O slideshow foi denunciado.
Utilizamos seu perfil e dados de atividades no LinkedIn para personalizar e exibir anúncios mais relevantes. Altere suas preferências de anúncios quando desejar.
Resul ÖZBİLGİÇ
İstanbul Üniversitesi
Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü
• Moleküler Biyolojinin en temel
tekniklerinden biridir.
• Hücre membranını ve duvarını
yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir.
D...
Neden DNA İzolasyonu?
• DNA parmak izi (fingerprint) analizi
• PCR
Neden DNA İzolasyonu?
• Dizi Analizi, Fragment Analizi
Neden DNA İzolasyonu?
• Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP
Neden DNA İzolasyonu?
DNA NEREDE?
• DNA hücre içerisinde,
-Çekirdek
-Mitokondri
-Kloroplastlarda bulunur.
• Bakteri ve Virüslerde DNA
DNA NEREDE?
DNA TİPLERİ
• Genomik (Kromozomal)
• Organel
• Plazmit (Ekstrakromozomal)
DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ
• Adenin, Guanin, Sitozin
ve Timin bazlarını içerir.
• Dayanıklı bir yapısı vardır.
• Negatif yü...
İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ
• DNA’sı izole edilecek hücre tipi
• İstenilen DNA miktarı
• İstenilen Saflık Derecesi
•...
DNA EKSTRAKSİYONU
• 1-Lysis
• 2-Purifikasyon
• 3-Presipitasyon
1-Lysis
• Tris
• EDTA
• Sodyum Dodesil Fosfat
• Proteinaz K
PÜRİFİKASYON
• Pürifikasyon yöntemleri,
1-Organik Ekstraksiyon
2-Tuzla Çöktürme
3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti
4-DNA’...
ORGANİK EKSTRAKSİYON
Fenolle karıştırılır
Üst faz:
DNA veya RNA
Orta faz: Proteinler
Alt faz:Fenol
Santrüfüjleme sonunda
F...
PRESİPİTASYON
• Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır.
• Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır.
• DNA Tris-Edta...
Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti
DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması
1-Manyetik Ekstraksiyon
Silika Yöntemi
Anyon Değişim Kromotografisi
depo
(tampon)
sabit faz
(katı porlu matriks)
mobil faz
(tampon)
elüent
Protein
karışımı
Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu
• KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ
İZOLASYON YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI
DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI
DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı
Katsayı;
Çift iplikçikli DNA=50
Tek iplikçikli DNA...
KAYNAKLAR
1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ
RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Labo...

Próximos SlideShares
Carregando em…5
×

DNA İzolayonu Yöntemleri

13.018 visualizações

Publicada em

DNA İsolation

Publicada em: Ciências
  • Seja o primeiro a comentar

DNA İzolayonu Yöntemleri

  1. 1. Resul ÖZBİLGİÇ İstanbul Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü
  2. 2. • Moleküler Biyolojinin en temel tekniklerinden biridir. • Hücre membranını ve duvarını yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir. DNA İZOLASYONU
  3. 3. Neden DNA İzolasyonu? • DNA parmak izi (fingerprint) analizi
  4. 4. • PCR Neden DNA İzolasyonu?
  5. 5. • Dizi Analizi, Fragment Analizi Neden DNA İzolasyonu?
  6. 6. • Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP Neden DNA İzolasyonu?
  7. 7. DNA NEREDE? • DNA hücre içerisinde, -Çekirdek -Mitokondri -Kloroplastlarda bulunur.
  8. 8. • Bakteri ve Virüslerde DNA DNA NEREDE?
  9. 9. DNA TİPLERİ • Genomik (Kromozomal) • Organel • Plazmit (Ekstrakromozomal)
  10. 10. DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ • Adenin, Guanin, Sitozin ve Timin bazlarını içerir. • Dayanıklı bir yapısı vardır. • Negatif yüklüdür. • Suda çözünebilir ama alkolde çözünmez.
  11. 11. İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ • DNA’sı izole edilecek hücre tipi • İstenilen DNA miktarı • İstenilen Saflık Derecesi • İzolasyon Sonrası Kullanılacak Yöntemler • Zaman • Ekonomik Durum
  12. 12. DNA EKSTRAKSİYONU • 1-Lysis • 2-Purifikasyon • 3-Presipitasyon
  13. 13. 1-Lysis • Tris • EDTA • Sodyum Dodesil Fosfat • Proteinaz K
  14. 14. PÜRİFİKASYON • Pürifikasyon yöntemleri, 1-Organik Ekstraksiyon 2-Tuzla Çöktürme 3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti 4-DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması *Anyon Değişim Kromotografisi *Silika Bazlı Kolonlar *Manyetik Ekstraksiyon
  15. 15. ORGANİK EKSTRAKSİYON Fenolle karıştırılır Üst faz: DNA veya RNA Orta faz: Proteinler Alt faz:Fenol Santrüfüjleme sonunda Fenol;Kloroform;İzoamil Alkol Ekstraksiyonu
  16. 16. PRESİPİTASYON • Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır. • Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır. • DNA Tris-Edta ile çözdürülür ve saklanır.
  17. 17. Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti
  18. 18. DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması 1-Manyetik Ekstraksiyon
  19. 19. Silika Yöntemi
  20. 20. Anyon Değişim Kromotografisi depo (tampon) sabit faz (katı porlu matriks) mobil faz (tampon) elüent Protein karışımı
  21. 21. Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu • KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ
  22. 22. İZOLASYON YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI
  23. 23. DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı Katsayı; Çift iplikçikli DNA=50 Tek iplikçikli DNA ve RNA için=40 OD; DNA=1,8 RNA=2
  24. 24. KAYNAKLAR 1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Laboratuvarı 2-Genetik Mühendisliğine Giriş ,Doç.Dr.Nurettin Yörek 3-DNA Pürifikasyon Yöntemleri,Dr.Ayla Avcıkurt 4-DNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırması,Gıda Örneklerinde GDO.M.SOMMA 5- 7.Prof. Dr. Rıza DURMAZ,UYGULAMALI MOLEKÜLER MİKROBİYOLOJİ,İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi,Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,MALATYA
  25. 25. 

×