Описание методов прямой и непрямой иммунофлюореценции в диагностике кожных болезней.

1. Полный комплект иммунофлюоресцентных исследований при аутоиммунных
везикулобуллезных заболеваниях кожи
Валивач М.Н.
Везикулобуллезные болезни связаны с формированием щели либо внутри эпидермиса, либо
субэпидермально. Многие из этих нарушений связаны с выработкой аутоантител против
поверхностных антигенов кератиноцитов или против субэпидермальной базальной мембраны.
Эти антитела могут относиться к классам IgG или IgA. Их можно выявить как на гистологическом
срезе кожи больного (метод прямой иммунофлюоресценции), так и на ткани животных после
обработки ее сывороточными антителами пациента (непрямая иммунофлюореценция).
Рисунок 1. Принцип метода прямой
иммунофлюоресценции
Рисунок 2. Принцип метода непрямой
иммунофлюоресценции
Преимущество прямого метода в том, что биопсия позволяет кроме аутоантител исследовать
обычную гистологию, что дает важную диагностическую информацию. Слабая сторона этого
метода связана с тем, что аутоантитела быстро разрушаются системой комплемента и на момент
биопсии могут быть уже полностью разрушенными. В таких случаях полезно произвести также
окрашивание на компоненты системы комплемента. Мы исследуем наиболее стойкий фрагмент
четвертого компонента системы комплемента c4d.
Преимущество непрямого метода в простоте, так как исследуется венозная кровь больного.
Недостаток связан с тем, что при небольшом количестве аутоантител они все могут уже быть
связаны с кожными антигенами и в крови не обнаруживаться. Поэтому надежнее назначать оба
метода одновременно. Либо вначале исследовать кровь непрямым методом, а в случае
негативного результата назначить прямой метод. Для непрямого метода в качестве антигенного
субстрата мы используем ткань пищевода макаки. Эпителий пищевода по своей морфологии и
антигенному составу соответствует эпителию кожи. Кроме того, в этом антигеном субстрате
содержатся гладкие мышцы, что позволяет выявлять антиэндомизиальные антитела, что важно
для диагностики глютеновой энтеропатии и герпетиформного дерматита.

2. Таблица 1. Характеристики отдельных болезней
Болезнь Непрямая ИФ Прямая ИФ Гистология
Все типы пузырчатки Межклеточное
(сетчатое)
окрашивание
эпителия IgG
Межклеточное
(сетчатое)
окрашивание
эпителия IgG
Расщепление внутри
эпидермиса.
Акантолитические
клетки.
Все типы пемфигоида Линейное
окрашивание
базальной мембраны
IgG
Линейное
окрашивание
базальной мембраны
IgG
Расщепление под
эпидермисом.
Линейный IgA
дерматоз
Линейное
окрашивание
базальной мембраны
IgA
Линейное
окрашивание
базальной мембраны
IgA
Расщепление под
эпидермисом.
Герпетиформный
дерматит Дьюринга
Антитела против
эндомизия IgA или IgG
Отложение IgA в
верхушках сосочков
дермы
Расщепление под
эпидермисом.
.
Рисунок 3. Иллюстрации иммунофлюореценции при везикулобуллезных болезнях
Правила забора крови на иммунофлюоресцентное исследование
В направлении указать название теста «Непрямая иммунофлюоресценция. Кровь на
антитела к эндомизию IgA и IgG». Отметить в направлении: Зарегистрировать

3. антиэндомизиальные антитела IgA и IgG, антитела против базальной мембраны IgA и IgG,
межклеточные антитела IgG.
Кровь забирают в вакутейнер без наполнителя (красная крышка). Можно также
пользоваться вакутейнером с разделительным гелем (желтая крышка). Хранить и
транспортировать при температуре +2 - +8С. Исследование произвести не позднее 7 дней
с момента забора крови.
Правила биопсии кожи на гистологию и прямую иммунофлюоресценцию
Заполнить направление по форме № 014/е. В направлении указать «Биопсия кожи на
гистологию и иммунофлюоресценцию». В пункте «Рекомендуемые методы
исследования» отметить: Гистология с окрашиванием гематоксилин-эозином; Прямая
иммунофлюоресценция на отложение IgG; Прямая иммунофлюоресценция на отложение
IgA; Прямая иммунофлюоресценция на отложение с4d.
Далее нужно маркером нанести метку на кожный элемент, подлежащий биопсии, и
направить пациента к хирургу. Хирург произведет биопсию кожи и подкожной клетчатки
с помощью панча, поместит биоптат в контейнер с физиологическим раствором и
отправит в лабораторию. Хранить и транспортировать биоптат при температуре +2 - +8С.
В лабораторию биоптат должен поступить не позднее 24-х часов с момента забора.
Критически важно правильно выбрать элемент для биопсии. Если есть возможность, то
лучше согласовать этот вопрос с гистологом. Метку для биопсии наносят по краю
свежего пузыря или с участка покраснения, где пузырь еще не развился. Избегать отрыва
эпидермиса. Можно взять несколько биопсий и поместить все кусочки в один контейнер с
изотоническим раствором NaCl.
При подозрении на герпетифирмный дерматит пометить нормально выглядящую кожу в
3-х мм от пузырька. Лучше произвести несколько биопсий. Все кусочки поместить в один
контейнер с изотоническим раствором NaCl
Рисунок 4. Биопсия везикулобуллезных
элементов.
Рисунок 5. Биопсия при подозрении на
герпетиформный дерматит.

4. Со всеми вопросами можно обратиться по email: valivach@mail.ru