1. P ROYECTO : MEJORA GENETICA
DEL MELOCOTONERO
MIRAFLORES PARA LA
RESISTENCIA A MONILINIA SPP
EN EL VALLE DEL EBRO
INTEGRANTES:
CARLOS GUZMAN CABALLERO
CARLOS GIL GARCIA
JUAN CARLOS BARROSO
APOLINAR SALDAÑA TAFUR
Master Internacional en:
MEJORA GENETICA VEGETAL
Zaragoza (España),
4 Octubre 2010 - 10 Junio 2011
La Almunia (Zaragoza)

2. 1. IDENTIFICACIÓN DE LOS
SOLICITANTES Y SOCIOS

Solicitantes y responsables científicos:
GRUPO CONSULTOR ACCC
1. Juan Carlos Barroso
3. Carlos Guzmán Caballero

2. Carlos Gil García
4. Apolinar Saldaña Tafur
Coordinador científico: Carlos Gil García
SOCIOS (ALIANZAS ESTRATEGICAS)
Participantes
Dirección y datos de contacto
Aporte
Departamento de
Protección Vegetal,
INIA
Carretera de La Coruña km 7,
28040 Madrid
Caracterización la
estructura genética
de la población de
Monilinia spp.
Università degli
studi di milano
PhD candidate: Igor
A. Pacheco Cruz.
Via Celoria, 2 - 20133 Milano
tel. 02.503.16500/01/02/03, fax
02.503.16508, email: preside.agraria@unimi.it
Desarrollo de QTL para
identificación de
resistencia

3. SOCIOS
(ALIANZAS ESTRATEGICAS)
SOCIOS
Participantes
Dirección y datos de contacto
Aporte
AEAMDE
Avenida Laviaga Castillo No 4
(La Almunia)
Grupo de interés,
aporte de cepas locales
CSIC, Aula Dei
Avda Montañana 930, 50059
(Zaragoza)
Servicio de biología
molecular (SBM) y
fitopatología
SAT ARA EIBI
Cra Nº II (Madrid-Barcelona)
km 272
50100 La Almunia de Doña
Godina (Zaragoza)
Campos de
observación y
experimentación
Unidad de
Tecnología de los
Alimentos
(Universidad de
Zaragoza)
Facultad de Veterinaria,
Carretera Castellon Km 4, 300
(Zaragoza)
Estudio microbiológico
de susceptibilidad de
parentales

4. 2. ESTADO DE LA
CUESTION

IMPORTANCIA ECONOMICA DEL MELOCOTON EN ESPAÑA
El melocotonero y el nectarino ocupan unas 92.700 ha de
superficie cultivada en España (CE, 2010a), de las cuales se
suele extraer un producción media anual superior a 1 millón de
toneladas (MARM, 2010).
Esta producción tiene además un valor muy importante en el
mercado y puede verse afectada de forma muy significativa por
la podredumbre parda del fruto (Monilinia spp.) que sucede en
el tramo final de la maduración, bien en la parcela o en el
momento de la comercialización. De hecho, se citan pérdidas
de cosecha de alrededor del 50% (Byrde y Willets, 1977) las
cuales incluso podrían llegar hasta el 100% en situaciones
puntuales muy favorables a la enfermedad.

5. 
España es el cuarto productor mundial de
melocotón, con 1.298.700 t, por detrás de China
(8.329.329 t) y a corta distancia de Italia
(1.589.118 t) y Estados Unidos (1.304.350 t).

Asimismo, es el primer exportador mundial, por
delante de Italia, Estados Unidos, Chile y Grecia
(Faostat, 2008).

La podredumbre parda del fruto (Monilinia spp.)
es una enfermedad peligrosa tanto en pre como
en post cosecha especialmente durante periodos
humedos.

6. DISTRIBUCIÓN DE LA
PRODUCCIÓN

7. 3. SITUACIÓN DEL PROBLEMA A
NIVEL TÉCNICO Y ECONÓMICO
La podredumbre parda causada por Monilinia spp. es la enfermedad más
importante del melocotonero y nectarino en el Valle del Ebro. Para controlar la
enfermedad se aplican tratamientos fungicidas a lo largo de todo el período de
cultivo. Sin embargo, en años con condiciones climáticas favorables para el
desarrollo de la enfermedad, en variedades susceptibles, se puede llegar a
perder toda la cosecha, causando graves perdidas económicas.

PRIMER PROBLEMA: EL DIAGNÓSTICO
Hasta fechas recientes, la podredumbre parda conocida en España tenía
atribuidas dos especies causantes: Monilinia laxa y Monilinia fructigena. ,
ultimamente M. fruticola esta causando daños.
De hecho, la restricción cada vez más acuciante de materias activas y grupos
químicos disponibles para su control, hace que esta enfermedad sea cada vez
de más difícil solución y un peligro muy real por la aparición de resistencias
(FRAC, 2010).

8. PUNTOS CRÍTICOS PARA
SU MANEJO

El control de la podredumbre parda es complejo, por no
decir bastante difícil. Hay que tener en cuenta que las
infecciones se producen en campo, pero que sus efectos
más devastadores se constatan después de la
recolección, ya sea en el almacén o en el mercado de
destino.

Para más desazón, aunque se conoce que la enfermedad
se desarrolla mayoritariamente en postcosecha, la
normativa española actual no presenta productos
comerciales autorizados para tratamientos en esta fase,
lo cual agrava más la situación.

En zonas húmedas se llegan a aplicar entre 10-15
tratamientos contra Monilia

9. CICLO DE VIDA DE MONILINIA spp.

10. J USTIFICACIÓN ( VATM )
VA L O R A G R O N Ó M I C O , T E C N O L Ó G I C O Y M E D I O A M B I E N TA L

Valor Agronómico:



Cultivo de importancia económica y social local
Grandes perdidas económicas debido al patógeno
Tecnológico:



Aplicación de enfoque genómico para la introducción de la
resistencia
Modelización de la infección del patógeno desde una
perspectiva integrada.
Medio Ambiental:

Disminuir la aplicación de productos químicos durante el cultivo

Desarrollo de practicas de cultivo mas respetuosas con el medio
ambiente

Es importante recordar que no existen en España registros de
fungicidas para usos en frutales de hueso en post-cosecha y que
la única solución es la protección en pre- cosecha

11. POSIBLES
RESISTENCIAS

La Monilinia spp es un hongo necrotrófico oportunista

No existe interacción gen x gen entre patógeno y planta.

Un posible 1er mecanismo de defensa en frutales contra
necrótrofos, pueden ser las barreras naturales como la
cutícula, exocarpio o componentes fenolicos.
Procesos posiblemente involucrados en la Resistencia de Monilia
en Prunus:

Suceptibilidad a Monilia a lo largo del proceso de
maduración de fruto.

PR con la patogénesis. Independientes de la maduración del
fruto.

Tejido específico de resistencia de la fruta. Que involucra al
mecanismo desconocido de resistencia del exocarpio y
endocarpio.

12. RESISTENCIA

La Resistencia a Monilia es de tipo Cuantitativa.

Resistencia completa Monilia nunca ha sido reportada en
Melocotón cultivado.

Alta Variabilidad en la susceptibilidad si se ha reportado
Caso de “Bolinha” con la mas baja susceptibilidad conocida hasta ahora:

Compactamiento celular de la epidermis

Cutícula rígida

Pocos tricomas

Altos contenidos fenólicos

Ha sido usada como donante (cosechas lluviosas)

13. FUENTES DE
RESISTENCIA
Peach Cultivar
Brown Rot
Resistance
Rating
1. Babygold No. 5
R
2. Elberta
R
3. Glohaven
R
CITADOS (Source)
Dr. Don Peterson (ret.) - Penn
State University
Dr. Don Peterson (ret.) - Penn
State University
Dr. Don Peterson (ret.) - Penn
State University
4. Contender
R
Feliciano et al. (1987)
5. Bolinha
R
Feliciano et al. (1987)
R = resistant. Control only needed under high disease
pressure.

14. 4. PROGRAMA
PROPUESTO
ACTIVIDAD
Revisíón del estado actual
Caracterización de la estructura genética de las poblaciones de Monilinia
spp. Propias y exóticas
Busquedas y adquisición de fuentes de resistencia (Variedades) polen,
plantas y frutos.
Establecimiento en campo de parentales potencialmente resistentes
Cruzamientos de parentales potencialmente resistentes con variedad
Miraflores
Validación de marcadores asociados a QTL'S detectados por Università
Degli Studi di Milano
Afinado de marcadores asociados (SNPs) a los QTL'S detectados por
Università Degli Studi di Milano.
Obtención de semilla F1 de Miraflores x resistentes potenciales, siembra y
plantación
Verificación de la resistencia (Fenotipado) con cepas locales y exóticas,
estudio de suceptibilidad en Laboratorio con parentales y F1
Análisis de QTL's de las F1 y sus parentales

15. GENOTIPADO Y FENOTIPADO
DE RESISTENCIA

Primer estudio en año 2010 con M. fructigena
para susceptibilidad de Melocotón en Europa.

Evaluación de resistencia en piel y pulpa de
fruto.

Correlación alta entre Madurez de fruto y
suceptibilidad: mecanismo de resistencia de
compuestos fenólicos es la hipótesis más
acertada

78 SSR. Interval mapping, 2 QTLs identificados
con Resistencia.

16. D ISECCIÓN Y VALIDACIÓN DE
QTL’ S

Secuenciación de Parentales (Contender(R) x
Miraflores(S)):

Micro-haplotyping de QTLs

Extracción ADN

PCR

TAQ polimerasa platinum gold

Clonación

Transformación

Secuencia

17. D ISECCIÓN Y VALIDACIÓN DE
QTL’ S

Desarrollo de SNPs en 2 regiones secuenciadas de QTLs de
resistencia: Diseño SNPs vía Bioinformática.

QTL de piel. Resistencia a la penetración del hongo.

LG-2: Entre marcadores M1a- UDP96-013

20% varianza fenotípica.

QTL de Pulpa: Resistencia a la diseminación del hongo en la
pulpa.

LG-4: Entre marcadores EPPCU9268-EPPISF032

32.5% varianza fenotípica

Correlación 93% con MD --> marcador UDAp-439

18. D ISECCIÓN Y VALIDACIÓN DE
QTL’ S

Fenotipado F1

Evaluación de SNPs de resistencia en
progenie.

Genotipado F1

Evaluación de 100 F1 para localización de
SNPs de resistencia.

ILUMINA

Identificación de SNPs en materiales con
valor agronómico y resistencia a Monilia.

Validación y resolución de QTLs de
Resistencia a Monilia.

19. CARACTERIZACIÓN DE LA
ESTRUCTURA GENÉTICA
DE LA POBLACIÓN DE M ONILINIA SPP

El estudio poblacional con marcadores
moleculares (SSR) y morfológicos con aislados
españoles y exóticos.

Se construirá un dendrograma mediante el
método de agrupamiento UPGMA para su
posterior análisis, con el objetivo de ver si existen
diferencias en los aislados y poder comparar la
evolución de las razas españolas .
Objetivos:

El potencial evolutivo de las razas de Monilinia

programas de control encaminados a reducir la
diversidad genética de Monilinia

20. E STUDIO
DE SUSCEPTIBILIDAD
A LA PODREDUMBRE PARDA
CAUSADA POR
M ONILINIA .

En cada muestreo, se pulverizarán frutos
con agua destilada estéril (ADE) como
control y otros frutos con una suspensión
de conidias (106 conidias/ml) de Monilinia
con cada una de las razas a evaluar, para
evaluar la incidencia de la enfermedad.

Buscamos determinar la susceptibilidad de
los cultivares en diferentes momentos
antes de cosecha y el efecto sobre el
desarrollo del patógeno.

21. 1. MEDIDAS PARA LA
PRODUCCIÓN INTEGRADA

Mantener el estado sanitario de la parcela, eliminando
toda la materia muerta de la parcelas (eliminar restos de
frutos y poda) que pueda servir de refugio al hongo.

Apropiado manejo del aclareo y el riego (como regla
general no regar dos semanas después de aclareo).

Evitar la humedad elevada que como consecuencias de
lluvias y riego se agrava con la presencia de malas hierbas
en la parcela, incrementando la posibilidad de
esporulación de los frutos infectados del aclareo.

Manejo de la densidad de copas mediante poda en verde

Tratamientos con micro-elementos en forma de
tratamiento de calcio foliar y reducción del aporte de
nitrogeno.

22. 2. MEDIDAS PARA LA
PRODUCCIÓN INTEGRADA
CONTROL QUÍMICO

Aplicación de fungicidas, aunque existen problemas con aislados resistentes a
algunos productos.

En producción ecológica: Azufre y Cobre.
CONTROL BIOLÓGICO

Aplicaciones de formulaciones de conidias de Epicoccum nigrum aplicado en
la mismos momentos que los fungicidas.
CULTIVARES RESISTENTES

Existen cultivares moderadamente resistentes al patógeno (Bolinha y demás)
VIGILANCIA DEL PATÓGENO

Estudios específicos de supervisión para la detección, delimitación y
monitoreo del patógeno.

23. 3. MEDIDAS PARA LA
PRODUCCIÓN INTEGRADA
CONTROL POSTCOSECHA
Inspección de frutos
Tratamientos durante el almacenaje
1.
Desinfección
2.
Fungicidas
3.
Tratamientos con calor
4.
Control biológico
Desinfección de envases y medios de transporte
Manejo de residuos

24. 5. CALENDARIO DE TRABAJO
Y DISTRIBUCIÓN DE TAREAS
CRONOGRAMA
ACTIVIDAD
Revisíón del estado actual
Caracterización de la estructura genetica de las poblaciones de
Monilinia spp. Propias y exoticas
Busquedas y adquisición de fuentes de resistencia (Variedades) polen,
plantas y frutos.
Establecimiento en campo de parentales potencialmente resistentes
Modelización del patron de infección de Monilinia en el Valle del Ebro
Cruzamientos de parentales potencialmente resistentes por variedad
Miraflores
Validación de marcadores asociados a QTL'S detectados por Università
Degli Studi di Milano
Afinado de marcadores asociados (SNPs) a los QTL'S detectados por
Università Degli Studi di Milano.
Obtención de semilla F1 de Miraflores x resistentes potenciales, siembra
y plantación
MESES
1
2
X
X
3
4
X
7
8
9
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
6
X
X
5
X
X
X
X
X
Laboratorio INIA Madrid
Laboratorio biologia
molecular (BM) Aula Dei
Unidad de Tecnologia de los
Alimentos (Universidad de
Zaragoza)

25. 5. CALENDARIO DE TRABAJO
Y DISTRIBUCIÓN DE TAREAS
CRONOGRAMA
ACTIVIDAD
Modelización del patron de infección de Monilinia en el Valle del Ebro
Verificación de la resistencia (Fenotipado) con cepas locales y exoticas,
estudio de suceptibilidad en Laboratorio con parentales y F1
Análisis de QTL's de las F1 y sus parentales
Verificación de la resistencia (Fenotipado) con cepas locales y exoticas,
estudio de suceptibilidad en Laboratorio con parentales y F1
Análisis de QTL's de las F1 y sus parentales
Cruzamiento dialelico de parentales resistentes
Obtención de semilla de cruces dialelicos entre parentales resistentes,
siembra y plantación
Confirmación de QTL's en cruces dialelicos entre parentales resistentes
Obtención y divulgación de resultados y publicaciones
MESES
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
37
38
39
40
41
42
43
44
45
X
X
X
X
X
47
48
X
X
X
X
46
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Laboratorio INIA Madrid
Laboratorio biologia
molecular (BM) Aula Dei
Unidad de Tecnologia de los
Alimentos (Universidad de
Zaragoza)
X
X

26. 6. PERSONAS IMPLICADAS
EN EL PROYECTO
PARTICIPACIÓN PERSONAL IMPLICADO
Participantes
Investigador 1 (Coordinador Cientifico)
Investigador 2 (Juan Carlos Barroso)
Investigador 3 (Carlos Guzman Caballero)
Investigador 4 (Apolinar Saldaña Tafur)
Departamento de Protección Vegetal, INIA
Università degli studi di milano PhD candidate:
Igor A. Pacheco Cruz.
AEAMDE
CSIC, Aula Dei
SAT ARA EIBI
Unidad de Tecnología de los Alimentos
(Universidad de Zaragoza)
Aporte
Ejecutor
Ejecutor
Ejecutor
Ejecutor
Caracterización la estructura genética de la
población de Monilinia spp.
SEMESTRES
1 2 3 4 5 6 7 8
X
X X X
X X
X
X
X X
X X
X X
Desarrollo de QTL para identificación de resistencia
Grupo de interés, aporte de cepas locales
Servicio de biología molecular (SBM) y fitopatología
Campos de observación y experimentación
Estudio microbiológico de susceptibilidad de
parentales
X X
X X
X X
X X X X X X X X
X X

27. 7. RESULTADOS
ESPERADOS

Caracterización molecular de la población de
Monilinia spp. en el Valle del Ebro.

Identificación y validación dentro de la especie
Prunus spp. de donante/s de la resistencia.

Validación de QTL’s de resistencia de la variedad
Contender en parentales candidatos .

Introgresión de la resistencia a Monilinia spp. en
la variedad Miraflores.

Modelización del patrón de infección (Factores)

Identificación de QTL’s asociados a la resistencia

28. 8. LOGROS PREVISTOS

Validación de los QTL’s asociados a la resistencia a
Monilinia

Manual de manejo integrado, aportando directrices sobre
practicas en el cultivo de melocotón (Prunus persica L.)
que eviten el ataque del patógeno.

Reducción de la utilización de productos químicos en el
control pre y post-cosecha

Modelo de factores implicados en patrón de infección

Generación de artículos científicos y publicaciones

Jornadas técnicas para la divulgación de los resultados
obtenidos dentro del programa.

29. 9. RECURSOS
MATERIALES Y EQUIPAMIENTO
CONCEPTO
AÑO 1
AÑO 2
AÑO 3
AÑO 4
TOTAL
€
€
1.500,00
€
1.500,00
€
1.500,00
€
6.000,00
1.000,00
€
1.000,00
€
1.000,00
€
1.000,00
€
4.000,00
€
500,00
€
500,00
€
500,00
€
500,00
€
2.000,00
€
€
TOTAL
1.500,00
€
Licencias software especializado mapeo y análisis de QTL's
Reactivos
Insumos de oficina
Varios
2.000,00
5.000,00
€
€
2.000,00
5.000,00
€
€
2.000,00
5.000,00
€
€
2.000,00
5.000,00
€
€
8.000,00
20.000,00
PERSONAL
CONCEPTO
AÑO 1
AÑO 2
AÑO 3
AÑO 4
€ 12.000,00
€ 12.000,00
€ 12.000,00
€ 12.000,00
€
48.000,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
38.400,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
38.400,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
9.600,00
€
38.400,00
€
Investigador Principal 1
Investigador 2
Investigador 3
Investigador 4
Personal de apoyo
Personal cientifico
7.200,00
€
7.200,00
€
7.200,00
€
7.200,00
€
28.800,00
€ 12.000,00
€ 60.000,00
€ 12.000,00
€ 60.000,00
€
€
48.000,00
240.000,00
AÑO 3
AÑO 4
€ 12.000,00
€ 60.000,00
TOTAL
€ 12.000,00
€ 60.000,00
TOTAL
FUNCIONAMIENTO
Concepto
AÑO 1
Invernaderos con control de temperatura e iluminación y
riego automatizado.
Cámaras de cultivo de plantas.
TOTAL
AÑO 2
TOTAL POR CONCEPTO
€
1.000,00
€
1.000,00
€
1.000,00
€
1.000,00
€
4.000,00
€
€
500,00
1.500,00
€
€
500,00
1.500,00
€
€
500,00
1.500,00
€
€
500,00
1.500,00
€
€
2.000,00
6.000,00
SERVICIOS
Concepto
Laboratorio de Biología Molecular
Laboratorio de Fitopatología (Servicio de microscopia)
Alquiler de campo para ensayos (1 ha)
Aislamiento y vallado perimetral del campo experimental
Gastos de representación
Gastos de envio
Gastos de transporte aereo y terrestre
TOTAL
AÑO 1
AÑO 2
AÑO 3
AÑO 4
€ 10.000,00
€ 10.000,00
€ 20.000,00
€ 10.000,00
€
5.000,00
€
5.000,00
€
2.000,00
€
6.000,00
€
5.000,00
€
6.000,00
500,00
€ 10.000,00
€ 52.500,00
€
6.000,00
€
50.000,00
€
10.000,00
€
20.000,00
€
€
500,00
€
5.000,00
€ 26.500,00
€
500,00
€
5.000,00
€ 21.500,00
5.000,00
€ 10.000,00
€ 10.000,00
€
TOTAL POR CONCEPTO
€
20.000,00
€
500,00
€
2.000,00
€
5.000,00
€ 31.500,00
€
€
25.000,00
132.000,00

30. 10. COSTO TOTAL DEL
PROYECTO
Rubros
PERSONAL
SERVICIOS
FUNCIONAMIENTO
MATERIALES Y EQUIPAMIENTO
TOTAL PRESUPUESTO
€
€
€
€
€
PRESUPUESTO GLOBAL
Año 1
Año 2
60.000,00 € 60.000,00
53.950,00 € 27.950,00
1.500,00 € 1.500,00
5.000,00 € 5.000,00
120.450,00 € 94.450,00
€
€
€
€
€
Año 3
60.000,00
22.950,00
1.500,00
5.000,00
89.450,00
Año 4
€ 60.000,00
€ 52.950,00
€
1.500,00
€
5.000,00
€ 119.450,00
€
€
€
€
€
Total
240.000,00
157.800,00
6.000,00
20.000,00
423.800,00
El costo total del proyecto es de 423,800 euros.

31. MUCHAS GRACIAS POR
SU ATENCIÓN
MERCI DE VOTRE
ATTENTION