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Innovaciones en el
Mejoramiento de la Papa
         Merideth Bonierbale
        Cusco, 25 Mayo, 2010
Las Innovaciones en el Mejoramiento
            han contribuido a:
1. Mejorar la interpretación de la
   estructura e historia de la
   diversidad genética
2. Identificar nuevas características
   para garantizar la seguridad
   alimentaria y la productividad
   estable
3. Facilitar la comprensión de la base
   genética de la variación de
   caracteres en la fuente de genes del
   cultivo
4. Ampliar la base genética de
   caracteres de adaptación
5. Minimizar los efectos ambientales
   para maximizar el poder de
   selección
rap ver
      pcs
   ber amb tbr
chq san
  mcd        acl adg
            sto
  chc acg
     pur spl

1. Mejorar la interpretación de la
   estructura e historia de la
       diversidad genética
Caracterización de Colecciones de Germoplasma
A. Identidad/Distinción (duplicados ID)



                                    C. Medidas cuantitativas de
                                      las distancias genéticas




 B. Riqueza de Alelos
Formación de Colecciones Núcleos
       Species   Series Ploidy(EBN)



                                      Especies taxonómicas
                                      Origen geográfico
                                      Caracteres
                                      morfológicas
                                      Diversidad molecular
                                      (structural)
                                      Respuesta Hospedero-
                                      Patógenos
                                      Diversidad molecular
                                      (funcional)
Correlacionando la variación genotípica y
fenotípica: Mapeo por Desequilibrio de Ligamiento
             Pij(k) = µ + Ck + αXi(k) + gi(k) + yj + ei(k)j

                                                     Diversidad
                                                      Genética

                                     Ind.1
                                     Ind.2
                                     Ind.3
                                     Ind.4
                                     Ind.5
                                     Ind 6
                                     Ind.7
                                     Ind.8
                                     Ind.9
                                     Ind.10
                                     Ind.11

                                                      QTL
                                         Gen
                                         Candidato
Caracterización fenotípica de la resistencia al
             tizón tardío en la Población B1


                                                               n
 0º
               Colombi
                                                        AUDPC= Σ (X i+j + X i ) (t i+1 - t i )
                                                              i=1
 3º
      Ecuado      a
                                   Concepción (Sierra                        2
        r
                                        2600m)
 6º
                 Brazil

 9º


12º
                          Bolivi
                            a




15º

                                      Oxapampa (Selva
18º
                    Chile              Alta; 1814m)
Asociando la variación fenotípica y genotípica
     de la resistencia al tizón tardío en la Población
                       Mejorada B1
                                                                                                       Chromosoma II
Marcador SSR STG-0006 en el Cr 2 asociado a la resistencia por LD
                                    AUDPC
                                     5500
                                                                                          Presencia
                                     5000
                                     4500                                                 Ausencia
25                                   4000
                                     3500
20
                                     3000
15                                   2500
                                     2000
10
                                     1500

5                            B1C5    1000

                           B1C0       500
0                                           B1C0   B1C0    B1C5-A       B1C5-A   B1C5-B       B1C5-B
                                                                Población




     AUDPC (Promedios)



                                                            Frequency
                                  Marker alleles
                                                          B1C0      B1C5
                                  STG-0006.174            33%         0%
                                  STG-0006.170            19%        32%
                                  STG-0006.179            48%        67%
2. Identificar nuevas características
         para garantizar la seguridad
          alimentaria y productividad
                    estable
303846                                                         303835
         303845                                       303828
                  303842                     303826

                           303841   303832
Análisis estadístico de Componentes Principales:
  Perfil de diferentes grupos de germoplasma en la
               acumulación de nutrientes
                 C P1= 48.35 % C P2=32.43% SUM=80.78%
           3
                                                                         VITCDW



           2


           1
     CP2




                                                                                         ZNDW
           0


           -1

                                                                                      FEDW

           -2


           -3
                -3        -2         -1          0       1      2            3    4             5
                                                        CP1

                                                        Poblacion LTVR
            Poblacion B3
            Variedades del Mundo
                Variedades locales del Peru
Desarrollo de la técnica de “Espectroscopía de
Infrarrojo Cercano” (NIRS) en la evaluación masal
 del contenido de micronutrientes en poblaciones
             mejoradas y germoplasma
    Limpieza                      Procesamiento                         Secado                      Análisis NIRS

                                                   Muestras                                                          Llenado
                                                    para ser                      Muestras
1                             5                                    10            congeladas    14                      de la
                 Lavado                           procesadas                                                          cubeta




                                                                                                                    Muestras
                                                                                                                      listas
                                                    Pelado
                              6                                                  Liofilizado   15                      para
               Clasificando
                                                                   11               (72h)                           escanear
2              las muestras




                                                   Una muestra
                              7                   representativa
                                                                                               16
                                                                                                                    Escaneo
                Empacado                                                                                             NIRS
3                                                                  12             Molienda


                                                   Obtención
                                                      de la
                              8                     muestra                                                         Espectro
                                                   en rodajas                                  17
                Almacena                                                                                              NIRS
                                                                                 Muestras
                miento de                                          13            molidas
4                  las
                muestras
                                                    Pesar la
                              9                     muestra                                                         Resultados
                                                     fresca
                                                                                               18                     NIRS
Estimados de parámetros genéticos para el
                                           contenido de micronutrientes en clones
                                                        promisorios
                                       0.6                            GCA Fe                                                                                                         0.08


                                       0.5
                                                                      Mean of Fe

                                                                   0.43
                                                                                           0.46
                                                                                                                          0.49
                                                                                                                                                     0.44
                                                                                                                                                                 0.43
                                                                                                                                                                                     0.06               Hierro              Heritability Estimates
                                                                              0.42                               0.43                  0.42
                                             0.41                                                 0.40                                                                      0.40
                                                       0.39
                  Fe mg/100mg fw




                                       0.4                                                                                                                                           0.04




                                                                                                                                                                                                   gca effects
General Combining Ability




                                       0.3                                                                                                                                           0.02


                                       0.2                                                                                                                                           0.00


                                       0.1                                                                                                                                           -0.02                              2
                                       0.0
                                                                                                                                                      REICHE
                                                                                                                                                                                     -0.04
                                                                                                                                                                                                                        h
                                                                                                   MONALISA



                                                                                                                           PW88-6065

                                                                                                                                        PW88-6187
                                              88-108



                                                                    C92.140

                                                                               LR-93.160




                                                                                                                 OREB
                                                        ATLANTIC




                                                                                           LT-8




                                                                                                                                                                 SPUNTA

                                                                                                                                                                            TXY.2
                                       0.5   0.47                                                                         0.47                                                       0.08
                                                                                           0.45                                                                  0.44


                                       0.4
                                                       0.40
                                                                   0.42

                                                                              0.36
                                                                                                  0.37
                                                                                                                 0.42
                                                                                                                                       0.39 0.40
                                                                                                                                                                            0.37
                                                                                                                                                                                     0.06

                                                                                                                                                                                     0.04
                                                                                                                                                                                                                 Zinc
                  Zn mg/100 mg fw




                                                                                                                                                                                     0.02          gca effects
                                       0.3

                                                                                                                                                                                     0.00

                                       0.2
                                                                                                                                                                                     -0.02

                                                                                                                                                                                     -0.04
                                       0.1                                                                                             GCA Zn
                                                                                                                                       Mean Zn                                       -0.06

                                       0.0
                                       20                                                                                 18.8                                                       -0.08
                                                                                                                                                                                     5
                                                                                                                                       17.4
                                                                                                                                                                            Vitamina C
                                                                                                                                                      REICHE
                                                                                                                           PW88-6065

                                                                                                                                        PW88-6187
                                                                                                   MONALISA
                                              88.108



                                                                    C92.140

                                                                               LR-93.160




                                                                                                                  OREB
                                                                                           LT-8




                                                                                                                                                                             TXY.2
                                                        ATLANTIC




                                                                                                                                                                  SPUNTA




                                       18                                                                                                                                   16.8
                                             15.6                                                                                                                                    4
                 Vit C m g/100m g fw




                                                                   15.0                           14.4                                               15.1
                                       16              13.7                                                                                                      14.3                3
                                                                              13.1 13.4
                                       14
                                                                                                                                                                                          gca effects




                                                                                                                 12.2                                                                2
                                       12
                                                                                                                                                                                     1
                                       10
                                                                                                                                                                                     0
                                        8
                                                                                                                                                                                     -1
                                        6
                                        4
                                                                                                                                           GCA Vit C                                 -2
                                        2                                                                                                  Mean Vit C                                -3
                                        0                                                                                                                                            -4
                                                                                                                                                     R EIC H E
                                                                                                                          PW 88-6065
                                                                                                                                        PW 88-6187
                                                                                                  M O N A LISA
                                                 88.108


                                                                   C 92.140
                                                                              LR -93.160




                                                                                                                 O R EB
                                                                                           LT-8




                                                                                                                                                                            TXY.2
                                             A TLA N TIC




                                                                                                                                                                 SPU N TA
Ganancia genética para la concentración de
Hierro (Fe) y Zinc (Zn) en base fresca (mg/100mg
        pf) en papas nativas diploides (2x)
                                 2005                              2007

                          1.20                              1.20
                                                                    Mean =0.60+0.13         Ciclo 0
Fe (mg/100g,PF)




                                                                    N=16
                          0.90    Mean =0.49 +0.07          0.88
                                                                                        28 progenitores
                                  N=28                      0.80

                                                            0.72
                                                                                          (cultivares
                          0.65
                          0.60
                          0.55
                                                            0.64
                                                            0.60
                                                            0.56
                                                                                        nativos de stn,
                                                                                         gon, phu) en
                          0.50
                          0.49                              0.48
                          0.45
                          0.40                              0.40
                          0.35                              0.32

                                                                                          NCDI – 16
                          0.00                              0.00
                                                                                            familias
                   0.90                              0.90
                                                                       Mean=0.50+0.07       Ciclo 1
                                                                           N=16
 Zn (mg/100g,PF)




                                   Mean=0.38+0.08
                                       N=28          0.65
                                                                                        16 progenitores
                   0.60                              0.60
                                                     0.55
                   0.50                              0.50
                                                     0.45
                                                                                        Fe y Zn NCDII -
                   0.40
                   0.38

                   0.30
                                                     0.40
                                                     0.35                                 32 families
                   0.20




                   0.00                              0.00



                                   0                                1Selection Cycle    2
“Captura de Caracteres”        resistente             susceptible


 Herramientas Genómicas
para evaluar características
       de adaptación:               Resistente        Susceptible


   Tolerancia a la Sequía
Microarreglos:

  Comparación de la  • Analisis de
expresión génica       significancia
global.              • Atribución de
  Cambios en la        genes a vías o
expresión de genes de señales
clones resistentes y   metabólicas
                                              Lista de genes
susceptibles.                                   candidatos
Caracteres Fisiológicos
Comparación de la eficiencia en el uso de agua de
dos clones tetraploides: Tolerante y Susceptible
                            CLONE: CANCHAN




              Control Estomático
               Ajuste Osmótico
Características de tolerancia a la sequía
          Comparación entre el clon CIP 397077.16 (resistente) y la variedad Canchán
          (susceptible) a nivel morfológico, agronómico, fisiológico y genómico

Perfil fisiologico                      CIP 397077.16                      Canchán
Pérdida de rendimiento                  debajo del 30%                     60%
Conductancia estomática                 menor                              mayor
Ajuste osmótico                         fuerte                             débil
Area foliar                             menor                              mayor
RWC                                     no hay cambios                     no hay cambios
Perfil de expresión génica
(6k ARC chip)
Genes inducidos                         204                                82
Genes reprimidos                        84                                 29
Regulación transcripcional              NAC-TF, WRKY4
Ajuste osmótico                         osmotina
Detoxificación                                                             Glutarredoxina
Rescate celular                         Hsp, chaperonas, cloroplastos      inhibidores de
                                                                                        proteasas
                                        de permanencia verde, Lea          chaperonas

Mobilización de Almidones                                                  α-amilasa
Membrana                                Proteinas que tranfieren lípidos
Metabolismo secundario                  Biosíntesis de terpenos
GATCCCCGCCAA ACCCT AT TGTTGGTACTAGTTCACGGG TCATTCTGCT ATGCA
                                                             280        290        300       310         320


0    POX67


 7   TG523
10   PCO002

18   PCO93
19   CT182
21
22
23
     E32M48R6
     C2At2_TaqI.2
     C2At2_TaqI.1
                        3. Facilitar la comprensión de la
26
27
32
     NL25_HpaII
     PCO93all
     RecepSer/ThrKin
                        base genética de la variación de
36
43
44
     TG651
     NBS5_HaeIIIR2
     TG497
                        caracteres de adaptación en las
51   TG629                fuentes de genes del cultivo
57   TG147
59   P2_HaeIIIR3

66
69
     P3_HaeIIIR4
     NBS9_MseIR6
                                               NBS     LRR
72   NBS5a_HaeIIIR3
75   CT055


82   TG400
                             P-loop       Kinase-2        GLPL
90   TG044
                            S1        NBS5a6         NBS9
                            S2        KIN1                            GLPL4
                       P-loop1
                                 NBS3
Limitación
• Falta de información
  genética específica para
  la mayoría de
  características
  agronómicamente
  importantes.
• Esta falta de “genes a la
  mano” impide el progreso
  en el mejoramiento para
  caracteristicas
  complejas y aún para
  algunas de herencia
  simple.
Descubriendo fuentes de resistencia
complementarias al tizón tardío a nivel
            poblacional
                                                                        S. piurae
                                                                        S. paucissectum

    OCH11640
                                                                        S. chiquidenum
    OCHS15210                                                           S. chomatophilum
                                                                        S. acroglosum
                                                                        S. cajamarquense
         Acc. SCL
         5050
                                        3000



                                        2500



                                        2000
                                                                                          s   S
                                AUDPC




                                        1500



                                        1000



                                                                                          r
                    OCH 14187
                                                                                              R
                                        500



                                          0
                                               acg   cjm   chq    chm       pcs     pur
                                                                 chm
Identificación de fuentes genéticas para el
PASOS        carácter
             Construcción de poblaciones segregantes
             Identificación de marcadores que rodean al
             gen de interés
             Localización de QTL
         I                   II                    III            IV                 V         VI




        VII                  VIII                 IX              X                  XI        XII




              tbr Meyer et al., 1998
              tbr Ewing et al., 2000                              tbr Ghislain et al., 2000
              tbr Leonards-Schippers et al., 1994                 phu Ghislain et al., 2000
              tbr, ktz, vrn, tar, stn Collins et al., 1999        blb Naess et al., 2000
              tbr, chc, ktz, stn, vrn Oberhagemann et al., 1999   mcd Sandbrink et al., 2000
Construcción de la población segregante PCC1
                 (S. paucissectum/
.chomatophilum//S.chomatophilum) para resistencia
                   al tizón tardío
S. paucissectum   S. chomatophilum
   PI 473489-1        PI 310991-1
    Resistant         susceptible

            F1 MP1-8              PCC1
            Resistant             n=192

                          35
                                                      Monserrate                                                Mean=1968.07
                               LBr-40                                                          Chata Blanca
                                                                                Yungay                          SD=698.93
                          30
                                                   pcs                                                          n=176
                                           Atzimba 473489.1 ( C )
                          25
                                 Female
                                MP1-8(R)
                          20


                          15


                          10


                           5


                           0
                               666.88      975.13    1283.39    1591.65   1899.90 2208.16 2516.42   2824.67   3132.93   3441.19
                                                                           Mean AUDPC 77 DAP
e46m42.I               e34m33.o                e32r33.f               e32m48.b              e36r36.a               BGL.11rr           S13.700              E41M59.F                                   e34r33.b               e36r36.c            E34r61.B
                      8.9                                            5.7                                          8.1
                                             11.2                                AJ8.1120                                                                                                             10.6
                                                                     3.3                                                      e31m48.g                                                   H10.2400                           14.9                   14.5
20.7                              e32m48.d                                       e31r58.c                                                20.3                                                                    e32m49.a
                                                          e46r42.f   5.0                                          5.6                                       23.2                 6.9
                      8.6                     6.1                                                                             E34r61.A                                                                4.5
                                                                                 R6.2100    28.5                  3.3                                                                    T11.810                 S017.p1                E39r61.C            e32r48.g
                                  e32r61.d                e38r49.d   5.0                                                      E34M61.C
                                              3.3                                e39r50.d                         4.4                                                                                                       7.1                    11.2
           e45r42.e                                       J3.6rr     2.2                                                                         AJ8.520
3.4                                           3.3                                e46m42.b                         3.3         e35m61.a   6.2                          e31r54.b                                                          E38r39.D
           e45r42.f   14.3                                e32m61.w   7.3                                                                                                                                                                                    G13.880
3.4                                           2.2                                                                 1.1         T4.1720            G3.950
           AR1.1rrr                                                  3.4         e32m61.b              e34m33.L                                                                                       27.8
1.1                                           2.6         AML.1000                                                            E35M48.B                                           32.7
                                  I12.75r                                        G3.113r                          6.3                                                                                                                              14.7
2.2        E35r54.A                                       E32M49.E                                                            e32m33.d                      23.0                                                            23.0
                      10.7                    3.7                    11.5
           e32m51.e                                       e45r59.b                                                                       22.3
3.3                                           1.4                                                                 18.3                                                                                                                                      M11.1250
7.2        E35r54.B               e31r58.f                E45M60.D               e46m42.e                                                                                                                        AML.2100                          6.2
                                              2.2                                           32.6                                                                                                                                        e46r42.c
           Y6.420                                         N1.1750                                                                                                     e45m42.d           e31m48.j                                                           E32M61.F
                      12.5                   14.8                                                                             e32m61.a           e31m58.b                                             12.2                                         6.2
                                                          e39m50.a   15.9                                         3.5                                                                                                       13.0
24.0                                                                                                                          e45m59.e   7.5                                     11.9                                                                       Q7.34r
                                  S106.p1                                                                         2.2                                                                                            e34r33.k                           4.5
                                                                                                                                                 B8.790     21.3                                                                                            e34r33.j
                      8.6                    17.2                                B4.78r                           5.9         BG3.13rr                                                   e32r61.e                                       e35m48.a    2.9
                                                                                                       J9.450                            9.2                                                                                4.4                             e31m54.t
                                  e34m34.a                           7.2                                                      B8.1190                                            8.0                                                    M11.2650    1.6
           e33r34.a                                                              E40M51.D                         9.3                            e34m33.n                                                                   3.3                             E41M59.B
                                                          e46r42.d                                                                                                    E35r58.B           e31m58.e                                       e36m50.e   10.7
10.8                                                                 8.1                                                      e32r61.c                                                                                      4.5
                                             8.5                                                                                                                                                                                        e46m42.j            E35M58.D
                                                                                 E38r39.A                         5.8                                       12.7
           e34r33.m   22.2                                e46r42.h                          27.1                              E39M61.D                                                                                      9.8
3.3                                          2.4                                                                                         22.1
           AD3.1700                                       e45m59.c                                                                                                    E39r61.E   24.4                                                   e32m51.c
1.1                                          5.7
           E34r61.H                                       e45r42.h   17.7
5.9                               N3.780     5.7                                                                                                            12.7
           e32m51.d   4.4                                 e36r50.a                                     e31m36.a                                  e45r59.d
                                  e46m42.a                                                                                                                                               B6.1400
                                             6.8                                 M2r.78r                                                                              E34M61.I
                                                                                                                                                            3.3
                                                          K8.78r                                                                                                      E35r58.C
                                             5.0                                                                                                            1.3                  13.9
                                                          S8.940                            23.4                                                                      Z1.8rr
                                                                                                                                                            4.2
                                                                                                                                                                      H6.125r            E39r50.E
                                                                                                                                                            18.1
                                                                                                       S064.r2

                                                                                                                                                                      e36r36.d


       I                     II                     III                     IV                     V                     VI                VII                     VIII                 IX                   X                     XI                     XII



                                                Oxapampa 40 %
                                                                                                   Región “Hotspot” QTL y genes
                                                Comas 30%                                               mayores en el chr11
                                                                                                                                                1R3,
                                                                                                                                                2R3a, b,
                                                    15%                                                                                         3R6, R7
                                                                                                                                                4 R10, R11
                                                    10%


                                                                                                                                                                                             1      El Kharbotly et al 1994
                                                                                                                                                                                             2      Huang et al 2004
              POX67




                                                                                                                                                                                             3      El Kharbotly et al 1996
                                   PCO093




                                                                                                                                                                                             4      Bradshaw et al 2006
                                                                                                                                                                                             5      Leister et al 1996
                                                                                                                                                                                             6      Hämäläinen et al 1997
                  5N,6Ry
Genes Candidatos útiles en la caracterización
      de QTL Ejemplo : Carotenoides
           Genes Candidatos     Mapas Genéticos
           (genética clásica)   Tomate Pimiento
                                  Cromosoma 3




                                            Thorup et al. 2000
Localización de Genes Candidatos de la
Biosíntesis de Carotenoides en la Papa
          Chr. 2 (PD)   Chr. 2 (BCT)     Chr. 3 (PD)   Chr. 4 (PCC1)


                              Zeaxanthin
                              epoxidase       β-carotene
                Phytoene                      hydroxylas
                Synthase                      e
                           Asociado con                           β
                                                         Lycopene-β-
                           • zeaxantina                  cyclase
                           • Totales
         Asociado con
         • luteina,
          β -caroteno
         • zeaxantina
         • totales                     Asociado con
                                       • , luteina
                                        β -caroteno
                                       • Totales
                                                   Asociado con
                                                   , zeaxantina
                                                   Totles
Asociando la variación fenotípica para el contenido
    de carotenoides con la variación genotípica o
   polimorfismos de marcadores SSR en el Grupo
Phureja: Mapeo por Desequilibrio de Ligamiento (LD)
                                                                                                                        S T M 5140 -19 3
     A s s o c ia te d alle le s    S T G 0 016- 1 55   S T M 2 022-195     S T I00 24-177       S T M 1 053-186
                                                                                                                        S T M 5140 -19 9
                                                                                                                                           S T I0 023-212


     T o tal C aro te n o id s                                               ↑ + 38 3                                    ↑ + 1 60
     A n th e ro x an th in                                  ↓ - 43                                ↑ + 38                                    ↓ - 32
     Z eaxan th in                    ↓ - 150                                                                             ↓ - 1 24
     β -caro ten e                                                                                                                          ↑ + 2 .4

                                             I                     II                   III                        IV                      X
                                                                                *
                                                                                                    ***
                                                                                                     **


            703352
                                                         *
             Gon


  703168
                      703831       ***                                                                                        ***
                                                                                                                                *
   Gon                                                  ***
                                                          Phytoene synthase                  ß-caroteno             Lycopene
           701165                                            Zeaxanthin epoxidase            hydroxylase            ß-cyclase
            Phu
Perfil de Expresión de Genes: Microarreglos en el
     descubrimiento de genes asociados a una
característica: Ejemplo Resistencia la tizón tardío
                  Diseño
 Clon avanzado           Entrada resistente de
 resistente de la        la especie silvestre S.                        B3
 Población B3            cajamarquense (cjm)                            274
                                                             30
                                       cjm
Inoculación con aislamientos POX067 y PE
                                       329                                    Recognition
      Colección de Muestras             R genes
                                                                  CC-NBS Bs2-like CTV2 ADR1
                                                                   CC-NBS Bs2-like CTV2 ADR1     Dirigent
                                                                                                 Dirigent

  72h y 96h luego de inoculación                                  LRR class
                                                                  LRR class                      protein
                                                                                                  protein


                                                                                                    Chr10
                                                                                              Chr10
Hibridación con arreglo de papa TIGR10K                  Proteolysis
                                                         ProteolysisPAD4
                                                                                     Signaling
                                                                                     Signaling Chr9
                                                                                               Chr9
                                                           C3HC4-type                EDS1
                                                      ACRE74 RING
                                                                                          Chr6
                                                      ACRE276 finger          EDS5        Chr6
   Study # 83 at Solanaceae
   Gene expression database:                           Ubiquitination
                                                       Ubiquitination
                                                       pathway
                                                                                     PAL
                                                                                         Chr9
                                                                                         Chr9
   http://www.tigr.org/tdb/potato/SGED_index2.shtml         Chr12
                                                            Chr12                  Chr3
                                                                                SA Chr3
                                                                                SA
.. Genes Ortólogos: genes que comparten
  un ancestro común por especiación
    [Paterson y col. 1995. Science]

    Demostró que la mayoría de las mutaciones
    seleccionadas por los agricultores en la
    domesticación de pastos a partir de los
    parientes silvestres eran los mismos genes
    en diferentes especies tales como el arroz,
    maíz y trigo
Uso de secuencias ortólogas disponibles entre
    especies, en la ubicación de genes y sus
funciones, en otra donde no se dispone de dicha
                   información
              COS                                                         COS
                                           COS       COS
                                   COS

              COS                        COS           COS                COS
                                               COS
                                 COS
                                           COS

                                                                          COS
Arabidopsis             Seleccionar Sub-
              COS                                                               Lycopersicum
  thaliana                set de COS
                                                                                  sculentum
                        “domesticación”
                                    COS        COS     COS

                Ubicar y secuenciar COS
                 en mapas genéticos de
                                                             COS
                          papa


                                                             COS

                     Solanum                                       N=84
                    tuberosum                                COS
Secuenciamiento del Genoma de la Papa
              PGSC por Secuenciamiento de novo
   Ensamblaje de los Contigs a partir de insertos de 150~ 500 bp de librerías
   genómicas
    Lecturas

    Contigs
  Ensamblaje los Scaffolds a partir de insertos de 2kb. 5kb, 10kb de librerías genómicas
  a gran escala


   Scaffold


    Ensamblaje de superscaffold por 454, Extremos pareados Fosmid y BAC



Superscaffold

    中国农业科学院蔬菜花卉研究所
    Institute of Vegetables and Flowers
    Chinese Academy of Agricultural Sciences
Consultando el genoma de la papa en busca
de secuencias de genes de resistencia en la
    región “hotspot” del cromosoma 11
     Mapa genético de Solanum paucissectum Mapa Físico DM cromosoma 11
 0     POX67     Cromosoma 11             SUPER SCAFFOLD_ID MARKER GM_POS


                                                                PGSC0003DMB000000365   PM1281_251              65.748
 7     TG523
10     PCO002                             TG523                 PGSC0003DMB000000131
                                                                PGSC0003DMB000000365
                                                                                       PM0395.122.A
                                                                                       PM1281_237
                                                                                                               57.835
                                                                                                               57.252
                                                                PGSC0003DMB000000131   538888                  56.61
18     PCO93                                                                           solcap_stsnp_c1_6643    54.71
19
21
       CT182
       E32M48R6                           CT182                 PGSC0003DMB000000354   PM0206
                                                                                       solcap_stsnp_c1_6633
                                                                                                               54.257
                                                                                                               53.45
22     C2At2_TaqI.2
                                                                PGSC0003DMB000000152   STG0001.150_XI          51.426
23
26
       C2At2_TaqI.1
       NL25_HpaII
                                          NL25                  PGSC0003DMB000000148   473601                  50.918
27     PCO93all                                                 PGSC0003DMB000000365   solcap_stsnp_c1_2221    50.775
32     RecepSer/ThrKin Put_recKin
36     TG651
43     NBS5_HaeIIIR2
44     TG497                            Super scaffold PGSC0003DMB000000152
                                    0                                                                         1.4Mbp
51     TG629

57     TG147                                                                                                       Genes
59     P2_HaeIIIR3
                                                                                                                   Predecidos
                                    >PGSC0003DMC100028839
66     P3_HaeIIIR4                  ATGGCAAAATCATCCCATGAAATTGAGCACCCAATTAAGGCATTTGGATGGGCAGCTAGA
69     NBS9_MseIR6                  GACACTTCTGGTGTTCTTTCTCCTTTCAACTTCTCAAGAAGGGCTACTGGGGAGAATGAT
72     NBS5a_HaeIIIR3                                                                  Diseño de nuevos
                                    GTACAATTCAAAGTGTTGTATTGTGGAATATGTCACTCAGATTTTCATATGCTCAAGAAT
                                    GAATGGGATAATTCCAAGTACCCTATTGTGCCTGGGCATGAGATCGTGGGAGTGGTAACC
75     CT055
                                                                                       oligos para saturar
                                    GAGGTCGGTAGCAAGGTTGAAAAAGTGAAAGTGGGGGACAATGTAGGTGTTGGAGTAATC
                                    GTAGGATCATGTCGAAAATGTGATAGTTGTACCAATGACCTCGAACAATATTGTTCTAGC
82     TG400                        AGTATTGGCACGTATAGTACAACTTACTATGACGGAACCACCACACACGGAGGCTACTCC
                                                                                       región hotspot en
                                    GATCTCATGGTAGCCAACGAGCATTTCGTGCTCCGTTGGCCGGAGAATTTACCGATGGAT
                                    GCTGCCCCATTGTTGTGTGCTGGTATCACAACATATAGCCCATTGAGATATTTTGGGCTT
90     TG044                                                                           Solanum paucissectum
                                    GATAAGCCTGGATTGAACATTGGTGTTGTGGGCCTTGGTGGGCTGGGCCATATGGCTGTG
                                    AAATTTGCAAAGGCTTTTGGATGCAATGTGACTGTTATTAGTACTTCTATTAATAAGAAG
                                    GATGAAGCAATTAAACATCTTGGTGCTAATTCATTCTTGATTAGTCATGATCAAGAACAA
                                    ATCAGGTATTTTTTCTCACTGGTTTAG
Especies     Las primeras   Variedades
Silvestres   domesticadas   Modernas

    4. Ampliar la base genética de
       caracteres de adaptación
Utilizando especies silvestres y cultivadas heterocigóticas
       Aprovechando interacciones génicas no aditivas:
         Método: Poliploidización sexual Uni y Bilateral
       Fuentes diploides              Progenitores
 silvestres y cultivadas (2x)       tetraploides (4x)
           Gametos 2n

  rap
         pcs
chqber
  mcd                phu
                                x
                        gon
  chm             stn

     pur spl
Rescate de Embriones: Método para
    acceder al Acerbo Terciario
                                   Bayas                           Abrir las bayas en
                                 (19-27 días                    condiciones asépticas.
                                  después                         Usar cámara de flujo
                                polinización)                    laminar. Extirpar bajo
                                                                  Estereomicrsocopio




                                                   Esterilizar
                                                Superficie (Etanol                                   Torpedo
                                                    70% 30s
                 Polinización                   Hipoclorito de Ca



                                                                                          Globular      Acorazonado



                                                                                                  Transferir pro-
                      Propagación in-vitro              Plántulas de                             embriones (fase
Transplante al             en medio                     tres nódulos                              de torpedo) a
 invernadero           Murashinge Skoog                                                          medio de cultivo
Híbridos inter- específicos resistentes a
P. infestans desde rescate de embriones
    confirmados por marcadores SSR

                                A   B C D   E F




                  Group Goniocalyx × S. chiquidenum




A     B       C         D           E         F
Hibridación Inter-poblacional: Aprovechando las
       interacciones génicas no aditivas en
                papas tetraploides



                       Ganancia genética
                         por Heterosis
     Población                                 Población
                         Combinando
        B3           resistencia a virus y       LTVR
                          tizón tardío
    Resistencia de
  campo al tizón                             Resistencia
  tardío                                      a virus

    Adaptación a                             Adaptación
  trópicos altos                             a trópicos
                                               bajos
Mayor frecuencia de familias heteróticas en la
         nueva población híbrida interpoblacional
          Distancias genéticas basadas en SSR útiles en la predicción de
          grupos heteróticos
           Las poblaciones progenitoras forman dos grupos claramente
          definidos

                                                   393242.50
                                                   391004.18   170
                                                   392639.31   160       B3
                                                   392639.8    150
                   B3                              393280.64   140       LTVR
                                                   392637.27   130
                                                               120       LTVRB3
                                                   392650.49
                                                               110
                                                   392657.8
                                                         H%
                                                   393074.86
                                                               100
                                                                90
                                                   C97.158      80
                                                   C97.270      70
                                                   WA.077       60
                                                   C93.154      50
                     LTVR                          C97.214
                                                                40
                                                                30
                                                   LR93.309     20
                                                   C90.266      10
                                                   LR93.050      0
                                                   92.187      -10
0.40        0.50        0.60   0.70     0.80      0.90               9        10    11    12    13    14   15   16
       Coeficiente de Similaridad de Jaccard
       Coeficiente de Similaridad              de Jaccard                          Número de tubérculos
5. Minimizar los efectos ambientales
                     para maximizar el poder de selección

                     38
Air Temperature ºC




                     34
                     30
                                                                Max Day Tº
                     26
                     22
                     18                                       Max Night Tº
                     14
                     10
                          Oct   Nov     Dec    Jan      Feb   Mar
                                      (Midmore, 1992)
Selección Asistida por Marcadores (MAS)
       Ejemplo: Resistencia Extrema al PVY
     CP58, CT182     Ry markers
     Ryadg , Rysto   RYSC3, M17,
                                          Elimina efectos ambientales    sobre   el
      CD17, TG508,
                     M5, M45, M6          fenotipo del caracter
      GP125
      CT 168                              Elimina tempranamente    los genotipos
     TG 497                               indeseables en una       población de
                                          mejoramiento
      TG 327

      TG 57
                                          Acelera el progreso en el mejoramiento
                                          ahorrando espacio, tiempo y mejorando el
      CT55                                uso de los recursos

      TG546

      TG26

      TG393


XI

                                   M 17
Selección de Progenitores Multíplices Asistida por
                  Marcadores:
 Técnica de Disociación de Alta Resolución (HRM)




                                        Escaneador de Luz
Mejorar los métodos de tamizados masal = Mejora
de estimados genéticos (más precisos).
Caso: Resistencia al PLRV
Inoculación en       Componentes    Prueba de         Inoculación
                     Genéticos de   Exposición         en brotes
brotes                 Variancia    Natural en
                                     Campo
                                                DE               DE

                         σ2A        190.7      72.7    264.4    98.1
                         σ2D        121.1      52.7    103.4    37.4

                        σ2AxL        18.0      14.2     13.0     8.7

                        σ2DxL        40.1      41.1      3.5    23.2
Exposición en
                         σ2e         60.7       6.2     42.6     4.3
Campo
                         σ2P        351.0              383.1

                         h2         0.54       0.20   0.69      0.26
Infectores
                       σ2D/σ2A          0.64             0.39
Métodos Masales de Selección en Generaciones
     tempranas para tolerancia al calor
      Método en Invernadero                    Método in-vitro

 Patrones de
 Tuberización


                        Tuberización           Periodo Vegetativo
                          Normal
                                        25oC

  I     II   III   IV



                         Desórdenes
                         Fisiológicos   Inducción de tuberización
Herramientas para la evaluación masal de
   poblaciones de mejoramiento y germoplasma bajo
               ambientes contrastantes.
Ejemplo: Estrés hídrico

       Cámaras Infrarrojas




                             Termómetro Infrarrojo
Cámaras Infrarrojas en la captura de imágenes en
                  tiempo real.
      Diferentes niveles de estrés hídrico

                                                                                                                                                                                                                NDVI
                                                                                                                                                                                                                                        0-0.1
                                     S catterplot of N DVI vs Mean Geometric                                                                                                                                                           0.1-0.2
                                                                                                                                                                                                                                       0.2-0.3
                                                                                                             131         Env
           0.6                                                                                                           DI
                                                                                                                         TD
                                       C an ch an                                                                  118


           0.5   C an ch an
                                                                          135
                                                                                                                                                                                                                                       0.3-0.4
                                   135
                                          126
                                                     131

                                                 U n ic a
                                                                   103
                                                                          128

                                                                                                   U n ica
                                                                                                                                                                                                                                       0.4-0.5
    NDVI




                                                             124         130
           0.4
                         Reich e
                              122
                                       128
                                               M .Bo n ita
                                             130
                                                             118
                                                                               Reich e           124

                                                                                                                                                                                                                                       0.5-0.6
           0.3
                                                                                              r=0.50
                   126
                                    103
                                                                                                                                                                                 Fresh yield (t/ha)
           0.2

                    5
                         M .Bo n ita


                                                10                 15                    20             25
                                                                                                                                                                                                <16
                                                                                                                                                     Scatterplot of NDVI camera vs Yield Mean (t ha -1)
                                                               Mea n Geome tric
                                                                                                                                             0,7
                                                                                                                                                                                    M.Bonita
                                                                                                                                                                                                >24                                           118          Env
                                                                                                                                                                                                                                                           DI
                                                                                                                                                                                                                       131                                 NI
                                                                                                                                                                                          122         Reiche    130           131                          TD
                                                                                                                                             0,6                                                 103
                                                                                                                                                                        126 Canchan                       128
                                                                                                                                                                                                                                        124
                                                                                                                                                    Canchan                                     118            135




                                                                                                                               NDVI camera
                                                                                                                                                                                     135                              Unica
                                                                                                                                             0,5    Canchan
                                                                                                                                                                  131
                                                                                                                                                         135            126          128
                                                                                                                                                                              103
                                                                                                                                                               124 Unica            130
                                                                                                                                                                                            Reiche                     Unica
                                                                                                                                             0,4
                                                                                                                                                     Reiche 130           M.Bonita              124
                                                                                                                                                          122
                                                                                                                                                         118
                                                                                                                                                          128                                                                       r=0.88
                           Riego Normal                                                                                                      0,3
                                                                                                                                                          126
                                                                                                                                                                103
                                                                                                                                                         M.Bonita
                                                                                                                                             0,2

                                                                                                                                                   0,0                   10,0 13,6     20,0                                    30,0                 40,0
                                                                                                                                                                               Yield Mean (t ha -1)



                                          Déficit de Riego
                                                                                                                                                           Sequía terminal
Flujograma para manejo de Información
                                        Publicación de métodos


Muestras


Información de
pedigrí



Datos de
invernadero
                                     Plataforma
                       Repositorio                    Plataforma
Datos de
                                        para
                          para                          pública
campo                                mejoradores
                       Mejoradores


Datos de
Laboratorio


Análisis de
datos


Calidad         Reportes
de datos      reproducibles
Alianzas Estrtegicas
   Alcanzando Preferencias y
Requisitos de Usuarios Multiples
Agradecimientos
•   W Amoros, G. Burgos, T. Zum Felde
•   J. Landeo, M. Gastelo
•   R. Schafleitner, R, Gutierrez
•   R. Quiroz, C. Barreda
•   D.Koeyer, L. Portal; R. Simon
•   M. Ghislain, R. Herrera
•   H. Villamin. S, de Haan, D. Caldiz
•   H. Kreuze, M. Orrillo, E. Mihovilovich, E. Salas

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Innovaciones en el Mejoramiento de la Papa

  • 1. Innovaciones en el Mejoramiento de la Papa Merideth Bonierbale Cusco, 25 Mayo, 2010
  • 2. Las Innovaciones en el Mejoramiento han contribuido a: 1. Mejorar la interpretación de la estructura e historia de la diversidad genética 2. Identificar nuevas características para garantizar la seguridad alimentaria y la productividad estable 3. Facilitar la comprensión de la base genética de la variación de caracteres en la fuente de genes del cultivo 4. Ampliar la base genética de caracteres de adaptación 5. Minimizar los efectos ambientales para maximizar el poder de selección
  • 3. rap ver pcs ber amb tbr chq san mcd acl adg sto chc acg pur spl 1. Mejorar la interpretación de la estructura e historia de la diversidad genética
  • 4. Caracterización de Colecciones de Germoplasma A. Identidad/Distinción (duplicados ID) C. Medidas cuantitativas de las distancias genéticas B. Riqueza de Alelos
  • 5. Formación de Colecciones Núcleos Species Series Ploidy(EBN) Especies taxonómicas Origen geográfico Caracteres morfológicas Diversidad molecular (structural) Respuesta Hospedero- Patógenos Diversidad molecular (funcional)
  • 6. Correlacionando la variación genotípica y fenotípica: Mapeo por Desequilibrio de Ligamiento Pij(k) = µ + Ck + αXi(k) + gi(k) + yj + ei(k)j Diversidad Genética Ind.1 Ind.2 Ind.3 Ind.4 Ind.5 Ind 6 Ind.7 Ind.8 Ind.9 Ind.10 Ind.11 QTL Gen Candidato
  • 7. Caracterización fenotípica de la resistencia al tizón tardío en la Población B1 n 0º Colombi AUDPC= Σ (X i+j + X i ) (t i+1 - t i ) i=1 3º Ecuado a Concepción (Sierra 2 r 2600m) 6º Brazil 9º 12º Bolivi a 15º Oxapampa (Selva 18º Chile Alta; 1814m)
  • 8. Asociando la variación fenotípica y genotípica de la resistencia al tizón tardío en la Población Mejorada B1 Chromosoma II Marcador SSR STG-0006 en el Cr 2 asociado a la resistencia por LD AUDPC 5500 Presencia 5000 4500 Ausencia 25 4000 3500 20 3000 15 2500 2000 10 1500 5 B1C5 1000 B1C0 500 0 B1C0 B1C0 B1C5-A B1C5-A B1C5-B B1C5-B Población AUDPC (Promedios) Frequency Marker alleles B1C0 B1C5 STG-0006.174 33% 0% STG-0006.170 19% 32% STG-0006.179 48% 67%
  • 9. 2. Identificar nuevas características para garantizar la seguridad alimentaria y productividad estable 303846 303835 303845 303828 303842 303826 303841 303832
  • 10. Análisis estadístico de Componentes Principales: Perfil de diferentes grupos de germoplasma en la acumulación de nutrientes C P1= 48.35 % C P2=32.43% SUM=80.78% 3 VITCDW 2 1 CP2 ZNDW 0 -1 FEDW -2 -3 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5 CP1 Poblacion LTVR Poblacion B3 Variedades del Mundo Variedades locales del Peru
  • 11. Desarrollo de la técnica de “Espectroscopía de Infrarrojo Cercano” (NIRS) en la evaluación masal del contenido de micronutrientes en poblaciones mejoradas y germoplasma Limpieza Procesamiento Secado Análisis NIRS Muestras Llenado para ser Muestras 1 5 10 congeladas 14 de la Lavado procesadas cubeta Muestras listas Pelado 6 Liofilizado 15 para Clasificando 11 (72h) escanear 2 las muestras Una muestra 7 representativa 16 Escaneo Empacado NIRS 3 12 Molienda Obtención de la 8 muestra Espectro en rodajas 17 Almacena NIRS Muestras miento de 13 molidas 4 las muestras Pesar la 9 muestra Resultados fresca 18 NIRS
  • 12. Estimados de parámetros genéticos para el contenido de micronutrientes en clones promisorios 0.6 GCA Fe 0.08 0.5 Mean of Fe 0.43 0.46 0.49 0.44 0.43 0.06 Hierro Heritability Estimates 0.42 0.43 0.42 0.41 0.40 0.40 0.39 Fe mg/100mg fw 0.4 0.04 gca effects General Combining Ability 0.3 0.02 0.2 0.00 0.1 -0.02 2 0.0 REICHE -0.04 h MONALISA PW88-6065 PW88-6187 88-108 C92.140 LR-93.160 OREB ATLANTIC LT-8 SPUNTA TXY.2 0.5 0.47 0.47 0.08 0.45 0.44 0.4 0.40 0.42 0.36 0.37 0.42 0.39 0.40 0.37 0.06 0.04 Zinc Zn mg/100 mg fw 0.02 gca effects 0.3 0.00 0.2 -0.02 -0.04 0.1 GCA Zn Mean Zn -0.06 0.0 20 18.8 -0.08 5 17.4 Vitamina C REICHE PW88-6065 PW88-6187 MONALISA 88.108 C92.140 LR-93.160 OREB LT-8 TXY.2 ATLANTIC SPUNTA 18 16.8 15.6 4 Vit C m g/100m g fw 15.0 14.4 15.1 16 13.7 14.3 3 13.1 13.4 14 gca effects 12.2 2 12 1 10 0 8 -1 6 4 GCA Vit C -2 2 Mean Vit C -3 0 -4 R EIC H E PW 88-6065 PW 88-6187 M O N A LISA 88.108 C 92.140 LR -93.160 O R EB LT-8 TXY.2 A TLA N TIC SPU N TA
  • 13. Ganancia genética para la concentración de Hierro (Fe) y Zinc (Zn) en base fresca (mg/100mg pf) en papas nativas diploides (2x) 2005 2007 1.20 1.20 Mean =0.60+0.13 Ciclo 0 Fe (mg/100g,PF) N=16 0.90 Mean =0.49 +0.07 0.88 28 progenitores N=28 0.80 0.72 (cultivares 0.65 0.60 0.55 0.64 0.60 0.56 nativos de stn, gon, phu) en 0.50 0.49 0.48 0.45 0.40 0.40 0.35 0.32 NCDI – 16 0.00 0.00 familias 0.90 0.90 Mean=0.50+0.07 Ciclo 1 N=16 Zn (mg/100g,PF) Mean=0.38+0.08 N=28 0.65 16 progenitores 0.60 0.60 0.55 0.50 0.50 0.45 Fe y Zn NCDII - 0.40 0.38 0.30 0.40 0.35 32 families 0.20 0.00 0.00 0 1Selection Cycle 2
  • 14. “Captura de Caracteres” resistente susceptible Herramientas Genómicas para evaluar características de adaptación: Resistente Susceptible Tolerancia a la Sequía Microarreglos: Comparación de la • Analisis de expresión génica significancia global. • Atribución de Cambios en la genes a vías o expresión de genes de señales clones resistentes y metabólicas Lista de genes susceptibles. candidatos
  • 15. Caracteres Fisiológicos Comparación de la eficiencia en el uso de agua de dos clones tetraploides: Tolerante y Susceptible CLONE: CANCHAN Control Estomático Ajuste Osmótico
  • 16. Características de tolerancia a la sequía Comparación entre el clon CIP 397077.16 (resistente) y la variedad Canchán (susceptible) a nivel morfológico, agronómico, fisiológico y genómico Perfil fisiologico CIP 397077.16 Canchán Pérdida de rendimiento debajo del 30% 60% Conductancia estomática menor mayor Ajuste osmótico fuerte débil Area foliar menor mayor RWC no hay cambios no hay cambios Perfil de expresión génica (6k ARC chip) Genes inducidos 204 82 Genes reprimidos 84 29 Regulación transcripcional NAC-TF, WRKY4 Ajuste osmótico osmotina Detoxificación Glutarredoxina Rescate celular Hsp, chaperonas, cloroplastos inhibidores de proteasas de permanencia verde, Lea chaperonas Mobilización de Almidones α-amilasa Membrana Proteinas que tranfieren lípidos Metabolismo secundario Biosíntesis de terpenos
  • 17. GATCCCCGCCAA ACCCT AT TGTTGGTACTAGTTCACGGG TCATTCTGCT ATGCA 280 290 300 310 320 0 POX67 7 TG523 10 PCO002 18 PCO93 19 CT182 21 22 23 E32M48R6 C2At2_TaqI.2 C2At2_TaqI.1 3. Facilitar la comprensión de la 26 27 32 NL25_HpaII PCO93all RecepSer/ThrKin base genética de la variación de 36 43 44 TG651 NBS5_HaeIIIR2 TG497 caracteres de adaptación en las 51 TG629 fuentes de genes del cultivo 57 TG147 59 P2_HaeIIIR3 66 69 P3_HaeIIIR4 NBS9_MseIR6 NBS LRR 72 NBS5a_HaeIIIR3 75 CT055 82 TG400 P-loop Kinase-2 GLPL 90 TG044 S1 NBS5a6 NBS9 S2 KIN1 GLPL4 P-loop1 NBS3
  • 18. Limitación • Falta de información genética específica para la mayoría de características agronómicamente importantes. • Esta falta de “genes a la mano” impide el progreso en el mejoramiento para caracteristicas complejas y aún para algunas de herencia simple.
  • 19. Descubriendo fuentes de resistencia complementarias al tizón tardío a nivel poblacional S. piurae S. paucissectum OCH11640 S. chiquidenum OCHS15210 S. chomatophilum S. acroglosum S. cajamarquense Acc. SCL 5050 3000 2500 2000 s S AUDPC 1500 1000 r OCH 14187 R 500 0 acg cjm chq chm pcs pur chm
  • 20. Identificación de fuentes genéticas para el PASOS carácter Construcción de poblaciones segregantes Identificación de marcadores que rodean al gen de interés Localización de QTL I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII tbr Meyer et al., 1998 tbr Ewing et al., 2000 tbr Ghislain et al., 2000 tbr Leonards-Schippers et al., 1994 phu Ghislain et al., 2000 tbr, ktz, vrn, tar, stn Collins et al., 1999 blb Naess et al., 2000 tbr, chc, ktz, stn, vrn Oberhagemann et al., 1999 mcd Sandbrink et al., 2000
  • 21. Construcción de la población segregante PCC1 (S. paucissectum/ .chomatophilum//S.chomatophilum) para resistencia al tizón tardío S. paucissectum S. chomatophilum PI 473489-1 PI 310991-1 Resistant susceptible F1 MP1-8 PCC1 Resistant n=192 35 Monserrate Mean=1968.07 LBr-40 Chata Blanca Yungay SD=698.93 30 pcs n=176 Atzimba 473489.1 ( C ) 25 Female MP1-8(R) 20 15 10 5 0 666.88 975.13 1283.39 1591.65 1899.90 2208.16 2516.42 2824.67 3132.93 3441.19 Mean AUDPC 77 DAP
  • 22. e46m42.I e34m33.o e32r33.f e32m48.b e36r36.a BGL.11rr S13.700 E41M59.F e34r33.b e36r36.c E34r61.B 8.9 5.7 8.1 11.2 AJ8.1120 10.6 3.3 e31m48.g H10.2400 14.9 14.5 20.7 e32m48.d e31r58.c 20.3 e32m49.a e46r42.f 5.0 5.6 23.2 6.9 8.6 6.1 E34r61.A 4.5 R6.2100 28.5 3.3 T11.810 S017.p1 E39r61.C e32r48.g e32r61.d e38r49.d 5.0 E34M61.C 3.3 e39r50.d 4.4 7.1 11.2 e45r42.e J3.6rr 2.2 AJ8.520 3.4 3.3 e46m42.b 3.3 e35m61.a 6.2 e31r54.b E38r39.D e45r42.f 14.3 e32m61.w 7.3 G13.880 3.4 2.2 1.1 T4.1720 G3.950 AR1.1rrr 3.4 e32m61.b e34m33.L 27.8 1.1 2.6 AML.1000 E35M48.B 32.7 I12.75r G3.113r 6.3 14.7 2.2 E35r54.A E32M49.E e32m33.d 23.0 23.0 10.7 3.7 11.5 e32m51.e e45r59.b 22.3 3.3 1.4 18.3 M11.1250 7.2 E35r54.B e31r58.f E45M60.D e46m42.e AML.2100 6.2 2.2 32.6 e46r42.c Y6.420 N1.1750 e45m42.d e31m48.j E32M61.F 12.5 14.8 e32m61.a e31m58.b 12.2 6.2 e39m50.a 15.9 3.5 13.0 24.0 e45m59.e 7.5 11.9 Q7.34r S106.p1 2.2 e34r33.k 4.5 B8.790 21.3 e34r33.j 8.6 17.2 B4.78r 5.9 BG3.13rr e32r61.e e35m48.a 2.9 J9.450 9.2 4.4 e31m54.t e34m34.a 7.2 B8.1190 8.0 M11.2650 1.6 e33r34.a E40M51.D 9.3 e34m33.n 3.3 E41M59.B e46r42.d E35r58.B e31m58.e e36m50.e 10.7 10.8 8.1 e32r61.c 4.5 8.5 e46m42.j E35M58.D E38r39.A 5.8 12.7 e34r33.m 22.2 e46r42.h 27.1 E39M61.D 9.8 3.3 2.4 22.1 AD3.1700 e45m59.c E39r61.E 24.4 e32m51.c 1.1 5.7 E34r61.H e45r42.h 17.7 5.9 N3.780 5.7 12.7 e32m51.d 4.4 e36r50.a e31m36.a e45r59.d e46m42.a B6.1400 6.8 M2r.78r E34M61.I 3.3 K8.78r E35r58.C 5.0 1.3 13.9 S8.940 23.4 Z1.8rr 4.2 H6.125r E39r50.E 18.1 S064.r2 e36r36.d I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII Oxapampa 40 % Región “Hotspot” QTL y genes Comas 30% mayores en el chr11 1R3, 2R3a, b, 15% 3R6, R7 4 R10, R11 10% 1 El Kharbotly et al 1994 2 Huang et al 2004 POX67 3 El Kharbotly et al 1996 PCO093 4 Bradshaw et al 2006 5 Leister et al 1996 6 Hämäläinen et al 1997 5N,6Ry
  • 23. Genes Candidatos útiles en la caracterización de QTL Ejemplo : Carotenoides Genes Candidatos Mapas Genéticos (genética clásica) Tomate Pimiento Cromosoma 3 Thorup et al. 2000
  • 24. Localización de Genes Candidatos de la Biosíntesis de Carotenoides en la Papa Chr. 2 (PD) Chr. 2 (BCT) Chr. 3 (PD) Chr. 4 (PCC1) Zeaxanthin epoxidase β-carotene Phytoene hydroxylas Synthase e Asociado con β Lycopene-β- • zeaxantina cyclase • Totales Asociado con • luteina, β -caroteno • zeaxantina • totales Asociado con • , luteina β -caroteno • Totales Asociado con , zeaxantina Totles
  • 25. Asociando la variación fenotípica para el contenido de carotenoides con la variación genotípica o polimorfismos de marcadores SSR en el Grupo Phureja: Mapeo por Desequilibrio de Ligamiento (LD) S T M 5140 -19 3 A s s o c ia te d alle le s S T G 0 016- 1 55 S T M 2 022-195 S T I00 24-177 S T M 1 053-186 S T M 5140 -19 9 S T I0 023-212 T o tal C aro te n o id s ↑ + 38 3 ↑ + 1 60 A n th e ro x an th in ↓ - 43 ↑ + 38 ↓ - 32 Z eaxan th in ↓ - 150 ↓ - 1 24 β -caro ten e ↑ + 2 .4 I II III IV X * *** ** 703352 * Gon 703168 703831 *** *** * Gon *** Phytoene synthase ß-caroteno Lycopene 701165 Zeaxanthin epoxidase hydroxylase ß-cyclase Phu
  • 26. Perfil de Expresión de Genes: Microarreglos en el descubrimiento de genes asociados a una característica: Ejemplo Resistencia la tizón tardío Diseño Clon avanzado Entrada resistente de resistente de la la especie silvestre S. B3 Población B3 cajamarquense (cjm) 274 30 cjm Inoculación con aislamientos POX067 y PE 329 Recognition Colección de Muestras R genes CC-NBS Bs2-like CTV2 ADR1 CC-NBS Bs2-like CTV2 ADR1 Dirigent Dirigent 72h y 96h luego de inoculación LRR class LRR class protein protein Chr10 Chr10 Hibridación con arreglo de papa TIGR10K Proteolysis ProteolysisPAD4 Signaling Signaling Chr9 Chr9 C3HC4-type EDS1 ACRE74 RING Chr6 ACRE276 finger EDS5 Chr6 Study # 83 at Solanaceae Gene expression database: Ubiquitination Ubiquitination pathway PAL Chr9 Chr9 http://www.tigr.org/tdb/potato/SGED_index2.shtml Chr12 Chr12 Chr3 SA Chr3 SA
  • 27. .. Genes Ortólogos: genes que comparten un ancestro común por especiación [Paterson y col. 1995. Science] Demostró que la mayoría de las mutaciones seleccionadas por los agricultores en la domesticación de pastos a partir de los parientes silvestres eran los mismos genes en diferentes especies tales como el arroz, maíz y trigo
  • 28. Uso de secuencias ortólogas disponibles entre especies, en la ubicación de genes y sus funciones, en otra donde no se dispone de dicha información COS COS COS COS COS COS COS COS COS COS COS COS COS Arabidopsis Seleccionar Sub- COS Lycopersicum thaliana set de COS sculentum “domesticación” COS COS COS Ubicar y secuenciar COS en mapas genéticos de COS papa COS Solanum N=84 tuberosum COS
  • 29. Secuenciamiento del Genoma de la Papa PGSC por Secuenciamiento de novo Ensamblaje de los Contigs a partir de insertos de 150~ 500 bp de librerías genómicas Lecturas Contigs Ensamblaje los Scaffolds a partir de insertos de 2kb. 5kb, 10kb de librerías genómicas a gran escala Scaffold Ensamblaje de superscaffold por 454, Extremos pareados Fosmid y BAC Superscaffold 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences
  • 30. Consultando el genoma de la papa en busca de secuencias de genes de resistencia en la región “hotspot” del cromosoma 11 Mapa genético de Solanum paucissectum Mapa Físico DM cromosoma 11 0 POX67 Cromosoma 11 SUPER SCAFFOLD_ID MARKER GM_POS PGSC0003DMB000000365 PM1281_251 65.748 7 TG523 10 PCO002 TG523 PGSC0003DMB000000131 PGSC0003DMB000000365 PM0395.122.A PM1281_237 57.835 57.252 PGSC0003DMB000000131 538888 56.61 18 PCO93 solcap_stsnp_c1_6643 54.71 19 21 CT182 E32M48R6 CT182 PGSC0003DMB000000354 PM0206 solcap_stsnp_c1_6633 54.257 53.45 22 C2At2_TaqI.2 PGSC0003DMB000000152 STG0001.150_XI 51.426 23 26 C2At2_TaqI.1 NL25_HpaII NL25 PGSC0003DMB000000148 473601 50.918 27 PCO93all PGSC0003DMB000000365 solcap_stsnp_c1_2221 50.775 32 RecepSer/ThrKin Put_recKin 36 TG651 43 NBS5_HaeIIIR2 44 TG497 Super scaffold PGSC0003DMB000000152 0 1.4Mbp 51 TG629 57 TG147 Genes 59 P2_HaeIIIR3 Predecidos >PGSC0003DMC100028839 66 P3_HaeIIIR4 ATGGCAAAATCATCCCATGAAATTGAGCACCCAATTAAGGCATTTGGATGGGCAGCTAGA 69 NBS9_MseIR6 GACACTTCTGGTGTTCTTTCTCCTTTCAACTTCTCAAGAAGGGCTACTGGGGAGAATGAT 72 NBS5a_HaeIIIR3 Diseño de nuevos GTACAATTCAAAGTGTTGTATTGTGGAATATGTCACTCAGATTTTCATATGCTCAAGAAT GAATGGGATAATTCCAAGTACCCTATTGTGCCTGGGCATGAGATCGTGGGAGTGGTAACC 75 CT055 oligos para saturar GAGGTCGGTAGCAAGGTTGAAAAAGTGAAAGTGGGGGACAATGTAGGTGTTGGAGTAATC GTAGGATCATGTCGAAAATGTGATAGTTGTACCAATGACCTCGAACAATATTGTTCTAGC 82 TG400 AGTATTGGCACGTATAGTACAACTTACTATGACGGAACCACCACACACGGAGGCTACTCC región hotspot en GATCTCATGGTAGCCAACGAGCATTTCGTGCTCCGTTGGCCGGAGAATTTACCGATGGAT GCTGCCCCATTGTTGTGTGCTGGTATCACAACATATAGCCCATTGAGATATTTTGGGCTT 90 TG044 Solanum paucissectum GATAAGCCTGGATTGAACATTGGTGTTGTGGGCCTTGGTGGGCTGGGCCATATGGCTGTG AAATTTGCAAAGGCTTTTGGATGCAATGTGACTGTTATTAGTACTTCTATTAATAAGAAG GATGAAGCAATTAAACATCTTGGTGCTAATTCATTCTTGATTAGTCATGATCAAGAACAA ATCAGGTATTTTTTCTCACTGGTTTAG
  • 31. Especies Las primeras Variedades Silvestres domesticadas Modernas 4. Ampliar la base genética de caracteres de adaptación
  • 32. Utilizando especies silvestres y cultivadas heterocigóticas Aprovechando interacciones génicas no aditivas: Método: Poliploidización sexual Uni y Bilateral Fuentes diploides Progenitores silvestres y cultivadas (2x) tetraploides (4x) Gametos 2n rap pcs chqber mcd phu x gon chm stn pur spl
  • 33. Rescate de Embriones: Método para acceder al Acerbo Terciario Bayas Abrir las bayas en (19-27 días condiciones asépticas. después Usar cámara de flujo polinización) laminar. Extirpar bajo Estereomicrsocopio Esterilizar Superficie (Etanol Torpedo 70% 30s Polinización Hipoclorito de Ca Globular Acorazonado Transferir pro- Propagación in-vitro Plántulas de embriones (fase Transplante al en medio tres nódulos de torpedo) a invernadero Murashinge Skoog medio de cultivo
  • 34. Híbridos inter- específicos resistentes a P. infestans desde rescate de embriones confirmados por marcadores SSR A B C D E F Group Goniocalyx × S. chiquidenum A B C D E F
  • 35. Hibridación Inter-poblacional: Aprovechando las interacciones génicas no aditivas en papas tetraploides Ganancia genética por Heterosis Población Población Combinando B3 resistencia a virus y LTVR tizón tardío Resistencia de campo al tizón Resistencia tardío a virus Adaptación a Adaptación trópicos altos a trópicos bajos
  • 36. Mayor frecuencia de familias heteróticas en la nueva población híbrida interpoblacional Distancias genéticas basadas en SSR útiles en la predicción de grupos heteróticos Las poblaciones progenitoras forman dos grupos claramente definidos 393242.50 391004.18 170 392639.31 160 B3 392639.8 150 B3 393280.64 140 LTVR 392637.27 130 120 LTVRB3 392650.49 110 392657.8 H% 393074.86 100 90 C97.158 80 C97.270 70 WA.077 60 C93.154 50 LTVR C97.214 40 30 LR93.309 20 C90.266 10 LR93.050 0 92.187 -10 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 9 10 11 12 13 14 15 16 Coeficiente de Similaridad de Jaccard Coeficiente de Similaridad de Jaccard Número de tubérculos
  • 37. 5. Minimizar los efectos ambientales para maximizar el poder de selección 38 Air Temperature ºC 34 30 Max Day Tº 26 22 18 Max Night Tº 14 10 Oct Nov Dec Jan Feb Mar (Midmore, 1992)
  • 38. Selección Asistida por Marcadores (MAS) Ejemplo: Resistencia Extrema al PVY CP58, CT182 Ry markers Ryadg , Rysto RYSC3, M17, Elimina efectos ambientales sobre el CD17, TG508, M5, M45, M6 fenotipo del caracter GP125 CT 168 Elimina tempranamente los genotipos TG 497 indeseables en una población de mejoramiento TG 327 TG 57 Acelera el progreso en el mejoramiento ahorrando espacio, tiempo y mejorando el CT55 uso de los recursos TG546 TG26 TG393 XI M 17
  • 39. Selección de Progenitores Multíplices Asistida por Marcadores: Técnica de Disociación de Alta Resolución (HRM) Escaneador de Luz
  • 40. Mejorar los métodos de tamizados masal = Mejora de estimados genéticos (más precisos). Caso: Resistencia al PLRV Inoculación en Componentes Prueba de Inoculación Genéticos de Exposición en brotes brotes Variancia Natural en Campo DE DE σ2A 190.7 72.7 264.4 98.1 σ2D 121.1 52.7 103.4 37.4 σ2AxL 18.0 14.2 13.0 8.7 σ2DxL 40.1 41.1 3.5 23.2 Exposición en σ2e 60.7 6.2 42.6 4.3 Campo σ2P 351.0 383.1 h2 0.54 0.20 0.69 0.26 Infectores σ2D/σ2A 0.64 0.39
  • 41. Métodos Masales de Selección en Generaciones tempranas para tolerancia al calor Método en Invernadero Método in-vitro Patrones de Tuberización Tuberización Periodo Vegetativo Normal 25oC I II III IV Desórdenes Fisiológicos Inducción de tuberización
  • 42. Herramientas para la evaluación masal de poblaciones de mejoramiento y germoplasma bajo ambientes contrastantes. Ejemplo: Estrés hídrico Cámaras Infrarrojas Termómetro Infrarrojo
  • 43. Cámaras Infrarrojas en la captura de imágenes en tiempo real. Diferentes niveles de estrés hídrico NDVI 0-0.1 S catterplot of N DVI vs Mean Geometric 0.1-0.2 0.2-0.3 131 Env 0.6 DI TD C an ch an 118 0.5 C an ch an 135 0.3-0.4 135 126 131 U n ic a 103 128 U n ica 0.4-0.5 NDVI 124 130 0.4 Reich e 122 128 M .Bo n ita 130 118 Reich e 124 0.5-0.6 0.3 r=0.50 126 103 Fresh yield (t/ha) 0.2 5 M .Bo n ita 10 15 20 25 <16 Scatterplot of NDVI camera vs Yield Mean (t ha -1) Mea n Geome tric 0,7 M.Bonita >24 118 Env DI 131 NI 122 Reiche 130 131 TD 0,6 103 126 Canchan 128 124 Canchan 118 135 NDVI camera 135 Unica 0,5 Canchan 131 135 126 128 103 124 Unica 130 Reiche Unica 0,4 Reiche 130 M.Bonita 124 122 118 128 r=0.88 Riego Normal 0,3 126 103 M.Bonita 0,2 0,0 10,0 13,6 20,0 30,0 40,0 Yield Mean (t ha -1) Déficit de Riego Sequía terminal
  • 44. Flujograma para manejo de Información Publicación de métodos Muestras Información de pedigrí Datos de invernadero Plataforma Repositorio Plataforma Datos de para para pública campo mejoradores Mejoradores Datos de Laboratorio Análisis de datos Calidad Reportes de datos reproducibles
  • 45. Alianzas Estrtegicas Alcanzando Preferencias y Requisitos de Usuarios Multiples
  • 46. Agradecimientos • W Amoros, G. Burgos, T. Zum Felde • J. Landeo, M. Gastelo • R. Schafleitner, R, Gutierrez • R. Quiroz, C. Barreda • D.Koeyer, L. Portal; R. Simon • M. Ghislain, R. Herrera • H. Villamin. S, de Haan, D. Caldiz • H. Kreuze, M. Orrillo, E. Mihovilovich, E. Salas