2. Downregulatie van groeifactor signaaltransductie What goes up must go down Paul van Bergen en Henegouwen

4. Rol voor EGFR ubiquitinering?

5. Sigismund et al 2005 MAAR: EGFR ubiquitinering alleen bij hoge EGF concentratie!

6. Eps15(R): multifunctioneel eiwit dat wordt ge-mono-ubiquitineerd I II III 1 300 600 897 Y850 * EH domeinen Bind clathrine Bind ubiquitine Van Delft 1997 IP : Eps15 I B : Eps15 I B : Ubiquitin 0 10 0 10 EGF ( min ) IP : Eps15

7. De UIM: ubiquitin interacting motif Eps15-mouse 872 LARLNQQEQEDLELAIALSKSEISEA Eps15R-mouse 883 LARLRRQEQEDLELAIALSKADMPA Epsin1-rat 180 QSSGEEELQLQLALAMSKEEADQP Epsin2-rat 213 QTSGEEELQLQLALAMSREVAEQE Epsin3-human 205 QTSGEESLQLQLALAMSREEAEKP Hrs-human 254 ETALQESEELQLALALSQSEAEEK Consensus ..ede.L..A...S..E.. Hofman & Falquet (2001)

8. UIMs binden ge-ubiquitineerde eiwitten 25 GST-UIM1+2 GST GST-UIM1 GST-UIM2 IB:  -ubiquitin Coomassie mock-transfected Cos-1 250 150 100 75 50 37 TL(5% input)

9. Eps15 binds to Ubi-EGFR

10. Een rol voor Eps15 in de CCV-route? Ub EGF EGF AP2 Clathrine P P P UIM EH Eps15 Epsin ENTH NPF c-Cbl SH2 Ub UbcH7 +

12. Bepaling ubiquitineringsplaatsen met behulp van MS Huang et al 2008

13. Geen EGFR ubiquitinering meer na 15KR Huang et al 2008

14. Geen effect op EGFR internalizatie! Huang et al 2008

16. Clathrine en Kinase afhankelijke EGFR internalizatie Time (min) EGF Internalized/Surface