_PRACTICA N. 03 - MANEJO DEL TERMOCICLADOR - T100 PCR Thermal Cycler - BIORAD.pdf

biotecnología

pág. 1
pág. 2
ÍNDICE
1.INTRODUCCIÓN 3
2.OBJETIVOS 3
2.1.OBJETIVO GENERAL 3
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 3
3.MARCO TEÓRICO 4
3.1. EL TERMOCICLADOR PCR 4
3.2. CARACTERÍSTICAS 4
3.3. APLICACIONES Y USOS 5
3.4. MANTENIMIENTO PREVENTIVO 6
4. MÉTODO 7
4.1. MATERIALES 7
5. CONCLUSIONES 11
6. BIBLIOGRAFÍA 11
pág. 3
1.INTRODUCCIÓN
El termociclador T100 PCR, fabricado por Bio-Rad, es un instrumento
versátil y confiable utilizado en laboratorios de biología molecular para diversas
aplicaciones, particularmente en el campo de la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR). Este equipo avanzado desempeña un papel crucial en la amplificación de
secuencias de ADN específicas, lo que permite a los investigadores estudiar material
genético, identificar patógenos y realizar una amplia gama de análisis genéticos.
La PCR es una técnica poderosa que permite a los científicos amplificar y
replicar secuencias de ADN específicas en un entorno de laboratorio controlado. Ha
revolucionado el campo de la biología molecular al permitir la amplificación rápida
y precisa del ADN, incluso a partir de muestras diminutas. La técnica implica una
serie de ciclos de temperatura que facilitan la desnaturalización, el recocido y la
extensión de las cadenas de ADN, lo que da como resultado la amplificación
exponencial de la región de ADN objetivo.
2.OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
● Comprender el manejo apropiado del termociclador T100 pcr thermal cycler
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Conocer la configuración del programa PCR de acuerdo al estudio a realizar o
experimentos, los cuales tengan ajustes en la temperatura, tiempo y la cantidad
de ciclos.
● Comprender y seguir los protocolos de seguridad y bioseguridad al utilizar el
termociclador T100 PCR.
pág. 4
3.MARCO TEÓRICO
3.1. EL TERMOCICLADOR PCR
3.2. CARACTERÍSTICAS
El termociclador T100 PCR está diseñado para proporcionar un control
preciso de la temperatura y una distribución uniforme del calor en todos los tubos
o placas de muestra. Esto garantiza condiciones de reacción óptimas para la PCR,
lo que conduce a resultados fiables y reproducibles. El instrumento ofrece una
interfaz fácil de usar que permite a los investigadores programar y monitorear
fácilmente sus experimentos de PCR.
Algunas características clave del termociclador T100 PCR incluyen:
1. Control de temperatura: el termociclador de PCR T100 ofrece un control de
temperatura preciso, lo que permite a los investigadores establecer y mantener
la temperatura deseada para cada paso del proceso de PCR. Esto garantiza una
desnaturalización, un recocido y una extensión precisos de las cadenas de
ADN.
2. Capacidad de muestra: el instrumento está disponible en diferentes formatos y
se adapta a una variedad de tamaños y tipos de muestras. Puede acomodar
tubos individuales, tiras de tubos o placas de múltiples pocillos, lo que brinda
flexibilidad para diversas necesidades experimentales.
3. Ciclos programables: el termociclador T100 PCR permite a los investigadores
programar y personalizar los parámetros de ciclo, incluido el número de
ciclos, las velocidades de rampa y los tiempos de espera. Esta flexibilidad
permite la optimización de las condiciones de la PCR para diferentes objetivos
de ADN y requisitos experimentales.
pág. 5
4. Interfaz intuitiva: el instrumento cuenta con una interfaz fácil de usar, lo que
facilita la navegación y la programación de experimentos de PCR. La pantalla
clara y los controles intuitivos simplifican la configuración y el seguimiento
de las reacciones de PCR.
5. Confiabilidad y reproducibilidad: el termociclador T100 PCR es conocido por
su confiabilidad y reproducibilidad, lo que garantiza resultados consistentes en
todos los experimentos. Esto es crucial para obtener datos precisos y
significativos en la investigación de biología molecular.
3.3. APLICACIONES Y USOS
El termociclador T100 PCR encuentra aplicaciones en diversos campos de
investigación, entre ellos:
● Análisis genético: el instrumento se utiliza ampliamente para la
amplificación del ADN en análisis genéticos, como genotipado, análisis de
expresión genética y secuenciación de ADN.
● Detección de patógenos: los métodos basados en PCR, realizados con el
termociclador de PCR T100, se emplean para la detección e identificación
de patógenos, incluidos virus, bacterias y hongos.
● Ciencias forenses: El termociclador T100 PCR desempeña un papel vital
en el análisis forense de ADN, permitiendo la amplificación del ADN de
muestras de la escena del crimen para su identificación y elaboración de
perfiles.
● Biotecnología e investigación biomédica: el termociclador T100 PCR se
utiliza en diversas aplicaciones de investigación biotecnológica y
biomédica, incluido el desarrollo de pruebas de diagnóstico, descubrimiento
de fármacos e ingeniería genética.
pág. 6
3.4. MANTENIMIENTO PREVENTIVO
El termociclador T100 PCR de Bio-Rad requiere un mantenimiento regular
para garantizar su rendimiento óptimo y su longevidad. A continuación, se
presentan algunas pautas generales para el mantenimiento del termociclador T100
PCR:
● Limpieza: Limpie periódicamente las superficies exteriores del
instrumento con un detergente suave y un paño suave. Evite el uso de
limpiadores abrasivos o disolventes que puedan dañar el instrumento.
Limpie el bloque de muestra y la tapa con un desinfectante adecuado para
evitar la contaminación entre experimentos.
● Mantenimiento preventivo: Siga las pautas del fabricante para el
mantenimiento preventivo. Esto puede incluir la calibración periódica de
sensores de temperatura, inspección de conexiones eléctricas y lubricación
de piezas móviles si es necesario. Consulte el manual del usuario o
comuníquese con el fabricante para obtener instrucciones de mantenimiento
específicas.
● Calibración de temperatura: verifique periódicamente la precisión de los
ajustes de temperatura utilizando un termómetro calibrado o una sonda de
temperatura. Si encuentra alguna discrepancia, consulte al fabricante o a un
técnico de servicio calificado para realizar la calibración o el ajuste.
● Filtros de aire: revise y limpie los filtros de aire con regularidad para
garantizar una ventilación adecuada y evitar la acumulación de polvo y
escombros. Siga las instrucciones del fabricante para limpiar o reemplazar
el filtro.
pág. 7
● Fuente de alimentación: Asegúrese de que el instrumento esté conectado a
una fuente de alimentación estable y confiable. Evite fluctuaciones o
sobretensiones de energía que puedan afectar el rendimiento del
instrumento.
● Capacitación del usuario: brinde capacitación adecuada a los usuarios del
termociclador T100 PCR para garantizar que comprendan los
procedimientos operativos correctos y los requisitos de mantenimiento. Esto
ayudará a evitar cualquier mal manejo o daño al instrumento.
Es importante tener en cuenta que estas son pautas generales y los requisitos de
mantenimiento específicos pueden variar según el modelo y el fabricante.
Consulte siempre el manual del usuario o comuníquese con el fabricante
para obtener instrucciones detalladas sobre el mantenimiento del
termociclador T100 PCR.
4. MÉTODO
4.1. MATERIALES
Termociclador T100 PCR
pág. 8
Pipeta multicanal
Tubo individualizado
Placa de tubo individualizado
pág. 9
4.2. PROGRAMACIÓN DEL TERMOCICLADOR
● Conectamos el termociclador y esperamos a que encienda nos aseguraremos
que la tapa del termociclador esté en su lugar asegurada.
● Configuramos nuestro termociclador aplicando nuevo protocolo y
estableceremos nuevos termo ciclos con los que se va a manejar la muestra,
para esta ocasión nos guiamos de un artículo científico que indica.
Fuente: Elaboración propia
pág. 10
● Preparamos la muestra de ADN Y ARN que serán amplificadas en la PCR,
siguiendo las buenas prácticas de manipulación genética, pero en esta ocasión
nosotros no utilizamos ninguna muestra.
Fuente Elaboración propia
● Cierra cuidadosamente la tapa del termociclador. Presiona el botón para iniciar
el ciclo. El termociclador comenzará el proceso de PCR con los parámetros y
ciclos predefinidos.
Fuente: Elaboración propia.
pág. 11
● Una vez que se complete el ciclo de amplificación, el termociclador emitirá
una señal de finalización y mostrará la finalización del proceso en la pantalla.
Abre la tapa del termociclador y retira la placa de PCR con las muestras.
5. CONCLUSIONES
● En conclusión, el termociclador T100 PCR de Bio-Rad es un instrumento confiable y
versátil que se ha convertido en una herramienta indispensable en los laboratorios de
biología molecular. Su control preciso de la temperatura, su interfaz fácil de usar y su
flexibilidad lo hacen adecuado para una amplia gama de aplicaciones de PCR. Los
investigadores confían en este instrumento para amplificar el ADN, estudiar material
genético y avanzar en el conocimiento científico en diversos campos.
6. BIBLIOGRAFÍA
● Martínez-Vega, RA, Peña-López, BO, & Rincón-Orozco, B. (2023). Estandarización de PCR
en tiempo real para la detección y medición de los oncogenes E7 de seis Virus del Papiloma
Humano de Alto Riesgo. Salud UIS , 55 .
● T100 Thermal Cycler. (s. f.). Bio-Rad Laboratories. https://www.bio-rad.com/es-
pe/product/t100-thermal-cycler?ID=LGTWGIE8Z.

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  • 2. pág. 2 ÍNDICE 1.INTRODUCCIÓN 3 2.OBJETIVOS 3 2.1.OBJETIVO GENERAL 3 2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 3 3.MARCO TEÓRICO 4 3.1. EL TERMOCICLADOR PCR 4 3.2. CARACTERÍSTICAS 4 3.3. APLICACIONES Y USOS 5 3.4. MANTENIMIENTO PREVENTIVO 6 4. MÉTODO 7 4.1. MATERIALES 7 5. CONCLUSIONES 11 6. BIBLIOGRAFÍA 11
  • 3. pág. 3 1.INTRODUCCIÓN El termociclador T100 PCR, fabricado por Bio-Rad, es un instrumento versátil y confiable utilizado en laboratorios de biología molecular para diversas aplicaciones, particularmente en el campo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Este equipo avanzado desempeña un papel crucial en la amplificación de secuencias de ADN específicas, lo que permite a los investigadores estudiar material genético, identificar patógenos y realizar una amplia gama de análisis genéticos. La PCR es una técnica poderosa que permite a los científicos amplificar y replicar secuencias de ADN específicas en un entorno de laboratorio controlado. Ha revolucionado el campo de la biología molecular al permitir la amplificación rápida y precisa del ADN, incluso a partir de muestras diminutas. La técnica implica una serie de ciclos de temperatura que facilitan la desnaturalización, el recocido y la extensión de las cadenas de ADN, lo que da como resultado la amplificación exponencial de la región de ADN objetivo. 2.OBJETIVOS 2.1. OBJETIVO GENERAL ● Comprender el manejo apropiado del termociclador T100 pcr thermal cycler 2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ● Conocer la configuración del programa PCR de acuerdo al estudio a realizar o experimentos, los cuales tengan ajustes en la temperatura, tiempo y la cantidad de ciclos. ● Comprender y seguir los protocolos de seguridad y bioseguridad al utilizar el termociclador T100 PCR.
  • 4. pág. 4 3.MARCO TEÓRICO 3.1. EL TERMOCICLADOR PCR 3.2. CARACTERÍSTICAS El termociclador T100 PCR está diseñado para proporcionar un control preciso de la temperatura y una distribución uniforme del calor en todos los tubos o placas de muestra. Esto garantiza condiciones de reacción óptimas para la PCR, lo que conduce a resultados fiables y reproducibles. El instrumento ofrece una interfaz fácil de usar que permite a los investigadores programar y monitorear fácilmente sus experimentos de PCR. Algunas características clave del termociclador T100 PCR incluyen: 1. Control de temperatura: el termociclador de PCR T100 ofrece un control de temperatura preciso, lo que permite a los investigadores establecer y mantener la temperatura deseada para cada paso del proceso de PCR. Esto garantiza una desnaturalización, un recocido y una extensión precisos de las cadenas de ADN. 2. Capacidad de muestra: el instrumento está disponible en diferentes formatos y se adapta a una variedad de tamaños y tipos de muestras. Puede acomodar tubos individuales, tiras de tubos o placas de múltiples pocillos, lo que brinda flexibilidad para diversas necesidades experimentales. 3. Ciclos programables: el termociclador T100 PCR permite a los investigadores programar y personalizar los parámetros de ciclo, incluido el número de ciclos, las velocidades de rampa y los tiempos de espera. Esta flexibilidad permite la optimización de las condiciones de la PCR para diferentes objetivos de ADN y requisitos experimentales.
  • 5. pág. 5 4. Interfaz intuitiva: el instrumento cuenta con una interfaz fácil de usar, lo que facilita la navegación y la programación de experimentos de PCR. La pantalla clara y los controles intuitivos simplifican la configuración y el seguimiento de las reacciones de PCR. 5. Confiabilidad y reproducibilidad: el termociclador T100 PCR es conocido por su confiabilidad y reproducibilidad, lo que garantiza resultados consistentes en todos los experimentos. Esto es crucial para obtener datos precisos y significativos en la investigación de biología molecular. 3.3. APLICACIONES Y USOS El termociclador T100 PCR encuentra aplicaciones en diversos campos de investigación, entre ellos: ● Análisis genético: el instrumento se utiliza ampliamente para la amplificación del ADN en análisis genéticos, como genotipado, análisis de expresión genética y secuenciación de ADN. ● Detección de patógenos: los métodos basados en PCR, realizados con el termociclador de PCR T100, se emplean para la detección e identificación de patógenos, incluidos virus, bacterias y hongos. ● Ciencias forenses: El termociclador T100 PCR desempeña un papel vital en el análisis forense de ADN, permitiendo la amplificación del ADN de muestras de la escena del crimen para su identificación y elaboración de perfiles. ● Biotecnología e investigación biomédica: el termociclador T100 PCR se utiliza en diversas aplicaciones de investigación biotecnológica y biomédica, incluido el desarrollo de pruebas de diagnóstico, descubrimiento de fármacos e ingeniería genética.
  • 6. pág. 6 3.4. MANTENIMIENTO PREVENTIVO El termociclador T100 PCR de Bio-Rad requiere un mantenimiento regular para garantizar su rendimiento óptimo y su longevidad. A continuación, se presentan algunas pautas generales para el mantenimiento del termociclador T100 PCR: ● Limpieza: Limpie periódicamente las superficies exteriores del instrumento con un detergente suave y un paño suave. Evite el uso de limpiadores abrasivos o disolventes que puedan dañar el instrumento. Limpie el bloque de muestra y la tapa con un desinfectante adecuado para evitar la contaminación entre experimentos. ● Mantenimiento preventivo: Siga las pautas del fabricante para el mantenimiento preventivo. Esto puede incluir la calibración periódica de sensores de temperatura, inspección de conexiones eléctricas y lubricación de piezas móviles si es necesario. Consulte el manual del usuario o comuníquese con el fabricante para obtener instrucciones de mantenimiento específicas. ● Calibración de temperatura: verifique periódicamente la precisión de los ajustes de temperatura utilizando un termómetro calibrado o una sonda de temperatura. Si encuentra alguna discrepancia, consulte al fabricante o a un técnico de servicio calificado para realizar la calibración o el ajuste. ● Filtros de aire: revise y limpie los filtros de aire con regularidad para garantizar una ventilación adecuada y evitar la acumulación de polvo y escombros. Siga las instrucciones del fabricante para limpiar o reemplazar el filtro.
  • 7. pág. 7 ● Fuente de alimentación: Asegúrese de que el instrumento esté conectado a una fuente de alimentación estable y confiable. Evite fluctuaciones o sobretensiones de energía que puedan afectar el rendimiento del instrumento. ● Capacitación del usuario: brinde capacitación adecuada a los usuarios del termociclador T100 PCR para garantizar que comprendan los procedimientos operativos correctos y los requisitos de mantenimiento. Esto ayudará a evitar cualquier mal manejo o daño al instrumento. Es importante tener en cuenta que estas son pautas generales y los requisitos de mantenimiento específicos pueden variar según el modelo y el fabricante. Consulte siempre el manual del usuario o comuníquese con el fabricante para obtener instrucciones detalladas sobre el mantenimiento del termociclador T100 PCR. 4. MÉTODO 4.1. MATERIALES Termociclador T100 PCR
  • 8. pág. 8 Pipeta multicanal Tubo individualizado Placa de tubo individualizado
  • 9. pág. 9 4.2. PROGRAMACIÓN DEL TERMOCICLADOR ● Conectamos el termociclador y esperamos a que encienda nos aseguraremos que la tapa del termociclador esté en su lugar asegurada. ● Configuramos nuestro termociclador aplicando nuevo protocolo y estableceremos nuevos termo ciclos con los que se va a manejar la muestra, para esta ocasión nos guiamos de un artículo científico que indica. Fuente: Elaboración propia
  • 10. pág. 10 ● Preparamos la muestra de ADN Y ARN que serán amplificadas en la PCR, siguiendo las buenas prácticas de manipulación genética, pero en esta ocasión nosotros no utilizamos ninguna muestra. Fuente Elaboración propia ● Cierra cuidadosamente la tapa del termociclador. Presiona el botón para iniciar el ciclo. El termociclador comenzará el proceso de PCR con los parámetros y ciclos predefinidos. Fuente: Elaboración propia.
  • 11. pág. 11 ● Una vez que se complete el ciclo de amplificación, el termociclador emitirá una señal de finalización y mostrará la finalización del proceso en la pantalla. Abre la tapa del termociclador y retira la placa de PCR con las muestras. 5. CONCLUSIONES ● En conclusión, el termociclador T100 PCR de Bio-Rad es un instrumento confiable y versátil que se ha convertido en una herramienta indispensable en los laboratorios de biología molecular. Su control preciso de la temperatura, su interfaz fácil de usar y su flexibilidad lo hacen adecuado para una amplia gama de aplicaciones de PCR. Los investigadores confían en este instrumento para amplificar el ADN, estudiar material genético y avanzar en el conocimiento científico en diversos campos. 6. BIBLIOGRAFÍA ● Martínez-Vega, RA, Peña-López, BO, & Rincón-Orozco, B. (2023). Estandarización de PCR en tiempo real para la detección y medición de los oncogenes E7 de seis Virus del Papiloma Humano de Alto Riesgo. Salud UIS , 55 . ● T100 Thermal Cycler. (s. f.). Bio-Rad Laboratories. https://www.bio-rad.com/es- pe/product/t100-thermal-cycler?ID=LGTWGIE8Z.