practica de laboratorio para preparar medios de cultivo (ROSA BENGALA Y PCA)

1. UNIVERSIDAD TECNICA DEL NORTE
FICAYA
BIOTECNOLOGIA
INFORME DE MICROBIOLOGIA I #1
IMTEGRANTES: FECHA: 24 de Noviembre del 2015
 Tatiana Delgado
 Roger Jurado
 Jeniffer Novoa
 Alejandra Plasencia
 Chritopher Rivadeneira
TEMA: PREPARACIÓNMEDIOS DE CULTIVO (ROSABENGALA Y PCA)
OBJETIVO GENERAL
 Elaborar medios de cultivos a través del conocimiento de su valor nutricional y los
componentes que posee, con ello lograr una correcta manipulación con las debidas
medidas de asepsia.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Realizar el análisis de cada solución para obtener los datos requeridos.
 Preparar la cantidad necesaria de medios de cultivo mediante cálculos realizados.
 Manipular de manera correcta cada una de las máquinas tales como: estufas, balanzas,
autoclaves y mechero.
 Asear los lugares en donde se va a realizar la preparación de medios de cultivo.
 Conversar a temperaturas establecidas cada uno de los medios preparados.
MATERIALES
 Mechero
 Fosforos
 Estufa electrica
 Autoclave
 Guantes de calor
 Balanza
 Pelempaque o papel alimunio
 12 cajas petri
 2 matraz de 250 ml
SUSTANCIAS
 Medio PCA
 Medios ROSA BENGALA
 Agua destilada
 Alcohol al 70%

2. PROCEDIMIENTOS
1. Prepara los materiales necesarios, limpios y esterilizados.
2. Esterilizar el espacio de trabajo con alcohol al 70%
3. Calcular la cantidad necesaria de cada compuesto (medios) para pesar.
4. Prender el mechero para menterner un ambiente esteril durante todo el procedimiento.
5. Para elmedio PCAse pesó 1.9 gramos de medio en 100 ml de agua destilada para disolver.
6. Para el medio ROSA BENGALA se pesó 3,2 gramos en 100 ml de agua destilada para
disolver.
7. Una vez disueltos el medio PCA y ROSA BENGALA, cada uno individualmente. Se
llevó a calentamiento en un estufa electrica, hasta ebullición.
8. Seguido, se llevó a autoclavar a 121 grados centigrados durante el tiempo de 15 minutos
ambos medios.
9. Se colocó 15 ml de medio en cada caja petri respectivamente, quedando 6 cajas petri de
medio PCA y 6 cajas petri de medio ROSA BENGALA.
10. Finalmete se colocó las cajas Petriempaquetadas en la refrigeradora.
CALCULOS
Medio PCA Medio ROSA BENGALA
MARCO TEORICO
MEDIO EN PCA (Recuento en Placa Agar/ Plate Count Agar)
El medio de cultivo microbiológico PCA es comúnmente usado para determinación de
microorganismos en aguas residuales, alimentos, agua, comida (Group, 2015). El contenido de
nutrientes en el medio lo hace apropiado para cultivar bacterias como Escherichia. coli, con el fin
de conseguir un adecuado crecimiento. La fórmula del PCA contiene extracto de levadura,
tripteína, glucosa y agar; además para la solución final se recomienda el pH de 7,0 ± 0,2 y una
incubación de 24-48 horas a 32-35°C (“Recuento en Placa Agar,” 2015). La tripteína le provee
a los microorganismos las fuentesde aminoácidos necesarias,mientras que el extractode levadura
brinda vitamina B (“AGAR Plate Count,” 2010).
El beneficio del medio PCA es hacia las bacterias que crecen sobre él, permitiendo una fácil
identificación de las colonias formadas luego de la incubación. Cabe recalcar que la fuente de
carbono es la glucosa dextrosa, dependiendo del fabricante y se recomienda siempre tomar en
cuenta la fecha de caducidad y el debido almacenamiento del medio luego de su uso (“Plate Count
Agar (PCA),” 2015).
ROSA DE BENGALA
Otro de los medios preparados en laboratorio fue la Rosa de Bengala, un medio muy usado para
determinar bacterias causantes de la enfermedad de la brucelosis (Morera & Andrade, 2014). El
19 gr PCA ------------- 1000 ml
X -------------- 100 ml
= 1,9 gr PCA en 100 ml de agua
destilada
32 gr Rosa Bengala --------- 1000 ml
X ---------------- 100 ml
= 3,2 gr de Rosa Bengala en 100 ml de
agua destilada

3. medio se lo usa por su alta efectividad, facilidad de uso y económico, ya que se puede determinar
de forma masiva las bacterias de la fiebre mediterránea (brucelosis) causada por ingerir alimentos
de origen animal, como lácteos contaminados (“Rosa de Bengala,” 2015).
Depende del estudio, el medio puede contener anticuerpos para detectar anticuerpos anti-Brucela
en sueros de animales y humanos, y además contiene una suspensión bacteriana de B. abortus
con un pH de 3,6 (“Rose Bengal,” 2015). Pero,para el caso de cultivos estudiantiles el medio es
usado para cultivar levaduras y mohos, y en el cual la composición sería de Glucosa, fosfato
potásico, sulfato de magnesio, dicloran, rosa de bengala, cloranfenicol y agar.El pH recomendado
es de 5,6 ± 0,2. Es un medio muy útil para evitar tener baterías en él, gracias al cloranfenicol, si
lo que se busca es recuperar hongos (“DICLORAN ROSA BENGALA CLORANF. AGAR
DRBC,” 2008).
RESULTADOS
Los resultados que se obtuvieron tanto para PCA como Rosa Bengala fueron adecuados debido a
que con las cantidades tomadas de éstos, más el agua destilada añadida, los minutos en ebullición
y los demás pasos establecidos con delicadeza aportaron un cierto grado de equilibrio para haber
tenido una solución madre favorable para distintos procesos posteriores a realizarse.
CONCLUSIONES
 Se llevó a cabo una serie de pasos idóneos para que los medios de cultivo realizados
hayan adquirido una composición correcta para su posterior utilización.
 Mediante las técnicas y los instrumentos adecuados en una preparación de medios de
cultivo se obtuvieron resultados favorables en base a la importancia de los componentes
de dichos medios.
 Con la gelificación de los medios de cultivo se observó y se comprobó que las
preparaciones,las concentracionesfueron exactasy por ende se manifestó una contextura
propicia.
RECOMENDACIONES
 Para poder obtener un medio de cultivo correcto es necesario esterilizar muy bien el área
de trabajo al igual que nuestras manos.
 Realizar los cálculos correspondientes para la proporción de medio de cultivo a realizar,
siento las cantidades a pesar exactas.
 Siempre en el momento de trasvasar el medio de cultivo hacia las cajas Petri mantener
cerca a la llama del mechero para evitar contaminaciones.
 Una vez solido el medio de cultivo dentro de las ajas Petri empacarlas y colocarlas con
el medio de cultivo hacia arriba en el refrigerador.

4. ANEXOS

5. Referencias:
AGAR Plate Count. (2010).
DICLORAN ROSA BENGALA CLORANF. AGAR DRBC. (2008). Retrieved from
http://www.medioscultivo.com/dicloran-rosa-bengala-cloranf-agar-drbc/
Group, M. (2015). Plate Count Agar. Retrieved from
http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU342_SPA.pdf
Morera, M. O., & Andrade, M. A. (2014). Prueba de Rosa de Bengala y/o Tarjeta en el
diagnóstico de brucelosis bovina. Senasa Perú. Retrieved from
http://www.senasa.gob.pe/senasa/wp-content/uploads/2014/12/Prueba-de-Rosa-de-
Bengala.pdf
Plate Count Agar (PCA). (2015). Retrieved from
http://www.solabia.com/solabia/produitsDiagnostic.nsf/0/5F49F476B0956812C12
574C700313A31/$file/TDS_BK144_BM015_033_v8.pdf
Recuento en Placa Agar. (2015). Retrieved from
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/recplacagar.htm
Rosa de Bengala. (2015). Retrieved from
http://www.lookformedical.com/search.php?q=Rosa+Bengala&lang=2&src=faq
Rose Bengal. (2015). Retrieved from
http://www.linear.es/ficheros/archivos/322_2210005cas.pdf