1. Trigliceridos
GPO-POD. Enzimático colorimétrico
BSIS31-E Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
TRIGLYCERIDES
Determinación cuantitativa de triglicéridos
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL METODO
Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y
ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato
deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa (GK) para
producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-difosfato (ADP). El G3P
es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de
hidrogeno (H2O2) por GPO.
Al final, el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona
(4-AF) y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa (POD) dando
una coloración roja:
Triglicéridos + H2O
LPL
Glicerol + Ácidos grasos libres
Glicerol + ATP
quinasaGlicerol
G3P+ ADP
G3P + O2
GPO
DAP + H2O2
H2O2 + 4-AF + p-Clorofenol
POD
Quinona + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de
triglicéridos presentes en la muestra ensayada1,2,3
.
SIGNIFICADO CLINICO
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo
por las lipoproteínas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los
niveles de triglicéridos.
Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, como
ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o
diabetes mellitus, pueden estar asociadas con su elevación3,6,7,
.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R 1
Tampón
GOOD pH 7,5
p-Clorofenol
50 mmol/L
2 mmol/L
R 2
Enzimas
Lipoprotein lipasa (LPL)
Glicerol quinasa (GK)
Glicerol-3-oxidasa (GPO)
Peroxidasa (POD)
4 – Aminophenazone (4-AF)
ATP
150000 U/L
500 U/L
2500 U/L
440 U/L
0,1 mmol/L
0,1 mmol/L
TRIGLYCERIDES CAL Patrón primario acuoso de Triglicéridos 200 mg/dL
PREPARACION
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2
Enzimas en un frasco de R 1 Tampón.
Ref: 1001310 Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir ( ) el contenido de
un vial de R 2 Enzimas en 10 mL de R 1 Tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
RT Estabilidad: 6 semanas en nevera (2-8ºC) o una semana a 15-25ºC.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm > 0,14.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero y plasma heparinizado o EDTA 1
. Estabilidad de la muestra: 5 días
a 2-8ºC.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 505 (490-550) nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco Patrón Muestra
RT (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrón
(Nota1,2)
( L) -- 10 --
Muestra ( L) -- -- 10
Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min. a temperatura ambiente.
4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
CALCULOS
Patrón)A(
Muestra)A(
x 200 (Conc. Patrón) = mg/dL de triglicéridos en la muestra
Factor de conversión: mg/dL x 0,0113 = mmol/L.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
instrumento, los reactivos y el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 40 – 160 mg/dL
Mujeres: 35 – 135 mg/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERISTICAS DEL METODO
Rango de medida: Desde el limite de detección de 0,7 mg/dL hasta el limite de
linealidad de 1000 mg/dL.
Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisión:
Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Media (mg/dL) 118 216 119 215
SD 0,67 0,94 2,17 2,91
CV (%) 0,60 0,43 1,83 1,36
Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0012 A.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r): 0,996.
Ecuación de la recta de regresión: y= 1,00x + 0,0743.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
No se han observado interferencias con bilirrubina hasta 170 mol/L y
hemoglobin hasta 10 g/L
2
.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
determinación de los triglicéridos
4,5
.
NOTAS
1. TRIGLYCERIDES CAL: Debido a la naturaleza del producto, es
aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con
facilidad.
2. LCF(Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos
en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores
séricos.
4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
este reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFIA
1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of enzimes.
Clin Chem 1973; 19 (5): 476-482.
2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 437 and Lipids 1194-1206.
4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACION
Ref: 1001310 5 x 10 mL
Ref: 1001311 10 x 20 mL
Ref: 1001312 10 x 50 mL
Ref: 1001313 4 x 125 mL
Ref: 1001314 4 x 250 mL
Cont.
2. Triglycerides
GPO-POD. Enzymatic colorimetric
BSIS31-I Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
TRIGLYCERIDES
Quantitative determination of triglycerides
IVD
Store at 2-8ºC
PRINCIPLE OF THE METHOD
Sample triglycerides incubated with lipoproteinlipase (LPL), liberate glycerol and
free fatty acids. Glycerol is converted to glycerol-3-phosphate (G3P) and
adenosine-5-diphosphate (ADP) by glycerol kinase and ATP. Glycerol-3-
phosphate (G3P) is then converted by glycerol phosphate dehydrogenase
(GPO) to dihydroxyacetone phosphate (DAP) and hydrogen peroxide (H2O2).
In the last reaction, hydrogen peroxide (H2O2) reacts with 4-aminophenazone
(4-AP) and p-chlorophenol in presence of peroxidase (POD) to give a red
colored dye:
Triglycerides + H2O
LPL
Glycerol + free fatty acids
Glycerol + ATP
kinaseGlycerol
G3P+ ADP
G3P + O2
GPO
DAP + H2O2
H2O2 + 4-AP + p-Chlorophenol
POD
Quinone + H2O
The intensity of the color formed is proportional to the triglycerides
concentration in the sample
1,2,3
.
CLINICAL SIGNIFICANCE
Triglycerides are fats that provide energy for the cell.
Like cholesterol, they are delivered to the body’s cells by lipoproteins in the
blood. A diet with a lot of saturated fats or carbohydrates will raise the
triglyceride levels. The increases in serum triglycerides are relatively non-
specific. For example liver dysfunction resulting from hepatitis, extra
hepatic biliary obstruction or cirrhosis, diabetes mellitus is associated with
the increase 3,6,7
.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should
integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS
R 1
Buffer
GOOD pH 7.5
p-Chlorophenol
50 mmol/L
2 mmol/L
R 2
Enzymes
Lipoprotein lipase (LPL)
Glycerolkinase (GK)
Glycerol-3-oxidasa (GPO)
Peroxidase (POD)
4 – Aminophenazone (4-AP)
ATP
150000 U/L
500 U/L
2500 U/L
440 U/L
0.1 mmol/L
0.1 mmol/L
TRIGLYCERIDES CAL
Triglycerides aqueous primary standard 200
mg/dL
PREPARATION
Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one vial R 2
Enzymes into one bottle of R 1 Buffer.
Ref: 1001310 Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one
vial R 2 Enzymes in 10 mL of R 1 Buffer.
Cap and mix gently to dissolve contents.
WR stability: 6 weeks at 2-8ºC or 1 week at room temperature (15-25ºC).
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and
contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the
expiration date.
Signs of reagent deterioration:
- Presence of particles and turbidity.
- Blank absorbance (A) at 505 nm > 0.14.
ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
- General laboratory equipment.
SAMPLES
Serum or heparinized or EDTA plasma
1
. Stability of the sample: 5
days at 2-8ºC .
PROCEDURE
1. Assay conditions:
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 505 nm (490-550)
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
3. Pipette into a cuvette:
Blank Standard Sample
WR (mL) 1.0 1.0 1.0
Standard
(Note 1,2)
( L) -- 10 --
Sample ( L) -- -- 10
4. Mix and incubate for 5 min. at 37ºC or 10 min. at room temperature.
5. Read the absorbance (A) of the samples and Standard, against the
Blank. The colour is stable for at least 30 minutes.
CALCULATIONS
dardtanS)A(
Sample)A(
x 200 (Standard conc.) = mg/dL triglycerides in the sample
Conversion factor: mg/dL x 0.0113= mmol/L.
QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
reagents and calibrator for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
REFERENCE VALUES
Men 40 – 160 mg/dL
Women 35 – 135 mg/dL
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 0.7 mg/dL to linearity limit of 1000
mg/dL.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
Precision:
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (mg/dL) 118 216 119 215
SD 0.67 0.94 2.17 2.91
CV (%) 0.60 0.43 1.83 1.36
Sensitivity: 1 mg/dL = 0.0012 A.
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results obtained using 50 samples were the following:
Correlation coefficient (r): 0.996.
Regression equation: y= 1.00x + 0.0743.
The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
INTERFERENCES
No interferences were observed with bilirubin up to 170 mol/L and
hemoglobin up to 10 g/L
2
.
A list of drugs and other interfering substances with cholesterol
determination has been reported by Young et al
4, 5
.
NOTES
1. TRIGLYCERIDES CAL: Proceed carefully with this product because
due its nature it can get contamined easily.
2. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
3. Calibration with the aqueous Standard may cause a systematic error in
automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a
serum Calibrator.
4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
analyzers. Instructions for many of them are available on request.
BIBLIOGRAPHY
1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of enzimes. Clin
Chem 1973; 19 (5): 476-482.
2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton
1984; 437 and Lipids 1194-1206.
4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PACKAGING
Ref: 1001310 5 x 10 mL
Ref: 1001311 10 x 20 mL
Ref: 1001312 10 x 50 mL
Ref: 1001313 4 x 125 mL
Ref: 1001314 4 x 250 mL
Cont.
