El documento presenta una estrategia para el diagnóstico de niños nacidos de madres VIH positivas mediante pruebas serológicas y de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se recomienda realizar pruebas de Western Blot, PCR para los genes GAG, POL y ENV en niños menores de un año, y considerar resultados serológicos y PCR para el gen GAG en niños mayores. El esquema incluye repetir pruebas a los 3, 6, 12 y 18 meses para confirmar el estado de infección.
1. Estrategia para el diagnóstico mediante PCR de los niños nacidos de padres seropositivos al VIH-1. Hacer análisis de cada niño, desde el punto de vista serológico, con la edad y las veces que ha arribado la muestra al laboratorio. 1 - Realizar Western - Blot 2 - Realizar PCR para el gen GAG. 3 - Realizar PCR para el gen POL. 4 - Realizar PCR para el gen ENV. 5 - Realizar análisis de forma integral.(WB-PCR-edad). * Niños menores de 1 año hacer las 3 alternativas de PCR.(Según el algoritmo aprobado) * Niños mayores de 1 año, valorar resultados serológicos, (si estos son negativos), hacer PCR gen GAG, (si son positivos) hacer las 3 alternativas de PCR.
2. ESQUEMA DE DIAGNÓSTICO EN NIÑOS NACIDOS DE MADRES SEROPOSITIVAS MUESTRA 3 MESES DE EDAD PCR + CV CD4 POSITIVA Tomar muestra de inmediato y repetir TODAS las pruebas NEGATIVA Repetir TODAS las pruebas a los 6 meses de edad PCR positiva CONFIRMAR PCR negativa A los 12 y 18 meses de edad repetir ELISAs y WB ELISA Ag/Ac WB ELISA Ag P24 + En los niños con alguna enfermedad indicativa o signo de SIDA tomar muestra de inmediato y realizar el esquema recomendado Muestra sangre en seca en papel de filtro para PCR a los 15 días de nacido.
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5. CRITERIO DE DEFINICIÓN DE LA INFECCIÓN POR VIH EN NIÑOS (MMWR, REVISED SURVEILLANCE CASE DEFINITION FOR HIV INFECTION VOL 49/ No. RR-13, 29-31, 1999) NIÑOS CON EDAD ≥ 18 MESES, SE CONSIDERA INFECTADO SI CUMPLE CRITERIO DE LABORATORIO ►► RESULTADO POSITIVO EN ENSAYOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS (ELISA Y WB) O ►► RESULTADO POSITIVO O CANTIDADES DETECTABLES EN ENSAYOS VIROLÓGICOS (NO DE ANTICUERPOS) --- DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE VIH (DNA O RNA) ---ENSAYO DE Ag p24 (INCLUYENDO LA NEUTRALIZACIÓN) ---AISLAMIENTO DE VIH (CULTIVO VIRAL)
6. EN NIÑO CON EDAD < 18 MESES SE CONSIDERA INFECTADO SI CUMPLE CRITERIO DE LABORATORIO DEFINITIVO ►► RESULTADO POSITIVO EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES (EXCLUYENDO SANGRE DEL CORDÓN UMBILICAL) USANDO UNO O MÁS DE LOS ENSAYOS SIGUIENTES (NO DE ANTICUERPOS) ---DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE VIH (DNA O RNA) ---ENSAYO DE Ag p24 (INCLUYENDO LA NEUTRALIZACIÓN) EN NIÑO ≥ 1 MES DE EDAD --- AISLAMIENTO DE VIH (CULTIVO VIRAL) PRESUNTIVO (EN NIÑO QUE NO CUMPLE LOS CRITERIOS DEFINITIVOS PERO TIENE) ►► RESULTADO POSITIVO EN SOLO UNA MUESTRA (EXCLUYENDO DE CORDÓN) USANDO LAS PRUEBAS VIROLÓGICAS Y QUE NO EXISTAN RESULTADOS SUBSIGUIENTES NEGATIVOS VIROLÓGICOS O DE Ac.
7. EN NIÑO CON EDAD < 18 MESES NACIDO DE MADRE VIH INFECTADA SE CONSIDERA “NO INFECTADO” SI NO CUMPLE LOS CRITERIOS ANTERIORES PERO CUMPLE LOS CRITERIOS SIGUIENTES: CRITERIO DE LABORATORIO DEFINITIVO ►► AL MENOS DOS ENSAYOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS VIH NEGATIVOS EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES OBTENIDAS CON EDAD ≥ 6 MESES ►► AL MENOS DOS ENSAYOS VIROLÓGICOS NEGATIVOS EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES TOMADAS CON EDAD ≥ 4 MESES Y QUE NO TENGA OTRAS EVIDENCIAS CLÍNICAS O DE LABORATORIO DE INFECCIÓN POR VIH.
8. PCR VIH-1 POL ENV GAG 662pb 500pb Gel de Agarosa 3 % , 100 Volts, 1 hora, tinción con Br Et 442pb
10. 200 ul Reactivo de Extracción + VIH-1 C- 200 ul Reactivo de Extracción + VIH-1 C+ Extracción del ADN Incubar todos los tubos 30´a 60 °C y 30´a 100°C AMPLIFICACIÓN EN TERMOCICLADOR PTC-100 AMPLICOR HIV-1 DNA TEST, VERSIÓN 1.5 1 ml de BLDWS Mezclar, Incubar 5’ @ TA Centrifugar 3’, Max Vel. Remover Sobrenadante Centrifugar 3. Max Vel.’ Remover Sobrenadante 1.0 mL 1 ml de BLDWS 500 ul sangre total Almacenar seco a -70 °C Resuspender e l Pellet en 200 ul Reactivo de extracción
11. Control de Calidad Control Negativo < 0.2 OD A 450 units Control Positivo > 1.5 OD A 450 units Internal Control > 0.2 OD A 450 units Resultados de los especimenes HIV IC Interpretación < 0.2 > 0.2 ADN VIH-1, no detectado < 0.2 < 0.2 Invalidado . Repitir el ensayo. > 0.8 CUALQUIER ADN VIH-1, detectado ≥ 0.2,<0.8 CUALQUIER Resultado dudoso , Repitir el ensayo. AMPLICOR HIV-1 DNA TEST, VERSIÓN 1.5
12. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH EMBARAZADAS 3 643 535 POSITIVO INDETERMINADO NEGATIVO 140 (0,003%) 280 (0,007%) 3 643 115 (99,9%) DECIDIERON INTERRUMPIR EL EMBARAZO SI (47) NO (74)+ ESTADO DE LOS NIÑOS (75) POSITIVO EN ESTUDIO NEGATIVO 4 ** 23 48 + AÑADIR 19 POR PRECISAR, O AÚN GESTANTES ** 2 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 5,3%
13. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH SEROPOSITIVAS PREVIAMENTE DIAGNOSTICADAS QUE DECIDIERON NO INTERRUMPIR EL EMBARAZO 150 ESTADO DE LOS HIJOS 155 POSITIVOS EN ESTUDIO NEGATIVOS 10* 43 102 * 4 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 6,45%
14. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH MADRES NO DIAGNOSTICADAS COMO SEROPOSITIVAS ANTES DEL PRIMER TRIMESTRE DEL EMBARAZO 65 ESTADO DE LOS HIJOS 72 14* 5 53 * 3 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 POSITIVOS EN ESTUDIO NEGATIVO 19,4%
15. TOTAL DE NIÑOS ESTUDIADOS Y SU SITUACIÓN ACTUAL SEGÚN DIAGNÓSTICO MATERNO AL NACER
16. TOTAL DE NIÑOS ESTUDIADOS Y SU SITUACIÓN ACTUAL POR PROVINCIAS.