biologia

1. Laboratorio
Materiales
 Microscopio
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Frasco lavador
 Agua
 Mechero Bunsen
 Alcohol Acetona
 Cronometro
 Cristal violeta
 Lugol
 Safranina
 Aceite de inmersión
Procedimiento
1. Tomar muestra de oro faringe y se observa células procariotas y células eucariotas
2. Cubrir la preparación (placa) Fijada con CRISTAL VIOLETA para Gram por un
minuto.
3. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua
4. Cubrir la preparación (placa) con LUGOL (Solución yodo/yoduro) para Gram por un
minuto.
5. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua
6. Decolorar la placa con ALCOHOL ACETONA solución decolorante para Gram por 15-
30 Segundos Hasta que la placa decolore totalmente.
7. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua
8. Cubrir la preparación (placa) con FUCSINA O SAFRANINA para Gram por un
minuto.
9. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua, dejar secar al aire
10. Examinar en el microscopio con lente de 10X y después con 100X
Resultados
 Coco Gram Positivas
 Coco Bacilos Gram negativos

2. Conclusión
Después de haber realizado todos los pasos pudimos observar en el microscopio Baterías
Coco Gram positivas y Bacilos Gram negativos, al centro de la célula epitelial.
Las Coco Gram positivas tomaron un color violeta, y los cocobacilos Gram negativos un
color rosado, los coco Gram positivas se caracterizan por que las células epiteliales están
tachadas por los cocobacilos.
Explicación del laboratorio
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram
positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales
están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las
células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. La mezcla
de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma
es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran,
mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gramnegativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células Gramnegativas son rojas, mientras que las Gram
positivas permanecen azules. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la
técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias

3. Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las
Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por
ejemplo, safranina).
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.
En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los
colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se
escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo, que se
deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol
hasta que éste no arrastre más colorante. Sigue a tal tratamiento una coloración de
contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta
inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un
decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer
tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de Gram positivos, y los que
pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gramnegativos. Basándonos pues,
en la reacción Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.
La facultad de las células para tomar la coloración Gram no es propia de toda sustancia
viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. Así vemos que las células
de plantas y animales superiores no conservan la primera coloración; los mohos se tiñen
con cierta irregularidad; los gránulos de micelios propenden retener el colorante. La
reacción de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el
pH del medio, y quizá por otras causas.
¿Porque durante la tinción de las células algunas se ponen moradas y otras rosada?
La pared celular es una cubierta rígida y porosa que confiere a la bacteria su forma
característica y protección física, incluso contra ruptura osmótica. La bacteria produce su
propia pared celular de peptidoglucano (“glucano” es otro nombre para polisacárido), que
consiste en cadenas paralelas de polisacárido unidas transversal y covalentemente a
péptidos. No todas las paredes celulares de bacterias son iguales.
La técnica de tinción de Gram consiste en la aplicación del colorante cristal violeta, cuya
reacción con la pared celular ha permitido tradicionalmente clasificar a las bacterias en
dos grupos:
1. Bacterias Gram positivas. Poseen una pared celular gruesa con numerosas capas de
peptidoglucano, las cuales retienen el colorante cristal violeta. Algunas de estas bacterias
se rodean además de una cápsula o cubierta gruesa y viscosa de polisacáridos, cuya

4. función puede ser adherencia, resistencia a la desecación, material de reserva o
patogenicidad, como en Mycobacterium tuberculosis.
2. Bacterias Gram negativas. Poseen una pared celular fina y una segunda membrana
lipídica denominada membrana externa, la cual no retiene el colorante cristal violeta,
como en Escherichia coli, de ahí que tome una tonalidad de color rosado.