2. 1) Acumulación de proteínas anómalas
• huntingtina en EH (Gusella y Macdonalds 2006)
• α-sinucleina en EP… (Li y cols 2004)
• β-amiloide y tau en EA (Grundke-Iqbal y cols 1986)
• “tau” en Taupatías…
2) Diagnóstico y clínica compleja en etapas iniciales y tardías
• Aparición de demencia en etapas finales de EP…
• Demencias con acúmulos de α-sinucleína…
• Uso de mutantes para diagnóstico temprano
Neurociencia: Aspectos comunes en neurodegeneración
α-sinucleina
huntingtina
3. INTRODUCCIÓN: Enfermedad de Alzheimer
1ª E. Neurodegenerativa
• Espontánea
• Familiar
Formación placas proteína amiloide
4. 1ª E. Neurodegenerativa
• Espontánea
• Familiar
Formación placas proteína amiloide
Neurodegeneración progresiva
Ovillos neurofibrilares proteína Tau
INTRODUCCIÓN: Enfermedad de Alzheimer
5. Enfermedad Parkinson
2º E. Neurodegenerativa
Factores genéticos
Desencadenantes ambientales
Pérdida de neuronas dopaminérgicas, cuerpos Lewy
Pérdida de DA > 80% Estriado
Bradiquinesia, rigidez, temblor...
Déficit cognitivos, depresión...
INTRODUCCIÓN: Enfermedad de Parkinson
Factores GenéticosFactores Ambientales
•Manganeso
•MPTP
•Rotenona
•Paraquat
•Virus, EP
postencefalítico “El 15 % de los pacientes tiene parientes
afectados” Gowers 1900
Alteraciones en diferentes
genes provocan EP
hereditaria
+
Causas de la pérdida de
neuronas DAérgicas en EP:
• disfunción
mitocondrial
• aumento del estrés
oxidativo
• fallo de los sistemas de
degradación de
proteínas
• activación microglial
7. 1) ¿“IN SILICO”?
2) IN VITRO
• Líneas establecidas (líneas “inmortalizadas”, tumorales)
• Cultivos primarios (embrionarios)
• “Esplantes” celulares (procedentes de tejidos “accesibles”)
Investigación: Modelos de estudio
8. 3) MODELOS ANIMALES
- APPswe modelo de Alzheimer
- PK-KO modelo de Parkinson
- R6/1 modelo de Huntington
- Tau modelo de Taupatías
Investigación: Modelos de estudio
9. 3) MODELOS ANIMALES
- APPswe modelo de Alzheimer
- PK-KO modelo de Parkinson
- R6/1 modelo de Huntington
- Tau modelo de Taupatías
Investigación: Modelos de estudio
PK-KO / Tau
APP / PK-KO
R61 / PK-KO
10. MATERIAL Y MÉTODOS: Comportamiento
Control peso, postura…
Longitud pisadas
Rota-Rod
Acti-Track
Y-Maze
Aversiones…
11. Cátodo (-)Ánodo (+) Membrana
Anticuerpo primario
Anticuerpo Secundario
Sustrato fluorescente
Producto
insoluble
MATERIAL Y MÉTODOS: Western Blot
12. RESULTADOS: Agregados de β-amiloide (WB)
W
T
A
PP
A
PP/PK
+/-
PK
+/-
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
**
***
-Amyloid/-actina
APP
APP/PK
+/-
0.0
0.1
0.2
0.3
-Amyloid/-actin
40 KDa 80 KDa
52 kDa
70 kDa
24 kDa
38 kDa
β-actin
• Mayor expresión de APP “endógeno” (40 KDa) en líneas APP y APP-PK
• Similar expresión de inserto humano mutado en APP y APP-PK (80 KDa)
Modelo APP-PK
13. MATERIAL Y MÉTODOS: Preparación muestras IHQ y WB
WB y ELISA
Preparación de las muestras
Homogenado
hemicerebro
PBS + inhibidores
GUANIDINA
PBS +
Inhibidores
ELISA Fracción Soluble β-
Amiloide
Western Blot
ELISA Fracción Total β-
Amiloide
Modelo APP-PK
Western Blot
Histología
MBL β-amiloide (39-42)
Abcam β-amiloide (1-42)
Anti GFAP
Anti tau-5
TUNEL
β-amiloide TUNEL+
GFAP
Tau
Hoescht
14. RESULTADOS: Placas de β-amiloide en corteza, APP-PK+/-12-meses16-meses
WT APP/ PK+/- PK+/-
WT APP/ PK+/- PK+/-
APP
APP
Modelo APP-PK
15. RESULTADOS: Reacción astroglial, TUNEL
WT
APP PK+/- PK+/-
AP
P
Modelo APP-PK
GFAP, Hoescht, Tau5
WT
APP APP+
WT+
Mezcla
TUNEL+ Hoescht
Célula normal TUNEL+
