1. PATHOGEN È SE DES L É SIONS H É PATIQUES DU VHC : MOD É LISATION ANIMALE Hervé LERAT INSERM U955 Département de Virologie Moléculaire et Immunologie Physiopathologie et Thérapeutique des Hépatites Virales Chroniques (Pr. Pawlotsky) Hôpital Henri Mondor, Créteil, France.
7. The full-length HCV ORF transgenic mouse model FL-N/35 Lerat et al., Gastroenterology 2002 RNA HCV + X C57BL6J Liver micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ X C57BL6J DNA HCV + FL-N E1 E2 core NS4a NS3 NS4b NS5a NS5b NS2 p7 Albumin promoter SV40 PolyA Genotype 1b FL-N/35
8. The full-length HCV ORF transgenic mouse model FL-N/35 Lerat et al., Gastroenterology 2002 RNA HCV + X C57BL6J Liver micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ X C57BL6J DNA HCV + FL-N E1 E2 core NS4a NS3 NS4b NS5a NS5b NS2 p7 Albumin promoter SV40 PolyA Genotype 1b Steatosis Carcinoma Co-fibrogenic +CCl4
9. Hepatocellular Carcinomas A Lerat et al., Gastroenterology 2002. 1 cm 1 cm FL-N/35-170 UNC FL-N/35-171 UNC 1 cm FL-N/35-102 CERFE
10. Visualisation en IRM des CHC chez la souris VHC (H. Lerat, A. Luciani et T. Décaens, données personnelles.) Tumeur
11. Hépatocarcinomes viro-induits : rôle direct ou indirect des protéines virales? Infection VHC Réponse immunitaire de l’hôte Protéines virales Lésions hépatiques Cirrhose CANCER ?
12. Etapes essentielles de la carcinogenèse Negrini et al ., 2010. Nature Mol Cell Biol Rev: 11; 220-28
13. Inhibition de la voie apoptotique FAS dans le foie des souris VHC APOPTOSE caspase 3 caspase 9 cytochrome C caspase 8 Fas FasL Bid Membrane cellulaire mitochondrie VHC (NS2) CIDE-B fragmentation ADN VHC (NS5A) calpaïne Etape vers le cancer
14. (M. Higgs, H. Lerat, données personnelles) Surcharge en FER CHC ROS Production de ROS dans les souris VHC, implication sur la carcinogenèse hépatique. DNA damage inflammation fibrosis NS3-NS5A Nox4 Electron transport Complex (1) CORE Glutathion
15. GADD45 GADD45 GADD45 GADD153 GADD34 Senseurs de stress Arrêt du cycle cellulaire (G2/M) Lésions de l’ADN – La famille GADD Les protéines du VHC induisent la méthylation du promoteur de GADD45 β: inhibition de sa transcription : évasion du point de contrôle. Q M G 1 G 2 S G 0 CyclinB1 Cdc2 GADD45 β Lésions de l’ADN P P P Histone H3 Histone H1 Lamine VHC
16. Effects of c-Myc over-expression c-Myc Abnormal G 1 -S progression VHC M G 1 G 2 S G 0 Normal Cancer Genomic instability DNA damage SSB DSB ROS production (reactive oxygen species)
17. Viral proteins ROS production Molecular mechanisms of HCV-induced HCC Higgs et al. , 2010 Cancer Research 70 (12): 4901-11. Higgs et al ., 2011 Oncogene, submitted Lerat et al., 2002. Gastroenterology 122:352-365. Disson et al., 2004 Gastroenterology 126 : 859-72. Simonin et al., 2009 Hepatology 50 (10): 1370-79. DNA damage CH 3 CH 3 Methylation Gadd45 promoter Abnormal G1-S arrest Defective DNA repair HCC -catenin c-Myc promoter c-Myc Abnormal G2-M arrest Defective DNA repair Gadd45 Bid Diminished apoptosis Genomic instability
18.
19. Stéatose induite par le VHC: Mécanismes Moléculaires? Rôle direct des protéines virales?
20. Stéatose micro-vésiculaire coloration Oil Red O analyse in silico HCV TG NON TGM F M 0 5 10 15 20 25 12.5 ± 0.4 13 ± 0.8 14.4 ± 0.8 14.1 ± 0.3 n=12 n=12 n=10 n=7 p<0.001 % de l’aire total
The work I will present today has been focussed on one particular protein, Gadd45b, one of a number of related proteins involved in the response to cellular stress. Upon DNA damage, and various other types of cellular stress, expression of these proteins is augmented. CLICK In the case of the Gadd 45 proteins, these can subsequently induce cell cycle arrest CLICK And these proteins are also invovled directly in DNA repair CLICK and have also been implicated in tumour suppression and epigenetic control of gene expression