FARMACOLOGIA EXPERIMEN TAL TECNICAS

1. MODELOS EXPERIMENTALES PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD FARMACOLÓGICA DE PRODUCTOS NATURALES Mg. Q.F. Nesquen José Tasayco Yataco

4. Extracto total del Producto Vegetal Principio Activo aislado Determinación de la Estructura Química ESTUDIO DE ACTIVIDAD FARMACOLÓGICA Estudios de Toxicidad

5. ESTUDIOS DE FARMACODINAMIA MODELO FARMACOLÓGICO Animal Sano Animal Enfermo provocado artificialmente En el animal Intacto o en órganos aislados

6. Modelos farmacológicos en animales enfermos provocados artificialmente

9. LESIONES GÁSTRICAS INDUCIDAS POR ESTRÉS POR INMOVILIZACIÓN EN FRÍO (Apecechea y col; 2000) Si 5 10 Sustancia de prueba 3 Si 5 10 Sucralfato 200 mg/mL 2 Si 5 10 Agua 1 Inducción de lesión gástrica Días de tratamiento Nº Ratas (150 – 200 g) Tratamientos Grupos

11. LESIONES GÁTRICAS INDUCIDAS POR ETANOL (Robert et al; 1979) 54 Total SI 9 Sustancia de prueba 3 6 SI 9 Sustancia de prueba 2 5 Si 9 Sustancia de prueba 1 4 SI 9 Ranitidina 100 mg/kg 3 10 mL/kg V.O. SI 9 SSF 1 mL/100g 2 SSF NO 7 días 20 – 22 ºC 180 – 200g 9 SSF 1 mL/100g 1 Administración de Etanol 96 % Inducción de lesiones gástricas Adaptación Peso Nº Ratas Tratamientos Grupos

14. Grupo 1: Se observa la conservación De la citoarquitectura del tejido gástrico Grupo 2: Se observa descamación de las células epiteliales, células Inflamatorias en región mucosa y evidente zonas erosivas.

15. Escala para calificar el grado y aspecto de la mucosa Marcadas erosiones, pequeñas o amplias y extensas, o úlceras. MUY SEVERO Puntos de erosión, con edema, congestión y sangrado SEVERO Regular edema, congestión y sangrado MODERADO Ligero edema y congestión LEVE Normal 0 ASPECTO DE LA MUCOSA GRADO

16. Medida del índice de lesión gástrica La sumatoria se expresa como índice de lesión gástrica y se expresa en Porcentaje de inhibición. 4 puntos Úlceras perforadas 3 puntos Úlceras de más de 1 mm 2 puntos Úlceras de menos de 1 mm 3 puntos Más de 10 petequias 2 puntos Menos de 10 petequias 1 punto Pérdida de mucosa, decolaración de mucosa, edema y hemorragia

17. Calificación del grado de úlcera gástrica Muy severo Índice ulceroso Mayor a 30 Severo Índice ulceroso 20 – 30 Moderado Índice ulceroso 10 – 20 Leve Índice ulceroso Menor a 10 Normal Índice ulceroso 0

20. ACTIVIDAD ANTIDIARREICA MODELO DE DIARREA INDUCIDA CON ACEITE DE RICINO (Edwin E, et al; 1997) 18 Total Material fecal 1 mL 6 Sustancia de prueba 3 Material fecal 1 mL 6 Loperamida 3mg/kg 2 Material fecal 1 mL 6 Carboximetilcelulosa 1% 1 Medición Durante 5 horas 1 hora después Aceite de ricino Nº Ratas Tratamiento Grupos

21. MODELO ANIMAL DE RESISTENCIA FÍSICA Grupo control Grupo tratado Agua Extracto acuoso 30 días de tratamiento por vía oral Prueba de nado forzado Registrar tiempo de resistencia de cada animal Sacrificar luego de 5 minutos post ejercicio Medición de actividad enzimática Superóxido Dismutasa (SOD) Lactato Deshidrogenasa (LDH) Catalasa

22. ACTIVIDAD ANTINOCICEPTIVA: TEST DEL ACIDO ACÉTICO ANIMALES: Ratones machos con peso entre 23-30g FUNDAMENTO: Inducir contorsiones abdominales en el ratón Mediante la inyección de AcH 1% V/V i.p. PROCEDIMIENTO: Cinco minutos después de la administración De AcH contar el número de contorsiones en todos los Animales durante 20 minutos.

23. 36.69 32.08 500 Extracto 2 21.06 40.00 250 Extracto 1 74.93 12.60 10 Indometacina ____ 50.67 ____ Control % Inhibición Nº de contorsiones Dosis (mg/kg) Grupo

24. ACTIVIDAD ANTINOCICEPTIVA: TEST DE LA FORMALINA ANIMALES: Ratones machos con peso entre 23-30g FUNDAMENTO: Fase 1: Indicativa de dolor neurogénico (primeros 5 minutos) Fase 2: Indicativa de dolor inflamatorio (15 a 30 min. Después De la administración de formalina) Evaluación de las fases: Se mide el tiempo Acumulado en segundos durante el cual el animal se lame la pata PROCEDIMIENTO: Se estímulo doloroso se induce por la Inyección de 20 ul de formalina al 2.5% en la pata trasera Izquierda del ratón.

25. ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA TEST DEL EDEMA DE PATA EN RATA INDUCIDO POR CARRAGANINA ANIMALES: Ratas hembras con un peso entre 180 y 200g PROCEMIENTOS: El edema se induce inyectando 0.1 mL de Carragenina al 1% en SSF en la almohadilla plantar de la Pata trasera derecha. La inflamación se cuantifica midiendo el volumen de las patas Utilizando un Pletismómetro a las 0, 1, 3 y 4 después de la Inyección de carragenina. La diferencia entre el volumen de la pata izquierda y el de la Derecha es indicativa del grado de inflamación.

26. MODELO DE INFLACIÓN INTESTINAL CRÓNICA INDUCIDA POR INDOMETACINA (Sartor et al; 1992) ANIMAL: Ratas machos de 250g, ambientados 5 días antes del experimento. PROCEDIMIENTO: Administrar dos veces indometacina vía s.c. 7.5 mg/kg cada 24 horas Los tratamientos se administran por 6 días vía oral. Después de 7 días de la administración de la primera Inyección de indometacina, las ratas son sacrificadas Se extrae el yeyuno, se lava con SSF y se fija en formol Al 10 % para estudio histopatológico.

27. Corte histológico del Epitelio intestinal normal Corte histológico del Epitelio intestinal destruido. La ulceración alcanza la Capa muscular Intestino delgado luego De la administración de los tratamientos

29. MODELO DE ESTUDIO PARA EVALUAR LA FERTILIDAD EN RATAS NORMALES 7 2 meses 180 a 200 g 24 machos 24 hembras 48 Dosis sustancia de prueba 2 7 2 meses 180 a 200 g 24 machos 24 hembras 48 Control SSF 5 mL/kg 1 Días de ambientación Edad Ratas Peso Ratas Sexo Nº Ratas Tratamientos Grupos

30. MODELO DE ESTUDIO PARA EVALUAR LA FERTILIDAD EN RATAS NORMALES 48 ratas Total Fecundación o gravidez 6 machos y 6 hembras LH, FSH, estrógeno y progesterona 6 hembras Testosterona 6 machos Sustancia de prueba 2 Fecundación o gravidez 6 machos y 6 hembras LH, FSH, estrógeno y progesterona 6 hembras Testosterona 6 machos SSF 5 mL/kg 1 Criterios de medición Sub grupos Tratamiento Grupos

31. Gravidez en ratas controles Gravidez en ratas tratadas

33. Procedimiento: Evaluación de apareamiento por un día N Tratamientos Vía administración G 1 G 2 Control (n = 10) Sustancia de prueba (n = 10) Oral Oral

35. MODELO DE ESTUDIO DE TOXICIDAD SUB AGUDO Grupo Control Grupo Tratado 30 días de tratamiento Muestras de sangre Inicio, 15 y 30 días de tratamiento Día 30, las ratas son sacrificadas Estudios de perfil bioquímico Glucosa, Triglicéridos LDL-Colesterol, HDL-Colesterol Colesterol total Proteínas totales Albúmina, TGO, TGP Estudios Hematológicos Hemoglobina Hematocrito Estudios Anatomopatológicos Hígado, corazón Páncreas, estómago Riñones

36. Actividad hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas del Smallanthus sonchifolius (Yacón) en ratas con diabetes mellitus tipo 1 y 2

37. [email_address] 1.- Material Biológico: Ratas albinas cepa Holtzmann Características DMT1 DMT2 Número de ratas Edad Peso Sexo Procedencia Temperatura Alimentación Agua 45 8 semanas 180 ± 20 g Machos INS 20 – 23 ºC Obtenidas del INS Ad libitum 24 8 a 9 semanas 225 ± 25 g Machos INS 20 – 23 ºC Obtenidas del INS Ad libitum

38. [email_address] 2.- Materila Farmacológico: Extracto hidroalcohólico al 10% p/v de Smallanthus sochifolius (yacón) Glibenclamida tableta 5 mg. Aloxano (5,6 - dioxyuracil). 3.- Equipos: Balanza analítica al 0.001g (Metter Zurich) Estufa (Memmert) Refrigerador Glucómetro Accu-Chek Active (Laboratorios Roche) Kit Sistemas Elecsys 1010/2010 (Laboratorios Roche) Equipo de disección

39. [email_address] 4.- Descripción del estudio Estudio prospectivo, longitudinal experimental del tipo “casos y controles”.

40. [email_address] 100g HOJAS DESHIDRATADAS Y MICROPULVERIZADAS DE Smallantus sonchifolius (yacón) MACERACIÓN EN 1000 mL de ALCOHOL AL 80% POR 7 DÍAS FILTRACIÓN SECADO A 40 GRADOS PESADO ALMACENAMIENTO REFRIGERACIÓN

46. MUCHAS GRACIAS