2. CONCEPTO DE MICROSCOPIA
• Conjunto de métodos empleados en las
investigaciones por medio del
microscopio, lo que nos permite la
observación de superficies en alta
resolución y obtener imágenes en 2D y
3D.
• Desde sus principios, la microscopía
óptica ha evolucionado con una única
finalidad: visualizar y concebir mejor los
detalles más íntimos de una imagen
biológica microscópica; por ejemplo, las
componentes principales de la unidad
fundamental de la vida: la célula.
3. La MICROSCOPÍA envuelve tres conceptos básicos: magnificación, resolución y
contraste.
Magnificación es el grado en que la imagen de un espécimen es agrandada.
La resolución es la habilidad de distinguir dos puntos como puntos separados, por
lo tanto, a mejor resolución más clara la imagen.
El contraste es la habilidad de ver un detalle en particular contra un trasfondo. Se
utilizan tintes para aumentar el contraste.
4. DEFINICIÓN DE MICROSCOPIO
• El Microscopio es una
herramienta que permite
observar objetos, que son
demasiado pequeños para ser
observados a simple vista, a
través de lentes, visores y rayos
de luz, que acercan o agrandan la
imagen en escalas convenientes
para su examinación y análisis.
6. • 1.-Microscopios Ópticos.
• Es el tipo más común y el primero que fue
inventado, que consta de un sistema de lentes de
gran aumento.
• Es una herramienta que permite observar
elementos que no pueden observarse o son
invisibles a simple vista, a través de lentes, visores
y rayos de luz, que acercan o agrandan la imagen
en escalas convenientes para su examinación y
análisis.
• En los microscopios ópticos, la preparación se
coloca en un portaobjetos de vidrio y se atraviesa
con rayos de luz: la resolución es del orden de 200
nanómetros. Permite observar una célula entera,
por ejemplo.
7. ¿Qué tipo de microscopio óptico elegir?
• Hay varios tipos de microscopios ópticos. La elección dependerá
esencialmente de la muestra que se desea observar. En primer lugar,
debe elegir entre un Microscopio convencional y un Microscopio
invertido.
8. Microscopios Convencionales
• La fuente de luz se coloca debajo de la muestra y, en consecuencia, la muestra se
observa desde arriba.
• El microscopio convencional se utiliza para la observación y el aumento de las
muestras en el portaobjetos.
9. Microscopios invertidos
• La fuente de luz se coloca encima de la muestra, mientras
que los objetivos están colocados debajo.
• El microscopio invertido se utiliza en la observación de
células cultivadas in vitro y permite inspeccionar objetos
gruesos o colocados en placas de Petri.
• Los microscopios pueden tener distintos tipos de oculares y
pueden monoculares y binoculares.
• La observación se efectúa con ambos ojos.
• Una cámara se fija en la parte superior del microscopio
para filmar y registrar las observaciones.
10. ¿Cómo elegir el objetivo de un microscopio óptico?
• La elección de un objetivo de calidad es esencial para obtener una imagen precisa de la
muestra observada, una imagen que proporcione una ampliación del objeto, pero que no
lo distorsione.
• Por tanto, la elección del objetivo depende en primer lugar del aumento deseado.
Existen tres tipos de aumento:
• aumento bajo (de 1x a 10x)
• aumento medio (de 10x a 40x)
• aumento elevado (por encima de 40x)
• Además de dar una imagen precisa de la muestra, el objetivo debe corregir los defectos
de los sistemas ópticos, también conocidos como aberraciones ópticas.
• Hay dos tipos de aberraciones ópticas: cromáticas y geométricas (o monocromáticas).
11. • Aberración cromática:
• La aberración cromática es un defecto de color que resulta de la descomposición de la luz
blanca en diferentes colores.
• Esta descomposición genera diferentes focos, que varían según la longitud de onda, y dan lugar
a una imagen borrosa.
• Los objetivos acromáticos compensan esta aberración y ofrecen una imagen nítida.
• Aberración geométrica:
• La aberración geométrica depende de los parámetros geométricos (ángulo de campo, posición
de la pupila) e influye en la capacidad del microscopio para distinguir los detalles.
• La imagen proporcionada es curva.
• Los objetivos plano acromáticos recuperan la planicidad de la imagen y compensan la
aberración cromática al mismo tiempo.
12. • 2.-Microscopios Electrónicos.
• El Microscopio Electrónico es el que usa
electrones para iluminar el objeto que se
desea observar y lo refleja en una
pantalla fluorescente, obteniéndose
imágenes más amplificadas que en un
microscopio convencional.
• En el caso de los microscopios
electrónicos, la preparación es
atravesada por un haz de electrones. El
aumento es mayor, emite imágenes en
blanco y negro. Los colores pueden ser
añadidos por Ordenador
posteriormente.
13. Hay dos tipos de microscopios electrónicos: de barrido y de transmisión.
• Microscopio de barrido
• Emite electrones que barren la superficie de la preparación.
• La resolución es muy alta, del orden de 0,4 a 20 nanómetros, lo que permite diferenciar dos
puntos a menos de un nanómetro de distancia.
• La imagen aparece en relieve, lo que permite estudiar la estructura y la forma de la muestra.
Este tipo de microscopio se utiliza principalmente en los institutos de investigación biológica
para determinar la forma de las células o de los órganos.
• Microscopio de transmisión
• Emite electrones que pasan a través de la preparación.
• La imagen obtenida ofrece los detalles más pequeños de la muestra.
• Este tipo de microscopio se utiliza en biología celular porque es la única forma de obtener
imágenes precisas del interior de las células.
14. • Microscopio digital:
• Está equipado con una pantalla LCD, que permite que varias personas puedan
observar la imagen captada de manera simultánea.
• Son muy cómodos, ya que la observación se efectúa a través de una pantalla.
• El nivel de aumento es alto, lo que permite observar en detalle la muestra.
• La imagen que ofrece este tipo de microscopio es de mayor resolución que la
ofrecida por los otros microscopios.
• Permite filmar o fotografiar la muestra durante la observación.
• Es muy caro, se utiliza principalmente en laboratorios.
15. • Diferencia entre ambos
• La principal diferencia entre estos dos tipos de microscopios radica en la forma en
que la muestra que se va a observar, llamada también preparación, es atravesada. Esto
es lo que determina la calidad de la imagen (aumento, color, blanco y negro).
• El Microscopio electrónico es un aparato súper potente que, a diferencia de
microscopio óptico, en vez de flujo luminoso utiliza un haz de electrones. Este tipo de
microscopios es mucho más potente que los microscopios ópticos convencionales —
su resolución es 1000-10000 veces más alta.
16. • ESTRUCTURA Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
COMPUESTO
• Un microscopio óptico compuesto, produce una imagen ampliada de una
muestra de algo— por medio de dos sistemas ópticos que actúan sucesivamente.
Se distingue de un microscopio simple que amplía el objeto mediante un solo
sistema de lentes. Se puede definir como microscopio compuesto cualquier
microscopio que utilice más de una lente para permitir observar una muestra de
forma aumentada.
• La parte mecánica del microscopio comprende el pie o base, el tubo, el revólver,
el asa o brazo, la platina y los tornillos: macrométrico y micrométrico. Estos
elementos sostienen la parte óptica y de iluminación; además, permiten los
desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.
17.
18. Sistema mecánico
• Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la
cual se montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante para
proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad al microscopio.
• Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del
microscopio que conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde
se coloca la muestra con el ocular por donde ésta se puede observar. Tanto las lentes
del objetivo como del ocular se encuentran también conectadas al brazo del
telescopio.
• Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su
posición vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos
tornillos para generar una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a
través del cual se ilumina la muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la
platina que permiten mantener la muestra en posición fija.
19. • Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha colocado
sobre la platina.
• Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra respecto el
objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es ajustado
posteriormente mediante el tornillo micrométrico
• Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso
de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el
desplazamiento vertical de la platina.
• Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada objetivo tiene
proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más adecuado a cada
aplicación. Habitualmente el revólver permite escoger entre tres o cuatro objetivos distintos.
• Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con los
objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta alineación entre los elementos
ópticos.
20. Sistema óptico
• Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia la
muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo que a su vez lo
desvía hacia la muestra. La posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un
microscopio de luz transmitida o de luz reflejada.
• Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz
provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son
divergentes. El condensador consiste en un seguido de lentes que cambian la dirección de estos
rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso convergentes.
• Diafragma: El diafragma es un pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la
muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. Regulando la luz incidente
es posible variar el contraste con el que se observa la muestra. El punto óptimo del diafragma
depende del tipo de muestra observada y de su transparencia.
21. • Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y que
producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal muy corta.
En los microscopios modernos distintos objetivos están montados en el revólver. Este permite
seleccionar el objetivo adecuado para el aumento deseado. El aumento del objetivo junto con su
apertura numérica suele estar escrito en su parte lateral.
• Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de imagen.
El ocular amplia la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el objetivo. En
general, el aumento aportado por el ocular es inferior al del objetivo. Es a través del ocular que
el usuario observa la muestra. En función del número de oculares se puede distinguir entre
microscopios monoculares, binoculares e incluso trinoculares. La combinación de objetivo y
ocular determina el aumento total del microscopio.
• Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para corregir la
dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los microscopios
binoculares, donde un prisma divide el haz de luz proveniente del objetivo para dirigirlo hacia
dos oculares distintos.
22.
23.
24. Notas importantes sobre el uso del microscopio
• 1. Debe sostener el microscopio con la base sobre la palma de la mano y sujetar el
brazo de este con su otra mano para llevarlo de un sitio a otro.
• 2. Los lentes, portaobjetos (laminillas) y cubreobjetos deben mantenerse siempre
limpios.
• 3. Los lentes deben limpiarse solamente con papel para lentes, el cual estará
disponible en el laboratorio.
• 4. Nunca coloque la laminilla sobre la platina cuando tenga el microscopio con el
objetivo de mayor aumento en posición de observar.
25. • 5. No permita que el lente toque el cubreobjetos.
• 6. Al hacer observaciones por el microscopio, mantenga ambos ojos abiertos.
• 7. El microscopio está diseñado con un sistema para focal, el cual permite que la
imagen ya enfocada en 4X, al pasar a los objetivos de 10X y 40X respectivamente, la imagen
esté en foco y solo requiere se ajuste la nitidez de la imagen usando el botón micrométrico. Por
esta razón debe enfocar la muestra primero con el objetivo de menor aumento (4X) y luego
pasar a observar con los objetivos de mayor aumento.
• 8. Al guardar el microscopio debe estar seguro de: limpiar los lentes con papel de
lente, remover la laminilla de la platina, subir el condensador, colocar el objetivo
de menor aumento (4X, el más corto) en posición de observar, bajar la platina,
cerrar el diafragma, apagar el interruptor de la luz y enrollar el cable.
