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FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN
LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA
DE MICROORGANISMOS
PRACTICA # 6

Guía No 6
Pagina 1
Versión 1.1

PRACTICA # 6
PREPARACION DE VINO
1. INTRODUCCIÓN
Definición de Vino: del lat. Vinum. Licor alcohólico que se hace del zumo de las
uvas exprimido, y cocido naturalmente por la fermentación. Zumo de otras plantas
o frutos que se cuece y fermenta al modo del de las uvas.
El vino es por definición el producto obtenido de la fermentación alcohólica de la
uva. Cuando se emplea otro tipo de fruta, el producto siempre se denomina vino,
pero seguido del nombre de la fruta, por ejemplo: vino de naranja, vino de plátano,
etc.
Podemos definir la fermentación alcohólica como el proceso bioquímico por el cual
las levaduras transforman los azúcares del mosto en etanol y CO 2. Para que la
fermentación alcohólica tenga lugar, el mosto ha de hallarse en condiciones de
limitación de oxígeno. En condiciones de aerobiosis las levaduras se multiplican
abundantemente con un rendimiento en biomasa muy alto ya que se consigue 1 g
de levadura por cada 4 g de azúcares consumidos. En anaerobiosis las levaduras
realizan la fermentación, es decir degradan los azúcares de forma incompleta
generando etanol, CO2 y energía. En estas condiciones el rendimiento en biomasa
es de tan sólo 1 g de levadura por cada 100 g de azúcares consumidos. En
investigaciones recientes sobre el análisis de la actividad de levadura y la
utilización de sustratos de jugos de frutas tropicales como la piña, mango y
papaya, se encontró un alto grado de adaptabilidad de las levaduras en estos
sustratos.
Las frutas tropicales hoy en día son consideradas de mayor importancia en
nuestro país. Los indicadores señalan que lo que va en la década la superficie y
producción de frutas y sobre todo las tropicales han ido creciendo.
Hoy en día se pueden encontrar en el mercado productos derivados de estas
frutas como por ejemplo: jugos, jaleas, mermeladas, concentrados, etc. Sin
embargo a pesar de este crecimiento y demanda de nuevos productos aun es
deficiente y necesario tener otras alternativas de comercialización para estos
frutos.
Una alternativa poca o nulamente explotada es la de elaborar vinos a partir de
frutas; generando una mayor oferta de trabajo para los campesinos y agricultores
que se ven obligados a abaratar su mano de obra debido a la falta de preparación
de la gente, pudiendo comercializar este producto a nivel nacional generando
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DE MICROORGANISMOS
PRACTICA # 6

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mayores ingresos para el productor y una nueva forma de degustación al
consumidor.
2. OBJETIVO
Aplicar las técnicas biotecnológicas de la transformación de azucares en alcohol
para obtener un producto industrial de valor agregado.

3. CONSULTAS PRELIMINARES
- En la preparación de vinos en ocasiones se sulfita el mosto. ¿Cuál es el papel
del dióxido de azufre en el proceso de elaboración del vino?
- ¿Cómo actúan los clarificantes? Aparte de la bentonita menciona tres sustancias
usadas como clarificantes.
- ¿Cómo podemos obtener un vinagre a partir de un vino?
- ¿Cuál es la relación entre los °Brix y los °Baume? ¿Cuál es el factor de
correlación (fundaméntalo)?
- ¿Cuáles son los análisis de calidad que se deben realizar a los vinos?
4. MATERIALES Y REACTIVOS
4.1 Material que debe llevar cada estudiante
 Olla de capacidad de 5 Litros
 Embudo (limpio y estéril)
 1.5 Metros de manguera de
nivel.
 Botella PET desechable
 1 vaso desechable
 Tapa
 Jeringa 20 cc







Bata de laboratorio limpia
Guantes
Tapabocas
Cofia
Fruta – Agua y Azúcar según
indicaciones(paquetes
de
500gr).
 Levadura granulada (15 gr)

4.2 Material suministrado por el laboratorio
 Refractómetro de mano
 Potenciómetro
 Estufa
 Balanza analítica
 Mechero bunsen 2 por grupo
4.3 Reactivos
 Acido Tartárico
 Bicarbonato de Sodio
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5. PROCEDIMIENTO

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5.1 Descripción del Procedimiento General
Recepción: Consiste en cuantificar la fruta que entrará a proceso. Esta operación
debe hacerse utilizando recipientes adecuados y balanzas calibradas y limpias.
Lavado: Se hace para eliminar bacterias superficiales, residuos de insecticidas y
suciedad adherida a la fruta. Se debe utilizar agua clorada.
Selección: Se elimina la fruta que no tenga el grado de madurez adecuado o
presente golpes o magulladuras.
Preparación de la fruta: La eliminación de la cáscara permite ablandar más
rápidamente la fruta, así como obtener un producto de mejor calidad. (Esta
operación depende de la fruta de la cual se quiera hacer vino), puede realizarse
manual o mecánicamente. Si se hace mecánicamente, existen en el mercado una
variedad de modelos de peladoras o bien construirse de forma casera. La
preparación puede incluir un escaldado que permita por una parte desactivar la
acción enzimática y por otra ablandar los tejidos de la fruta para facilitar la
extracción de la pulpa; así como la eliminación de semillas en el caso de que sea
necesario.
Triturado y extracción de jugo: Se hace por medio de un despulpador o bien
licuando la fruta (licuadora industrial) si es necesario puede adicionarse cierta
cantidad de agua a fin de facilitar el proceso. En algunas frutas la extracción del
jugo: se hace con una prensa manual o hidráulica. O bien la pulpa obtenida en la
fase anterior, se hace pasar por un colador, para obtener el jugo.
Filtrado: Se hace con el objetivo de eliminar trozos de pulpa de fruta, cascaras o
semillas que pudieran ser perjudiciales el proceso posterior.
Análisis del mosto: Para conocer la composición del jugo o mosto que se obtiene
de un determinado lote, se extraerá una muestra del volumen total de mosto.
Determinación del grado de azúcar (Sólidos solubles): Con refractómetro
Expresados en °Brix
pH: Potenciométricamente.
Estandarización del mosto: Para obtener un vino de buena calidad el mosto debe
cumplir con ciertos requisitos en cuanto a grados brix, y pH. Si el mosto obtenido
no cumple con los parámetros es aceptado que se adicione azucares (sacarosa y
fructosa), acido cítrico o tartárico y/o bicarbonatos.
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Corrección de azúcar o Chaptalización: La adición de azúcar al mosto se llama
chaptalización. Un mosto con 10°Brix contiene aproximadamente 10% de azúcar,
considerando que dos grados Brix produce aproximadamente 1°GL, se deben
hacer las correcciones necesarias para lograr alcanzar la cantidad deseada de
alcohol en el vino.
Corrección de la acidez: La medición del pH en el vino tiene un marcado interés.
Este dato es importante por su efecto sobre, microorganismos, matiz del color,
sabor, potencial redox, relación entre el dióxido de azufre libre y combinado. El pH
reportado para una buena iniciación de los vinos es de 3.4 a 3.5 como máximo.
Para aumentar la acidez de los vinos, se usan principalmente el ácido tartárico y el
cítrico. En condiciones iguales, el ácido cítrico tiene un poder ácido superior al
tartárico y su poder disociante es mayor. La disminución de la acidez se efectuará
adicionando carbonato de calcio o de sodio el cual disminuirá la acidez.
Fermentación: La inoculación deberá realizarse en asepsia utilizando levaduras de
panificación liofilizadas Saccharomyces cerevisiae a razón de 1 g/L de mosto. El
mosto sufre una fermentación alcohólica, la cual transforma los azúcares en
alcohol y anhídrido carbónico, por acción de las levaduras. En este paso se coloca
una trampa de aire, para evitar su oxidación a vinagre. La mezcla se deja
fermentar, entre 3 y 7 días como mínimo, a una temperatura de 30°C. Como
criterio para detener la fermentación se observará la no producción de CO2, (no
observación de burbujeo en la trampa) y se confirmará por la obtención de tres
lecturas iguales a 10 o menos °Brix. Durante la fermentación se monitorea los
°Brix y el pH.
Trasiego y filtrado: El Consiste en separar la parte superior del fermento, mediante
succión. Durante la fermentación existe una separación de fases, quedando el
vino en la parte superior y residuos de fruta o levadura en la parte inferior. En la
filtración se hace pasar la mezcla fermentada por una tela fina o colador,
previamente esterilizado, para eliminar la levadura y la pulpa residuales.
Clarificación: Los agentes clarificantes “fining agents” se utilizan para alcanzar
claridad y para mejorar color, sabor y estabilidad física. La bentonita es un material
arcilloso de origen volcánico, consiste en silicato de aluminio hidratado que es un
complejo con componentes catiónicos cambiables lo que hace que su modo de
acción sea electrostático. La bentonita de calcio y del sodio son dos formas que
están comercialmente disponibles para la clarificación del vino. La mayoría de las
bentonitas se deben hidratar para luego ser adicionadas lentamente y evitar su
congregación. La bentonita se utiliza en una proporción del 0.1%. Una vez
finalizada la fermentación, el vino debe ser sometido a un proceso de clarificación
usando bentonita grado alimento esta debe ser preparada en agua caliente en
proporción del 5% agitando durante aproximadamente 2 horas; adicionar
directamente al contenedor y agitar por espacio de 10 minutos a fin de asegurar
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una mezcla homogénea del contacto bentonita-mosto. Pasteurizar a 65 °C durante
20 minutos. Dejar reposar durante 7 días.
Envasado: Luego del clarificado es necesario realizar un segundo trasiego;
fraccionando se los productos en envases de vidrio aproximadamente de 750 ml.
Los envases deben esterilizarse sumergiéndolos en agua caliente (95 °C) durante
10 minutos. El producto así obtenido se llamó «vino joven». En esta etapa se
realizará un nuevo muestreo para los análisis anteriormente citados. Es
conveniente realizar una nueva pasteurización después del envasado a 65°C
durante 20 minutos.
Maduración: Después del envasado, se procede al almacenamiento a
temperaturas cercanas a los 25 °C. A esta etapa se le denomina «maduración o
envejecimiento de los vinos».

6. Bibliografía

Ferreyra, María M. y Schvab, María del C. Fermentación alcohólica de jugo de
naranja con S. cerevisiae. Facultad de Ciencias de la Alimentación, Concordia
(Argentina). Noviembre de 2009.
Olivero Verbel Rafael Enrique. Optimización del proceso de clarificación en la
elaboración de vino de naranja criolla (citrus sinensis). Universidad de Puerto
Rico recinto universitario de Mayagüez 2006.
Pazmiño Arteaga Andrés. Proyecto de elaboración artesanal y
comercialización del vino de naranja san marcos en la ciudad de Guayaquil.
Escuela Superior Politécnica del Litoral (ESPOL). Guayaquil Ecuador.
Roque A. Hours y María M.Ferreyra. Caracterización fisicoquímica y
microbiológica de jugos de naranja destinados a vinificación. Facultad de
Ciencias de la Alimentación, Concordia (Argentina). Noviembre de 2005.
Verapinto Cruz María del Carmen. Elaboración de destilado de pera y
derivados Programa Regional Sur. Unidad Operativa Territorial Caravelí, 2009.

El informe de este laboratorio es un video de máximo 8 minutos en el que
describa todo el procedimiento.
Adaptado de Guía para la elaboración de vinos de I.BQ. César David Lara
Colli
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Adaptadopor:
Adriana Marcela Peña Quina
Bióloga – Docente programa
Ecología

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Revisado por:
Arnold Arias
de Biólogo – Coordinador de laboratorio

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  • 1. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Guía No 6 Pagina 1 Versión 1.1 PRACTICA # 6 PREPARACION DE VINO 1. INTRODUCCIÓN Definición de Vino: del lat. Vinum. Licor alcohólico que se hace del zumo de las uvas exprimido, y cocido naturalmente por la fermentación. Zumo de otras plantas o frutos que se cuece y fermenta al modo del de las uvas. El vino es por definición el producto obtenido de la fermentación alcohólica de la uva. Cuando se emplea otro tipo de fruta, el producto siempre se denomina vino, pero seguido del nombre de la fruta, por ejemplo: vino de naranja, vino de plátano, etc. Podemos definir la fermentación alcohólica como el proceso bioquímico por el cual las levaduras transforman los azúcares del mosto en etanol y CO 2. Para que la fermentación alcohólica tenga lugar, el mosto ha de hallarse en condiciones de limitación de oxígeno. En condiciones de aerobiosis las levaduras se multiplican abundantemente con un rendimiento en biomasa muy alto ya que se consigue 1 g de levadura por cada 4 g de azúcares consumidos. En anaerobiosis las levaduras realizan la fermentación, es decir degradan los azúcares de forma incompleta generando etanol, CO2 y energía. En estas condiciones el rendimiento en biomasa es de tan sólo 1 g de levadura por cada 100 g de azúcares consumidos. En investigaciones recientes sobre el análisis de la actividad de levadura y la utilización de sustratos de jugos de frutas tropicales como la piña, mango y papaya, se encontró un alto grado de adaptabilidad de las levaduras en estos sustratos. Las frutas tropicales hoy en día son consideradas de mayor importancia en nuestro país. Los indicadores señalan que lo que va en la década la superficie y producción de frutas y sobre todo las tropicales han ido creciendo. Hoy en día se pueden encontrar en el mercado productos derivados de estas frutas como por ejemplo: jugos, jaleas, mermeladas, concentrados, etc. Sin embargo a pesar de este crecimiento y demanda de nuevos productos aun es deficiente y necesario tener otras alternativas de comercialización para estos frutos. Una alternativa poca o nulamente explotada es la de elaborar vinos a partir de frutas; generando una mayor oferta de trabajo para los campesinos y agricultores que se ven obligados a abaratar su mano de obra debido a la falta de preparación de la gente, pudiendo comercializar este producto a nivel nacional generando
  • 2. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Guía No 6 Pagina 2 Versión 1.1 mayores ingresos para el productor y una nueva forma de degustación al consumidor. 2. OBJETIVO Aplicar las técnicas biotecnológicas de la transformación de azucares en alcohol para obtener un producto industrial de valor agregado. 3. CONSULTAS PRELIMINARES - En la preparación de vinos en ocasiones se sulfita el mosto. ¿Cuál es el papel del dióxido de azufre en el proceso de elaboración del vino? - ¿Cómo actúan los clarificantes? Aparte de la bentonita menciona tres sustancias usadas como clarificantes. - ¿Cómo podemos obtener un vinagre a partir de un vino? - ¿Cuál es la relación entre los °Brix y los °Baume? ¿Cuál es el factor de correlación (fundaméntalo)? - ¿Cuáles son los análisis de calidad que se deben realizar a los vinos? 4. MATERIALES Y REACTIVOS 4.1 Material que debe llevar cada estudiante  Olla de capacidad de 5 Litros  Embudo (limpio y estéril)  1.5 Metros de manguera de nivel.  Botella PET desechable  1 vaso desechable  Tapa  Jeringa 20 cc      Bata de laboratorio limpia Guantes Tapabocas Cofia Fruta – Agua y Azúcar según indicaciones(paquetes de 500gr).  Levadura granulada (15 gr) 4.2 Material suministrado por el laboratorio  Refractómetro de mano  Potenciómetro  Estufa  Balanza analítica  Mechero bunsen 2 por grupo 4.3 Reactivos  Acido Tartárico  Bicarbonato de Sodio
  • 3. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 5. PROCEDIMIENTO Guía No 6 Pagina 3 Versión 1.1
  • 4. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Guía No 6 Pagina 4 Versión 1.1 5.1 Descripción del Procedimiento General Recepción: Consiste en cuantificar la fruta que entrará a proceso. Esta operación debe hacerse utilizando recipientes adecuados y balanzas calibradas y limpias. Lavado: Se hace para eliminar bacterias superficiales, residuos de insecticidas y suciedad adherida a la fruta. Se debe utilizar agua clorada. Selección: Se elimina la fruta que no tenga el grado de madurez adecuado o presente golpes o magulladuras. Preparación de la fruta: La eliminación de la cáscara permite ablandar más rápidamente la fruta, así como obtener un producto de mejor calidad. (Esta operación depende de la fruta de la cual se quiera hacer vino), puede realizarse manual o mecánicamente. Si se hace mecánicamente, existen en el mercado una variedad de modelos de peladoras o bien construirse de forma casera. La preparación puede incluir un escaldado que permita por una parte desactivar la acción enzimática y por otra ablandar los tejidos de la fruta para facilitar la extracción de la pulpa; así como la eliminación de semillas en el caso de que sea necesario. Triturado y extracción de jugo: Se hace por medio de un despulpador o bien licuando la fruta (licuadora industrial) si es necesario puede adicionarse cierta cantidad de agua a fin de facilitar el proceso. En algunas frutas la extracción del jugo: se hace con una prensa manual o hidráulica. O bien la pulpa obtenida en la fase anterior, se hace pasar por un colador, para obtener el jugo. Filtrado: Se hace con el objetivo de eliminar trozos de pulpa de fruta, cascaras o semillas que pudieran ser perjudiciales el proceso posterior. Análisis del mosto: Para conocer la composición del jugo o mosto que se obtiene de un determinado lote, se extraerá una muestra del volumen total de mosto. Determinación del grado de azúcar (Sólidos solubles): Con refractómetro Expresados en °Brix pH: Potenciométricamente. Estandarización del mosto: Para obtener un vino de buena calidad el mosto debe cumplir con ciertos requisitos en cuanto a grados brix, y pH. Si el mosto obtenido no cumple con los parámetros es aceptado que se adicione azucares (sacarosa y fructosa), acido cítrico o tartárico y/o bicarbonatos.
  • 5. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Guía No 6 Pagina 5 Versión 1.1 Corrección de azúcar o Chaptalización: La adición de azúcar al mosto se llama chaptalización. Un mosto con 10°Brix contiene aproximadamente 10% de azúcar, considerando que dos grados Brix produce aproximadamente 1°GL, se deben hacer las correcciones necesarias para lograr alcanzar la cantidad deseada de alcohol en el vino. Corrección de la acidez: La medición del pH en el vino tiene un marcado interés. Este dato es importante por su efecto sobre, microorganismos, matiz del color, sabor, potencial redox, relación entre el dióxido de azufre libre y combinado. El pH reportado para una buena iniciación de los vinos es de 3.4 a 3.5 como máximo. Para aumentar la acidez de los vinos, se usan principalmente el ácido tartárico y el cítrico. En condiciones iguales, el ácido cítrico tiene un poder ácido superior al tartárico y su poder disociante es mayor. La disminución de la acidez se efectuará adicionando carbonato de calcio o de sodio el cual disminuirá la acidez. Fermentación: La inoculación deberá realizarse en asepsia utilizando levaduras de panificación liofilizadas Saccharomyces cerevisiae a razón de 1 g/L de mosto. El mosto sufre una fermentación alcohólica, la cual transforma los azúcares en alcohol y anhídrido carbónico, por acción de las levaduras. En este paso se coloca una trampa de aire, para evitar su oxidación a vinagre. La mezcla se deja fermentar, entre 3 y 7 días como mínimo, a una temperatura de 30°C. Como criterio para detener la fermentación se observará la no producción de CO2, (no observación de burbujeo en la trampa) y se confirmará por la obtención de tres lecturas iguales a 10 o menos °Brix. Durante la fermentación se monitorea los °Brix y el pH. Trasiego y filtrado: El Consiste en separar la parte superior del fermento, mediante succión. Durante la fermentación existe una separación de fases, quedando el vino en la parte superior y residuos de fruta o levadura en la parte inferior. En la filtración se hace pasar la mezcla fermentada por una tela fina o colador, previamente esterilizado, para eliminar la levadura y la pulpa residuales. Clarificación: Los agentes clarificantes “fining agents” se utilizan para alcanzar claridad y para mejorar color, sabor y estabilidad física. La bentonita es un material arcilloso de origen volcánico, consiste en silicato de aluminio hidratado que es un complejo con componentes catiónicos cambiables lo que hace que su modo de acción sea electrostático. La bentonita de calcio y del sodio son dos formas que están comercialmente disponibles para la clarificación del vino. La mayoría de las bentonitas se deben hidratar para luego ser adicionadas lentamente y evitar su congregación. La bentonita se utiliza en una proporción del 0.1%. Una vez finalizada la fermentación, el vino debe ser sometido a un proceso de clarificación usando bentonita grado alimento esta debe ser preparada en agua caliente en proporción del 5% agitando durante aproximadamente 2 horas; adicionar directamente al contenedor y agitar por espacio de 10 minutos a fin de asegurar
  • 6. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Guía No 6 Pagina 6 Versión 1.1 una mezcla homogénea del contacto bentonita-mosto. Pasteurizar a 65 °C durante 20 minutos. Dejar reposar durante 7 días. Envasado: Luego del clarificado es necesario realizar un segundo trasiego; fraccionando se los productos en envases de vidrio aproximadamente de 750 ml. Los envases deben esterilizarse sumergiéndolos en agua caliente (95 °C) durante 10 minutos. El producto así obtenido se llamó «vino joven». En esta etapa se realizará un nuevo muestreo para los análisis anteriormente citados. Es conveniente realizar una nueva pasteurización después del envasado a 65°C durante 20 minutos. Maduración: Después del envasado, se procede al almacenamiento a temperaturas cercanas a los 25 °C. A esta etapa se le denomina «maduración o envejecimiento de los vinos». 6. Bibliografía Ferreyra, María M. y Schvab, María del C. Fermentación alcohólica de jugo de naranja con S. cerevisiae. Facultad de Ciencias de la Alimentación, Concordia (Argentina). Noviembre de 2009. Olivero Verbel Rafael Enrique. Optimización del proceso de clarificación en la elaboración de vino de naranja criolla (citrus sinensis). Universidad de Puerto Rico recinto universitario de Mayagüez 2006. Pazmiño Arteaga Andrés. Proyecto de elaboración artesanal y comercialización del vino de naranja san marcos en la ciudad de Guayaquil. Escuela Superior Politécnica del Litoral (ESPOL). Guayaquil Ecuador. Roque A. Hours y María M.Ferreyra. Caracterización fisicoquímica y microbiológica de jugos de naranja destinados a vinificación. Facultad de Ciencias de la Alimentación, Concordia (Argentina). Noviembre de 2005. Verapinto Cruz María del Carmen. Elaboración de destilado de pera y derivados Programa Regional Sur. Unidad Operativa Territorial Caravelí, 2009. El informe de este laboratorio es un video de máximo 8 minutos en el que describa todo el procedimiento. Adaptado de Guía para la elaboración de vinos de I.BQ. César David Lara Colli
  • 7. FUNDACION UNIVERSITARIA DE POPAYAN LABORATORIO DE SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROORGANISMOS PRACTICA # 6 Adaptadopor: Adriana Marcela Peña Quina Bióloga – Docente programa Ecología Guía No 6 Pagina 7 Versión 1.1 Revisado por: Arnold Arias de Biólogo – Coordinador de laboratorio