DNA İsolation

1. Resul ÖZBİLGİÇ
İstanbul Üniversitesi
Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü

2. • Moleküler Biyolojinin en temel
tekniklerinden biridir.
• Hücre membranını ve duvarını
yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir.
DNA İZOLASYONU

3. Neden DNA İzolasyonu?
• DNA parmak izi (fingerprint) analizi

4. • PCR
Neden DNA İzolasyonu?

5. • Dizi Analizi, Fragment Analizi
Neden DNA İzolasyonu?

6. • Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP
Neden DNA İzolasyonu?

7. DNA NEREDE?
• DNA hücre içerisinde,
-Çekirdek
-Mitokondri
-Kloroplastlarda bulunur.

8. • Bakteri ve Virüslerde DNA
DNA NEREDE?

9. DNA TİPLERİ
• Genomik (Kromozomal)
• Organel
• Plazmit (Ekstrakromozomal)

10. DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ
• Adenin, Guanin, Sitozin
ve Timin bazlarını içerir.
• Dayanıklı bir yapısı vardır.
• Negatif yüklüdür.
• Suda çözünebilir ama
alkolde çözünmez.

11. İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ
• DNA’sı izole edilecek hücre tipi
• İstenilen DNA miktarı
• İstenilen Saflık Derecesi
• İzolasyon Sonrası Kullanılacak Yöntemler
• Zaman
• Ekonomik Durum

12. DNA EKSTRAKSİYONU
• 1-Lysis
• 2-Purifikasyon
• 3-Presipitasyon

13. 1-Lysis
• Tris
• EDTA
• Sodyum Dodesil Fosfat
• Proteinaz K

14. PÜRİFİKASYON
• Pürifikasyon yöntemleri,
1-Organik Ekstraksiyon
2-Tuzla Çöktürme
3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti
4-DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması
*Anyon Değişim Kromotografisi
*Silika Bazlı Kolonlar
*Manyetik Ekstraksiyon

15. ORGANİK EKSTRAKSİYON
Fenolle karıştırılır
Üst faz:
DNA veya RNA
Orta faz: Proteinler
Alt faz:Fenol
Santrüfüjleme sonunda
Fenol;Kloroform;İzoamil Alkol Ekstraksiyonu

16. PRESİPİTASYON
• Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır.
• Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır.
• DNA Tris-Edta ile çözdürülür ve saklanır.

17. Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti

18. DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması
1-Manyetik Ekstraksiyon

19. Silika Yöntemi

20. Anyon Değişim Kromotografisi
depo
(tampon)
sabit faz
(katı porlu matriks)
mobil faz
(tampon)
elüent
Protein
karışımı

21. Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu
• KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ

22. İZOLASYON YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI

23. DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI
DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı
Katsayı;
Çift iplikçikli DNA=50
Tek iplikçikli DNA ve
RNA için=40
OD;
DNA=1,8
RNA=2

24. KAYNAKLAR
1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ
RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Laboratuvarı
2-Genetik Mühendisliğine Giriş ,Doç.Dr.Nurettin Yörek
3-DNA Pürifikasyon Yöntemleri,Dr.Ayla Avcıkurt
4-DNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırması,Gıda Örneklerinde GDO.M.SOMMA
5- 7.Prof. Dr. Rıza DURMAZ,UYGULAMALI MOLEKÜLER
MİKROBİYOLOJİ,İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi,Mikrobiyoloji ve Klinik
Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,MALATYA

25. 