicial)
 Abs 2 (final)
 Delta= Abs. 2 – Abs 1
 Estas reacciones son conocidas tambien como cineticas de 2 puntos. Y se refiere a la
medicion de 2 absorvancias una despues de una incubacion inicial y luego de un lapso
de tiempo la Abs. final. El calculo se realiza usando el valor del Delta que es igual a Abs2
– Abs1. Para esta prueba hay que preparer un reactive de trabajo. Ej. Creatinina, BUN
UV.

25.  EL calculo para el modo diferencial se expresa en la siguiente ecuacion:
 RT + Mx -------- Abs – BMx Donde: RT = Reactivo de Trabajo
 Abs= Absorvacia final
 BMx= blanco de muestra
 En estas reacciones se montan simultaneamente a las muestras, calibradores, etc.
blanco de muestra el cual debera ser substraido antes de la lectura de la
absorvancia final. Ej. Bilirrubina Total y Directa.

26.  El modo Cinetico (Kinetic) como lo dice su nombre es la cuantificacion del
consume de un Substrato de una enzyme en un tiempo determinado. Es una
reaccion en movimiento, la cual se realiza en el espectro de la luz U.V. (Ultravioleta)
a 340 nm. Se expresa en la siguiente ecuacion:
 RT + Mx ---Abs1 ---Abs2---Abs3--Abs4--Absx
 Donde: RT= Reactivo de trabajo
 Abs1,2,3,4,X = No. de Absorvancias medidas en un lapso tiempo
determinado.
 Se calcula un delta a partir de la substracion de Abs1 – Abs2, Abs2 – Abs3
 Abs3 – Abs4, luego el Delta se multiplica por el Factor de Calibracion dado por el
faricante dependiendo de la temperature de la reaccion.

27.  El modo de calculo Multiestandar se expresa en las curvas de calibracion, las cuales
se construyen a partir de el tiraje de varios estandares simultaneous. Se expresa asi:
Concentración
Magnitud

28.  Dependiendo del tipo de analisis asi sera el tipo de curva de caliracion: Poligonal,
Spline, Recta de regression, etc.
 Ej. TSH, T3, T4, PSA, etc.

29.  El modo de Cutt-Off o corte se refiere a la principal forma de calculo en las pruebas
de tamizaje. Donde se dee determiner la positividad o negatividad de pruebas
infecto contagiosas. Ej HIV, HCV, Habs, Toxo IgG, IgM, Rubeola, etc.
 En estas pruebase se realiza a partir de la Absorbancia de las muestras y controles
positivos Fuertes y positivos debiles un corte donde se descriminaran las pruebas
que salgan positivas de las negativas a partir del valor de Abs. Un valor intermedio
entre estas se denominara como zona gris o de indeterminados.

31.  Existen muchas otras formas de calculo mas que se utilizan sobre todo en
investigaciones y desarrollo biotecnologicos de nuevos productos. Sin embargo
estas seis formas de calculo abarcan la mayoria de pruebas que se usan en el area
de quimica clinica actual, por lo tanto es responsabilidad del alumno conocerlas y
entender como se desarrolla la estequiometria de la reaccion, que a final se
expresa en un resultado cuantitativo.
 MATERIALES DE CONTROL:
 La forma mas efectiva de garantizar que nuestras calibraciones son correctas es
tirando simutanemente o posterior a esta los materiales de sueros control
valorados de Nivel I, II. Para asegurarnos que la calibracion ha sido realized
exitosamente,

34. Bibliografia