Metoda e difuzionit te disqeve

1. 1
Metoda e difusionit të diqeve-testimi i sensibilitetit të bakterjeve ndaj
agjentëve antimikrobial
Materiali i nevojshëm
 HBI 2 ml në tub(epruvetë)
 Pipeta
 Pincë/bombol me vrimë nxjerrëse
 Flakëdhënesi
 Pllakat e pjetrit me terren ushqyes Mac conkey agar/Muller- Hinto ιι agar
 Shtame bakteriologjike(enterobacteriaceae)
 Disku me agjentet antimikriobial/antibiotiët
 Ѵortex
 Ѵizore/kallper
Procedura-përgatitja e terrenit ushqyes(Mac Conkey Agar)
Është medium selektiv dhe diferencial.Mac conkey agar është i dizajnuar që në mënyr selektive t΄i izoloj
bakteriet gram negative dhe bacilet enterike dhe t′i diferencoi ato që fermentojnë laktozën nga ato që
nuk fermentojnë.Substancë ushqyese na nevoitet për katër pllaka pjetri,që një pllakë e pjetrit merë
tretësirë 15-30ml,andaj ne po e kalkulojmë për 30ml pra është më mirë të kalkulohet gjithmonë më
shumë.Në kutinë (fig.1.),ndodhet substancë ushqyese 500g, të cilën duhetë tretur në 1l ose 1oooml,
andaj neve kjo sasi nuk na nevoitet atëherë do ta kalkulojmë për 120ml se qfarë sasie na nevoitet për ta
peshuar atëherë e gjejmë sipas këtij proporcioni:
500g → 1000ml
X → 120ml
X =
500𝑔 𝑥120𝑚𝑙
1000𝑚𝑙
=60g
Fig.1. Subëstanca ushqyese

2. 2
Kështu merren dhe peshohen 60g subëstancë ushqyese, dhe hidhen në ni erlenmajer ku më parë janë
shti 120ml ujë(H2O).
Mbulohet erlenmajeri me foli dhe vendoset në ni pajisje të quajturë resho (fig.2.),dhe lihetë deri në
vlimë të vrullëshum.
Fig.2. Ngrohja e subëstancës ushqyese në resho
Pasi të jëtë ngrohur erlenmajerin e kalojmë në ni aparatë i quajturë autoklav(fig.3.)
Fig.3.Autoklavë
Autoklavizimi realizohet përmes avujve të nxehtë të ujitë nën presion, në temperaturë 121°C,presion
1.1 atmosfer dhe lihet rreth 15 minuta.

3. 3
Në vazhdim erlenmajerin e vendosim në banjo ujore dhe lihetë 15 minuta,porë me qëllim të ftohjes më
shpejtë, atëherë muretë e erlenmajerit pas një kohe të qëndrimit në banjo ujore, lagen me ujë të
ftohtë të çezmës.
Pas kësaj në kabinën e sigurisë,subëstancën ushqyese e vendosim nëpër enët e pjetrit (Fig.4.)mbyllen
enët dhe lihenë rreth 5 minuta që të ngurtësohet .
Fig.4. Subëstanca ushqyese në pllakën resistente
Patajë mediumi i përgatitur vendosët në pajisjen e quajturë termostatë (fig.5.),dhe lihetë rreth 24
orë në temperaturë 37°C.
Fig.5.Termostatë

4. 4
Procedurae dytë
Mirën 2 ml bujonë nga epruveta e parë me pipetë dhe shtihenë në epruvetën e dyt.
Epruveta 1 Epruveta 2 Pipeta për marrjen e mostrës
Me shkopë steril/strisho mirën rreth 5 koloni individuale (enterobacteriaceae),dhe transferohen në
epruvetën e dytë me 2 ml HBI dhe përzihet.
Marria e bakterieve me strisho

5. 5
Pastajë mirën 0.1 ml nga epruveta e dytë dhe shtihën në mediumin(Mac conkey agar),dhe me shkopë
steril shpërndahet në mënyrë uniforme.
Shtrirja e mostrës në mediumë me shkopë metalik
Lihetë kapaku i pllakës së pjetërit paksa hapurë për rreth 5 minuta (jo më shumë se 15 minuta), për të
lejuarë ndonjë lagështi të tepërt që të apsorbohetë para se mu apliku disqet.
Në vazhdimë mirët pinca dhe sterilizohetë në flakë dhe lihetë paksa të ftohetë.
Sterilizimi i pincës në flakë

6. 6
Në vazhdimë me pincë meret disku nga antbiotiku(Penicillin,Ampicillinë,Polymixinë),dhe vendoset ne
mediumë(Mac conkey agar),dhe vendosja e tyre bëhetë me kujdesë dhe në momentinë e vendosjesë
shtypenë paksa me pincë .
Vendosja e disqeve me pincë LLoi disku
Vendosja e disqeve mundë të bëhetë edhe me Bombol me vrimë nxjerrëse të diskut.
Bombol me vrimë nxjerrëse të diskutë
Pastajë mediuminë e vendosimë në termostatë për 24 orë në temperaturë 37°C.

7. 7
Procedurae tretë →interpretipii rezultateve
Pasë 24orëve,me anë të vizorës metrike matetë diametri i zonës së inhibimit të rritjesë së bakterieve
për secilinë antibiotikë që është përdorurë.
Matja e zonës së inhibimitë
Kjo zonë e kthjellët është e njohurë si zona e inkibicionitë.
Interpretimi i rezultateve bëhetë sipasë udhëzimitë NCCLS.
Zona e diametrit(mm),interpretimi i tabelës
Antibiotic Resistent Intermediate Ndjeshëm
Tetracyclline 14 15-18 19
Ciprofloxacine 15 16-20 21
Enoxacin 14 15-17 18
Penicillin-Staphyloccoci 28 29
Tombromycine 12 13-14 15
Ceftriaxone 13 14-20 21
Kanomycin 13 14-17 18
Cilindomycin 14 15-20 21
Piperacillin-Gramneg. 17 18-20 21
AmpicillinGram-entericis 13 14-16 17
Saphylococci 28 29
Polymixyna 12
Ampicillina 
Penicilina 
Mentori :Dr.sc.Prof .Afrim Hamidi
Ass. Fatbardha Kurti E punoi: Mirsim Tovërlani