2. En estas diapositivas dedicadas a las técnicas histológicas se
describirán los procesos experimentales necesarios para
obtener secciones teñidas y listas para observar al microscopio
partiendo de tejidos vivos extraídos de un animal o de una
planta. Por tanto, dedicaremos espacios a la obtención,
fijación, inclusión, corte y tinción de los tejidos.
3. Denominamos
proceso
histológico a una
serie de métodos y
técnicas utilizados
para poder
estudiar las
características
morfológicas y
moleculares de los
tejidos.
4. El proceso histológico comienza con la obtención del tejido
objeto de estudio. En el caso de los tejidos vegetales
directamente se toman muestras de los distintos órganos
que componen el cuerpo de la planta, mientras que para los
tejidos animales podemos optar por dos opciones: coger una
porción del tejido u órgano y procesarla o procesar primero
el animal completo y luego extraer la muestra que nos
interese.
5. Todos los tejidos, cuando se
extraen de un organismo o bien
cuando el organismo en el que
están muere, sufren dos tipos de
procesos degradativos: autolisis y
putrefacción. Además, el
procesamiento histológico
posterior del tejido supone una
metodología que puede degradar
las estructuras tisulares.
Fijar un tejido es preservar sus
características morfológicas y
moleculares lo más parecidas
posibles a las que poseía en su
estado vivo.
Formaldehido, uno de los
fijadores mas utilizados en
el procesamiento de
muestras.
6. Una vez fijado el tejido tenemos que procesarlo para su observación con
el microscopio. Ello implica hacer secciones para teñirlas primero y
posteriormente observarlas.
La inclusión es el método más común de endurecer el tejido y consiste en
infiltrar la muestra con sustancias líquidas que tras un proceso de
polimerización o enfriamiento se solidifican, sin afectar a las
características del tejido. Con ello se consigue obtener cortes del orden
de μm a nm
7. La inclusión con
parafina es la técnica
mas utilizada
En la imagen se
observa un protocolo
de trabajo desde la
fijación hasta la
creación de un bloque
de parafina
8. En el microscopio óptico solo
es posible observar secciones
delgadas de tejido, es por
eso que es necesario cortar
nuestro tejido.
Esto se hace a través del
micrótomo, aparato
mecánico que permite cortar
secciones de 4um de grosor
Micrótomo rotatorio
de Minot, mas
utilizado para cortes
de parafina.
9. Los tejidos animales son en su gran
mayoría incoloros, excepto
aquellos que poseen algún tipo de
pigmento como la sangre o la
melanina de la epidermis.
Es por esto que se debió recurrir al
uso de colorantes naturales y
textiles para teñir los tejidos y
realizar una observación con mas
detalle.
Entre los colorantes mas usados se
encuentra la Hematoxilina –
Eosina, la que permite obtener una
coloración de las células de color
rosa y de los núcleos de color
violáceo.
Sección de un glomérulo de un riñón de
mamífero obtenida a partir de una inclusión
en parafina y teñido con hematoxilina-eosina.
Los núcleos aparecen de color violáceo
(hemtoxilina) y el citoplasma de color rosado
(eosina). Imagen inferior modificada.
11. El último paso de todo
proceso histológico es la
observación del
resultado producido por
la técnica realizada.
Esta, se realiza a través
del microscopio, aparato
que permite aumentar la
resolución de las
estructuras mas
diminutas
Partes de un microscopio
simple
12. Imagen obtenida a partir de una sección de íleon, la cual fue obtenida a través
de una inclusión en parafina y tinción de hematoxilina eosina. Imagen de la
derecha se encuentra modificada
13. La informacion e imágenes presentadas
fueron obtenida del sitio
http://webs.uvigo.es/mmegias/inicio.html, el
cual presenta una licencia de tipo:
