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PRESENTADO A: Dr. Jorge Forero
                Dr. Juan Carlos Munevar



PRESENTADO POR: Daniela Correal
                  Andrea Villegas
Las células stem son la fuente natural y
                                  directa de las células diferenciadas. 1



               Las células stem son células no diferenciadas con capacidad de
           proliferación, autorrenovación, producción de un gran número de células
              diferenciadas, regeneración del tejido después de una lesión, y una
                            flexibilidad en el uso de estas opciones. 2




1 R d’Aquino, A Graziano, M Sampaolesi, G Laino, G Pirozzi, A De Rosa and G Papaccio; Human postnatal dental pulp cells co- differentiate
into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation Cell Death and Differentiation (2007) 14, 1162–
1171
 2 CS Potten, and M Loeffler Stem cells: attributes, cycles, spirals, pitfalls and uncertainties. Lessons for and from
the crypt Development 110: 1001-1020, (1990).
Stem cells in Dentistry
Prometeo                                                        Aristóteles
Hidra y Heracles


                                                                                Descubrieron regeneración en
                                                                                 una variedad de organismos


                  Abraham                    Charles
                  Trembley                   Bonnet

                                                                                      Hidras, los gusanos de tierra,
                                                                                         los caracoles, las ranas
                                                                                      premetamórficas, lagartijas y
                                                                                              salamandras.
               Lazzaro                      Peter Simón
              Spallanzani                      Pallas
  •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3,
  numero 003 , 2005.
Publicó su trabajo de regeneración de las
                                                                  extremidades y garras en el cangrejo


    René -Antoine
Ferchault de Réaumur



                                                                 La investigación en regeneración tisular se
  Siglo XIX y parte                                             enfocó primordialmente en la fenomenología
    del Siglo XX                                                   de la regeneración y sus fundamentos
                                                                                 celulares.




                                                                    Las células progenitoras son requeridas para
        Conclusión                                                  la mayoría de procesos regenerativos.


    •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3,
    numero 003 , 2005.
Investigadores valiosos



                                 La primera célula Stem humana fue aislada a partir de un embrión en 1998.




                              Utilizo las células stem extraídas de dientes, regenerando con éxito
Songtao Shi                   la raíz del diente y ligamento periodontal para restaurar la función
                              dental en un modelo animal. 2




                                Tesis doctoral examinó la identificación y purificación del estroma de la
Stan Gronthos                   médula ósea células precursoras con el potencial de desarrollarse en
                                múltiples tipos de células del estroma. 3


   1 www.wikipedia.org 2 www.usc.edu/about/people/shi.html 3 http://csdb.ndcr.nih.gov/gronthos.htm
Aspectos Bioéticos de las células
             Stem
                                    Células Madre                                                                   Enorme potencial para
                                                                                                                    aplicaciones clínicas
                                     embrionarias


            RELIGIÓN

                                                                                                                                            POLITICA
                   RELIGIOSO




                                                                                    ETICA

Munévar JC. in vitro obtention and characterization of Stem Cells from the human umbilical cord as an alternative of embryonic Stem Cells for regenerative Medicine. Rev. Lat. Bioetica.
2005 9: 40-71
STEM CELLS    PROPIEDADES
                                                                                                                    CELULAS CLONÓGENICAS




                                                                                Capacidad de generar al menos una célula hija
               AUTORRENOVACIÓN                                                  con características similares a la célula de
                                                                                origen.



                Posibilidad de la célula para dividirse sin
                cambiar su fenotipo celular indiferenciado                                                                  PROLIFERACIÓN




                                                                                      Potencial para modificar el fenotipo de la
                      DIFERENCIACIÓN                                                  célula de origen en distintos tipos celulares
                                                                                      diferentes al tejido embrionario original

•MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
•http://stemcells.nih.gov/
Fuentes de CelulasStem Humanas



  Embriones
  Tejido fetal
  Células germinales tumorales
  Tejidos postnatales como: medula ósea, sangre
        periférica, cordón umbilical, cerebro, piel, pulpa
        dental, folículos pilosos, ligamento periodontal.


•MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3,
numero 003 , 2005.
CLASIFICACIÓN    DE

LAS CÉLULAS     STEM
1. SEGÚN SU CAPACIDAD DE
        PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN



                 TOTIPOTENCIALES



                                        PLURIPOTENCIALES



                                                             MULTIPOTENCIALES



                                                                                        UNIPOTENCIALES

•MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar y BERMUDEZ OLAYA, Claudia. Aspectos celulares y moleculares de las células madres involucrados en la
regeneración de tejidos con aplicaciones en la práctica clínica odontológica. Acta odontol. venez, dic. 2008, vol.46, no.3, p.361-369. ISSN 0001-6365.
TOTIPOTENCIALES

 Del latín totus, que significa completo


         Células que tienen el potencial de dar origen a un
        organismo completo incluyendo el tejido germinal




    •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
    junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
PLURIPOTENCIALES

  ”Pluri” (del latín plures, que significa muchos o varios)




              Células que pueden dar origen a células de
                      las tres capas germinativas




 •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
 junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
MULTIPOTENCIALES



                   Son células comprometidas en una línea celular
                específica y dan origen a células de un órgano o tejido
                                      particular




•MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
UNIPOTENCIALES

 Del latín unus, que significa uno



        Células que solo pueden generar otras células hijas y
          diferenciarse a lo largo de una única línea celular




    •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
    junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
2. SEGÚN SU ORIGEN:




                        Células Madre       Células Madre
                       EMBRIONARIAS          ADULTAS




• http://stemcells.nih.gov/
Células Stem EMBRIONARIAS


 •Originadas de la masa celular interna del
 embrión

 •Estadio de blastocito (7-14 días)

 •Se originaran las tres capas que
 darán origen a todos los tejidos
 del cuerpo humano

ECTODERMO                   ENDODERMO

             MESODERMO

                                      •http://stemcells.nih.gov/
•http://stemcells.nih.gov/
Células Stem                           HEMATOPOYETICAS (HSCs)


       ADULTAS
                                              MESENQUIMATOSAS (MSCs)




             •Células indiferenciadas que
              pueden estar presentes en
               tejidos diferenciados con
                 propiedades de auto
                      renovación.

            •Son        capaces          de
            diferenciarse     en    células
            idénticas del tejido de origen.




•http://stemcells.nih.gov/
NICHOS DE LAS CÉLULAS
                   STEM



                Espacio especifico donde se desarrollan
                 las células stem, en el cual confluyen
                 elementos del microambiente como
               sustancias químicas entre ellas hormonas
                        y diversos tipos celulares




Paola Andrea Acevedo Toro1; Mónica María Cortés Márquez, Células madre: generalidades, eventos biológicos y moleculares
                        iatreia.rev.fac.med.univ.antioquia vol.21 no.3 Medellín July/Sept. 2008
PLASTICIDAD




    La capacidad de
diferenciación en células
  maduras de un tejido
  distinto al de origen.




       •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
       junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
Plasticidad de las células stem
Mesenquimatosas (MSCs)

                                                      Células de tipo mesodermico:
                                                      •Osteoblastos
      in vitro                                        •Condroblastos
      in vivo                                         •Adipocitos
                                                      •Fibroblastos
                                                      •Mioblastos



      MSCs                           Características diferentes                             Endoteliales
                                             al origen                                      Neuroectodermico
                                                                                            Endodermo
  •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
  junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
Stem cells in Dentistry
Las capacidades de auto renovación y
diferenciación son propias de los diferentes
      tipos de células Stem, según el
    microambiente y el tejido en que se
                encuentren.




     Paola Andrea Acevedo Toro1; Mónica María Cortés Márquez, Células madre: generalidades, eventos biológicos y moleculares
                             iatreia.rev.fac.med.univ.antioquia vol.21 no.3 Medellín July/Sept. 2008
Stem Cell mesenquimales (hMSCs)
     Stem Cell mesenquimales (hMSCs) poseen un potencial de diferenciación
     en múltiples linajes


      La señalizacion molecular de hMSCs no es bien conocida, y los
     mecanismos de la regulación de su auto-renovación, diferenciación y
     transdiferenciacion no se entienden completamente.



 Se han identificado una serie de “stemness" y de "Genes de diferenciación" que
 podría ser esencial para mantener la multipotencialidad de las stem cell adultas,
 así como un compromiso específico a la unidad de linaje.

 Estos genes son los que codifican moléculas de superficie celular, así como los
 componentes de las vías de señalización.

LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Las stem cell adultas permanecen en un estado no proliferativo a
                  lo largo de su vida hasta que son estimuladas por las señales
                         provocadas por el daño tisular y la remodelación



                                                                                                       CICLO CELULAR:
ESTIMULACION                                                                                            repone la reserva de células madre




                                                                                                 CELULAS PROGENITORAS:

HOMEOSTASIS DE CITOQUINAS                            DETERMINANTES
FACTORES DE CRECIMIENTO                                   DEL                                        VARIEDAD DE CELULAS
MOLECULAS DE ADHESION
COMPONENTES DELA MATRIZ
                                                      MICROAMBIENTE                                      DIFERENCIADAS
EXTRACELULAR




 LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
 and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Las células poseen la capacidad de diferenciarse, es decir, que pueden cambiar
    su linaje de desarrollo específico en otro tipo de células de un linaje diferente,
                      a través de capas germinales embrionarias.



                                  ejemplo: (MSC) puede ser inducida a astrocitos,
                              oligodendrocitos, y células endoteliales, por estímulos
                                              extrínsecos in vitro.



   Recientemente se ha demostrado que los osteoblastos, condrocitos y adipocitos
            diferenciados de las células madre mesenquimales (hMSCs)
      puede transdiferenciarse en otros tipos de células en respuesta a factores
                                     extrinsecos


                                                                                    a través de la reprogramación genética
LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Se han identificado una lista de genes que son marcadores de hMSCs y
               pueden funcionar para mantener las células madre en un estado no
               diferenciado o iniciar su proceso de diferenciación:




               proteína actina filamentosa asociada [AFAP]
               frizzled7 [FZD7],
               dickkopf 3 [DKK3]
                El receptor F de la proteína tirosina fosfatasa [PTPRF],
               RAB3B


                proliferación de                                                                multilinajes
                   Stem Cell
                                                           supervivencia


LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Genes identificados en la
                               diferenciación celular

               IL1R2                                                Participa en múltiples vías de señalización

                                                                                NF-kB, p38 MAPK, PPAR, e IL-6
                                                                                         señalización



 Inactivar la vía MAP2K3 y                                                                 Reprimir la producción de
         P38 MAPK                                                                           citoquinas y la apoptosis




        Disminuir NF-kB                                                                            Reducción de la IL6


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and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Vía NF-kB (factor nuclear de
              transcripción)
 Regulan el crecimiento, la diferenciación y la apoptosis



                    Estímulo
                   extracelular
                                           P          P
        I-kB
                                               I-kB       Poliubiquitinización
       NF-kB
                                            NF-kB



 Traslocación
   al núcleo               NF-kB                          Proteosoma
Genes identificados
     Receptor F de la proteína tirosina                                                    PTPRF, regula el crecimiento celular,
                                                                                               transformación oncogénica

     THY-1                                       Marcador de células madres, Formación de inmunoglobulinas.

      Frizzled 7
                                                                 Receptores de proteínas de señalización Wnt

     Dickkopf 3
                                                       Desarrollo embrionario en su interacción en la via Wnt

     Biglycan                                                                   Mineralización del hueso

     Decorin                                          Regulación del ciclo celular , propiedades anti- oncogénica.

     Thrombospondin 1                                                   Interactúa con receptores de adhesión celular

     CD73                                                             Media señales coestimuladoras de linfocitos T.
    LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
    and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
Factores de señalización
        PI3K( FOSFATIDILINOSITOL 3 KINASA).                                                                   Involucrados
          PTPRF ( proteína tirosina fosfatasa)
          AFAP (proteína actina filamentosa asociada )
          RAB3B ( familia de oncogenes)
                                                                                                                Apoptosis y
        WNT BETA CATENINA                                                                                      proliferación
          FZD7                                                                                                    celular
          DKK3

      La señalización de Wnt induce la diferenciación de células madre pluripotenciales en células
                               progenitoras mesodermo y endodermo.




Journal of Biological                            Las células progenitoras creadas a través de la activación de Wnt
                                                 parecía tener el potencial alto para diferenciarse en hueso y cartílago.
     Chemistry
                                                 Sugirieren que la beta-catenina juega un papel importante en el
                                                 desarrollo esquelético.



 LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal
 and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
http://webs.uvigo.es/mmegias/5-celulas/ampliaciones/2-mas-que-adhesion.php
Stem cells in Dentistry
Cada tipo de célula.

                  Combinación de receptores de su superficie


                             Distinguirse


                                            Otros tipos de células



                               Basado             Moléculas que se unen a los
Nombres de Marcadores
                                                  receptores de superficie de
                                                        células madre
Células Stem Mesenquimatosas
(MSCs)

 Una célula es identificada por consenso internacional como célula madre o
 Stem cell cuando se detecta la expresión de varios marcadores fenotípicos
 específicos.



            Las MSCs se caracterizan por expresar marcadores

            POSITIVOS para : CD 73, CD 90, CD 105, CD 166

            NEGATIVOS para: CD 14, CD 45, CD34
Stem cells in Dentistry
Célula          Célula

CLASIFICACION CELULAR ACTIVADO POR FLUORESCENCIA

       Boquilla pequeña



  Atravesadas por una luz laser


Excita las moléculas fluorescentes

                     Unidas

    Marcadores específicos


        Señal eléctrica
                                     Indica la población de células detectadas

      Genera una grafica             •http://stemcells.nih.gov/
Green Fluorescent
                                                      Protein
      Consiste
                                                         Fluorescencia no dependiente
                                                          de marcadores de superficie
      Insertar

  “Gen reportero
                            CÉLULA MADRE

    Sólo se activa

                                   Produce
Células indiferenciadas


     Se apaga             Proteína fluorescente de                  PROBLEMA
                            color verde brillante
     Una vez
  Especializada             •http://stemcells.nih.gov/           Marca otras células
Marcadores

Nombre del marcador             Tipo de célula                                  Importancia



                                  Células Stem
                                Hematopoyética             Proteína de superficie celular en células de médula
       CD34                          (HSC)                    ósea, un indicativo de HSC y progenitoras
                                 Y progenitoras                               endoteliales
                                  endoteliales
     CD34, Sca 1                      (MSC)                 Identifica MSCs marcador de diferenciación para
                                                              adipocitos, osteocitos, condrocitos y miocitos




       •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
       junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
Marcadores
Nombre del             Tipo de                                         Importancia
 marcador               célula

     c-Kit             HSC, MSC           Los receptores de superficie celular de médula ósea , Identifica
                                          HSC y MSC vinculados con la estimulación de células con suero
                                          fetal de Bovino, permitiendo la proliferación de ES, MSC, HSC.

   Nestina            Progenitor          Proteína estructural filamentosa expresada en tejido neuronal
                        Neural                                      primitivo.

    Oct - 4                                   Único factor de transcripción a PSCs esenciales para el
                                            establecimiento y mantenimiento de PSCs indiferenciados

 Factor célula      Pluripotencial        Proteína de membrana que permite la proliferación de HSCs y
Stem (SCF) o C-      Célula Stem                                   MSCs,
  KIT ligando

 Telomerasa                                  Enzima asociada con la inmortalidad de enzimas celulares
                                                       usada para la identificación de PSCs



        •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
        junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
Utilidad Clínica Stem Cells

        TRANSPLANTES
                                                              BANCOS DE CELULAS STEM
          CELULARES

                                                                     Acceso a poblaciones
                                                                    celulares bien definidas
Neuronas dopaminergicas…… Parkinson
Células beta de langerhans …….Diabetes Juvenil
Cardiomiocitos……………………Infarto de miocardio

                                                                  Diferenciación de acuerdo a
                                                                   la necesidad del paciente



              •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero-
              junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
CÉLULAS

 MADRES EN

ODONTOLOGÍA
Células madres en el complejo
Pulpo-Dentinal
       Es un tejido conectivo de alta vascularidad rodeado por
       dentina, conformado por una población heterogénea de células

                   periodontoblastos,
                   fibroblastos
                   células estromales
                                                                    homeótasis de los tejidos
                   células endoteliales
                                                                    dentinales mineralizados
                   perivasculares
                   células nerviosas.


                          Vasos sanguíneos                                             REPARACION



•MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar y BERMUDEZ OLAYA, Claudia. Aspectos celulares y
moleculares de las células madres involucrados en la regeneración de tejidos con aplicaciones en la práctica clínica odontológica.
Acta odontol. venez, dic. 2008, vol.46, no.3, p.361-369. ISSN 0001-6365.
Stem cells in Dentistry
The Hidden Treasure in Apical
        Papilla: The Potential Role in
        Pulp/Dentin Regeneration and
             BioRoot Engineering


GeorgeT.-J. Huang, DDS, MSD, DSc*, WataruSonoyama, DDS, PhD§,YiLiu, DDS, PhD‡, He
Liu, DDS, PhD∥, SonglinWang, DDS, PhD‡, and SongtaoShi, DDS, PhD†




                    J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
Papila
                                   dental


                              ECTOMESENQUIMA

                                                            superposición de la lámina dental




          Papila apical: localizada en el ápice del diente
                     permanente ya formado

George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
        and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
Papila Apical

   Ligeramente adherida al
    ápice puede retirarse
         fácilmente.



             UBICACION
 Este tejido puede ser beneficiado
     por la circulación colateral,
lo que le permite sobrevivir durante
 el proceso de necrosis de la pulpa.




           George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
                   and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
El descubrimiento de las SCAP

                                El primer tipo de Stem cells dental
                    fue aislado de tejido pulpar de terceros molares extraídos



DPSCs


                                                                           STRO-1 + en cel.de la papila apical.
          Se han aislado MSC


                                                                               Evidencia que sugiere la
                                                                            existencia de células madre en
 (SHED)            (PDLSCs)                      SCAP                                 este tejido.


     George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
             and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
En SCAP cultivadas se han encontrado marcadores para dentinogénesis

                              Sialofosfoproteina dentinal
                                            .



       SCAP presentan capacidad de diferenciación adipogénica y
      neurogénica cuando son tratadas con el estímulo adecuado.




                  Ex vivo SCAP fueron trasplantadas en ratones
               inmunocomprometidos utilizando partículas de HA /
                            TCP como un portador.




   George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
           and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
El papel potencial de la papila apical en la
        maduración de la raíz humana




                                                                                                                              Cuando la papila apical de
                                                                                                                                 la raíz distal bucal del
                                                                                                                               primer molar inferior de
                                                                                                                               un cerdo miniatura de 9
                                                                                                                              meses de edad se eliminó
                                                                                                                               quirúrgicamente, la raíz
 (A ) fractura de la                (B) Tratamiento                  (C) Tres meses                 (D) Siete meses                distal bucal dejó de
  corona incisivo                    Inmediato del                    después del                     después del                 desarrollarse en el 3-
  Humano que se                  conducto radicular se                tratamiento                  tratamiento, una             meses de seguimiento
produjo antes de la                 elimino el tejido               endodóntico, el              cantidad significativa        (flechas en negro), pero
  finalización del                pulpar por completo                 ápice siguió                         de                 otras raíces muestran una
desarrollo de la raíz.             se realizo selle con             desarrollandose.              punta de la raíz se          crecimiento y desarrollo
                                  material de relleno.                                                   formó.                 normal (flechas rojas).

 George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot
                      Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
Desarrollo de la raíz con la punta
                                                                                 junto a la papila apical fue
                                                                                 cultivadas in vitro durante 3 días
                                                                                 antes de ser        teñida     con
                                                                                 hematoxilina      y    eosina     .
                                                                                 Odontoblastos (negro flechas),
                                                                                 rica zona apical celular




 George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential
Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ;
                 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
SCAP en el TTo y Regeneración de dientes
    inmaduros con periodontitis o absceso


La infección prolongada puede
                                                                                        APEXOGÉNESIS
  llevar eventualmente a una                                                           sería poco probable
 necrosis total de la pulpa y la
     papila apical, en estas
          condiciones.


                                                    La hipotética vía de infección de los
                                                     dientes permanentes inmaduros.

                                                 La infección puede pasar a través de la
                                                    papila apical y llegar a los tejidos
                                                     causando amplia resorción ósea
                                                             perirradicular .

       George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
               and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
SCAP en Reimplante y trasplante
Vojinovic
   Al rastrear la migración de las células Periodontales después de la pulpotomía en dientes
    inmaduros encontró que las células Periodontales migran en el espacio de la pulpa apical
                                  durante el proceso de reparación.


 Por lo tanto podemos asumir que cuando hay una pérdida total del tejido pulpar y el espacio
          del canal permanece estéril, el resultado es el crecimiento interno de los tejidos
                                            periodontales.



                                        Involucra extracción de un diente supernumerario o
    Autotransplante                    tercer molar y la implantación en una zona receptora




Se ha considerado que mientras el HERS sigue siendo viable, estimula las células
mesenquimatosas indiferenciadas en los tejidos periapicales a diferenciarse en odontoblastos
que contribuyen a la formación de dentina nueva y maduración de la raíz.
Ingeniería de tejidos y
               regeneración tisular




                Un ejemplo esquemático de la propuesta de
                 inserción gradual de pulpa de ingeniería de
                           tejidos en el escenario clínico
                                                  .
George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration
         and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
Characterization of Apical Papilla and its
  Residing Stem Cells from
  Human Immature Permanent Teeth –A
  Pilot Study

Wataru Sonoyama, D.D.S., Ph.D. 4, Yi Liu, D.D.S., Ph.D. 3, Takayoshi Yamaza, D.D.S,
Ph.D.2,Rocky S. Tuan, PhD5, Songlin Wang, D.D.S., Ph.D.3, Songtao Shi, D.D.S., h.D.
2,6, and George T.-J. Huang, D.D.S., M.S.D., D.Sc. 1,6




       J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021.
Antecedentes

           Se han aislado y caracterizado en humanos células
           madre de pulpa dental (DPSCs) de dientes permanentes


           Células madre a partir de la pulpa de los dientes deciduos
           exfoliadas (SHED)

           DPSCs son capaces de diferenciar en odontoblasto y
           producir dentina ectópico en el espacio subcutáneo de
           ratones .




  Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                        Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Antecedentes

   SHED parecen ser capaces de formar odontoblastos y
   osteoblastos cuando son trasplantados en ratones
   inmunodeficientes.

   Se descubrió otro tipo de MSC humanos … las de la papila
   apical (SCAP), parecen ser diferentes población de células
   madre de DPSCs .




  Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                        Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Materiales y Métodos
 terceros molares (n = 10)

 Con raíces saludables e inmaduros

 Pacientes (6 donantes 16-24 años de edad) en las Clínicas de
 Odontología de la Universidad del Sur de California
 y la Universidad de Maryland.

 La médula ósea se obtuvo de los huesos largos de una
 paciente sana (~ 20 años de edad) sometida a cirugía
 ortopédica en el Walter Reed Army Medical Center.

 Protocolo y consentimiento informado

 Las muestras del diente fueron almacenadas y transportadas
 en medio de los laboratorios.

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                          Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Cultivo celular
 Papila apical de raíz se separa ligeramente de la superficie de la
raíz

 Es llevada a una solución de 3 mg / ml de colagenasa tipo I y
4 mg / ml dispasa durante 30 minutos a 37 ° C.


Las únicas células que se obtuvieron al pasar por un filtro
fueron de 70 micras de suspensiones SCAP




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                            Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
• Cultivadas con Medio de Eagle α-Modificado


                 Complementado con un 15-20% de suero bovino fetal,


                               100 mM de ácido L-ascórbico 2-fosfato,


                             2 mM L-glutamina, 100 U / ml de penicilina


                   100 mg / ml de estreptomicina a 37 ° C en 5% de CO2.


EVALUACIÓN DE LA FORMACIÓN DE COLONIAS:

día-10
se fijaron con 4% de formalina
                                                                                            ≥ 50 agregados de células
se tiñen con azul de toluidina 0,1%.



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                                 Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
DPSCs y (BMMSCs) fueron aislados y
cultivadas como se ha descrito anteriormente




   SCAP fueron cultivadas en:

                          Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)



                                        100 unidades / ml de penicilina


                                         100 mg / ml de estreptomicina

                                                                                                              Células fueron
                                                 25 ng / ml Fungizone,
                                                                                                              subcultivadas a 1:3,
                                                                                                              cuando llegaron a ~ 85%
                                                                                                              de confluencia.
                                           10% FBS preseleccionados.
        Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                              Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Análisis de la proliferación
celular
in situ                                                 Se tomo la papila apical de las puntas de las raices



                                          Cultivaron y etiquetados con bromodeoxyuridina (BrdU) .



  La concentración de BrdU utilizado fue el mismo en las células descritas anteriores .



                                                       Después de 3,5 y 18 horas de la incorporación BrdU



                        Los tejidos fueron fijados y desmineralizadaos
     Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                           Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Análisis de la proliferación
celular
in Las muestras fueron seccionadas y
    situdesparafinadas
     para tinción inmunohistoquímica
       de células BrdU positivos con
          anticuerpos anti-BrdU.




                                                                         Las células teñidas positivamente se
                                                                              contabilizaron en las zonas
                                                                               seleccionadas al azar en
                                                                                un microscopio de luz.




     Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                           Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
INDUCCION OSTEO/DENTINOGENICA




          Condiciones para la inducción de la acumulación de calcio
                             dadas por el medio.

          MEDIO OSTEO / DENTINÓGENICO contiene los elementos
                     básicos mencionados además de:
                          10 nM dexametasona,
                         10 mM β-glicerofosfato
                   50 mg / ml de fosfato de ascorbico
              25 dihidroxivitamina D3 calcio acumulada fue
          detectado con la tinción 2% Rojo de alizarina S (pH 4,2) .


Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                      Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
INDUCCION ADIPOGENICA


  Medio adipogénico contiene básicos los elementos más:

                 1 dexametasona μM, 1 mg / ml de insulina
                0,5 mM IBMX (3-isobutil-1 - methylxantine).
   Aplicación de gotas de aceite acumulado en las células después de la
       diferenciación adipogénica se tiñeron con el rojo reactivo O.


INDUCCIÓN NEURÓGENA

                 Las células fueron cultivadas en la presencia de
              Suplemento B27, bFGF (40 ng / ml) y EGF (20 ng / ml) .

   Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                         Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
DE CONTROL
                                                                                                            NEGATIVO



RATÓN      Anticuerpos DSP (LF-21)………………………………… (Dr. Larry Fisher,
           NIDCR / NIH)

           STRO-1 …………………. (Dr. Stan Gronthos, del Instituto de Medicina y
           anti-FGF incluido básica (FGF),
            TGFβRI Y TGFβRII
           Ciencias Veterinarias, Australia), nestin, neurofilamento M (NFM)
           NSE (enolasa neuronal específica),
            núcleos neuronalesVEGF 1)
              Flt-1 (Receptor de (Neun)
            Flg (FGFR1) y FGFR3 de Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz
            2 ', 3'-nucleótido cíclico-3'- deLF-120)
           sialophosphoprotein hueso (BSP, la fosfodiesterasa (CNPase) de
           fosfatasa
           Chemicon alcalina (ALP, LF-47)
CONEJO     Osteocalcina (OCN, LF-32)
           βIII anti-tubulina de Promega y monoclonales anti-CD146/MUC18
            anti-fosfatasa alcalina (ALP) (FL-47)
            la matriz extracelular phosphaglycoprotein (MEPE) (LF-155) de la Dra. L.
           (glicoproteína melanoma asociada) de Chemicon.
           Fisher
            anti-endostatina,
           ácido glutámico
            descarboxilasa (GAD) de Chemicon.

         Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                               Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Secciones desparafinadas fueron inmersas en 3% H2O2/metanol
 por 15 minutos para apagar la actividad de peroxidasa endógena




                                               Se incubaron con anticuerpos primarios
                                                (1:200 a 1:500 diluciones).
                                                Isotipo de concordancia de anticuerpos de
                                               control se utiliza en las mismas condiciones
                                               durante 1 hora.


Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                      Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Tinción inmunohistoquímica enzimática, polímero Zymed SuperPicTure (Zymed / Invitrogen)

Posteriormente, las secciones fueron contrastados con hematoxilina.

Para el análisis de immunocitofluorescencia, las células fueron subcultivadas en ocho
dispositivos en la cámara (2 ×10 a la 4 células por campo)

 Las células fueron fijadas en Formaldehído al 4% durante 15 min y luego bloquearon y se
incubaron con anticuerpos primarios (1:200 - Diluciones 1:500) por 1 h, respectivamente.




             Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                                   Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Stem cells in Dentistry
Características histológicas de
la papila apical




   Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                         Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Los resultados demuestran que papila apical contienen 2 - a 3 veces más células BrdU positivos que los de tejido de
la pulpa en el mismo diente 3,5 horas o 18 horas después de la incorporación BrdU.




          Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                                Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Se examino la expresión in situ de marcadores osteogenicos y dentinógenicos en papila apical. DSP,
ALP, BSP, y OCN inmunohistoquímica positiva sólo en odontoblastos alineados en contra de la recién formada
la dentina (fig. 3), mientras que ninguno de estos marcadores se han detectado en la papila apical.
                Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                                      Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Potencial:
osteogénico
dentinogénic
o
adipogénico



 Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla
  and its Residing Stem Cells from Human Immature
    Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008
February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Inmunofenotipo en los cultivos
de SCAP




   Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                         Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Expresión de marcadores
neurales en SCAP




  Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot
                        Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
Papila dental ha sido considerada como la fuente de los
odontoblastos durante el desarrollo dental.


 En general se cree que la formación de dentina en la raíz es el
resultado de la señalización en la papila apical y las células
mesenquimatosas indiferenciadas adyacentes, que luego se convierten
en odontoblastos y son responsables formación de la dentina
radicular.

La localización anatómica de las células mesenquimatosas
indiferenciadas no ha sido claramente definida.Pueden encontrarse,
ya sea en pulpa o papila apical.


 La pulpa dental también existe poblaciones de células
mesenquimatosas indiferenciadas que se sabe que son capaces de
diferenciarse en odontoblastos nuevos para reemplazar los
odontoblastos originales que se han perdido.
DPSC aislados a partir de pulpa han demostrado la capacidad de
diferencian en odontoblastos células y producir dentina ectópica en
inmunocomprometidos ratones.


Las células de papila apical proliferan mas rápido y en mayor
cantidad comparadas con las de pulpa dental.

Una de las propiedades de las MSC de adultos   es que normalmente
permanecen en un no-proliferativo, estado de   reposo en vivo hasta
estimulado por las señales provocadas por el   daño tisular y la
remodelación haciendo que entren en el ciclo   celular.


BMMSCs son el MSC estándar de oro en términos de multipotencialidad

SCAP y DPSC, parecen tener un perfil diferente de multipotencia y
están más comprometidos con osteo / dentinogenenesis.
CONCLUSIONES


•Las células madre, junto con la manipulación genética, van a
constituir dos pilares básicos de la medicina de los próximos años.

• La tecnología genética impedirá la aparición de muchas
enfermedades inscritas en nuestros genes.

• El entendimiento de la biologia de las células Stem dentales y el
principio de la ingenieria de tejidos nos proporciona una mejor base
de conocimientos para establecer planes de tratamiento clinicos mas
adecuados.
PERSPECTIVAS


La implementación y mejoría de las técnicas de cultivos de las células
madre humana nos ofrece la posibilidad de acercarnos al conocimiento de
los eventos que controlan la biología y la medicina humana.

A pesar del avance vertiginoso en el campo de la investigación de las
células stem es todavía mucho lo que queda por investigar sobre ellas.
PERSPECTIVAS

Regeneración dental
         Y
    periodontal



                                        Regeneración tisular



     Alternativa terapéutica funcional para mejorar el estado del paciente
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Stem cells in Dentistry

  • 1. PRESENTADO A: Dr. Jorge Forero Dr. Juan Carlos Munevar PRESENTADO POR: Daniela Correal Andrea Villegas
  • 2. Las células stem son la fuente natural y directa de las células diferenciadas. 1 Las células stem son células no diferenciadas con capacidad de proliferación, autorrenovación, producción de un gran número de células diferenciadas, regeneración del tejido después de una lesión, y una flexibilidad en el uso de estas opciones. 2 1 R d’Aquino, A Graziano, M Sampaolesi, G Laino, G Pirozzi, A De Rosa and G Papaccio; Human postnatal dental pulp cells co- differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation Cell Death and Differentiation (2007) 14, 1162– 1171 2 CS Potten, and M Loeffler Stem cells: attributes, cycles, spirals, pitfalls and uncertainties. Lessons for and from the crypt Development 110: 1001-1020, (1990).
  • 4. Prometeo Aristóteles Hidra y Heracles Descubrieron regeneración en una variedad de organismos Abraham Charles Trembley Bonnet Hidras, los gusanos de tierra, los caracoles, las ranas premetamórficas, lagartijas y salamandras. Lazzaro Peter Simón Spallanzani Pallas •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 5. Publicó su trabajo de regeneración de las extremidades y garras en el cangrejo René -Antoine Ferchault de Réaumur La investigación en regeneración tisular se Siglo XIX y parte enfocó primordialmente en la fenomenología del Siglo XX de la regeneración y sus fundamentos celulares. Las células progenitoras son requeridas para Conclusión la mayoría de procesos regenerativos. •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 6. Investigadores valiosos La primera célula Stem humana fue aislada a partir de un embrión en 1998. Utilizo las células stem extraídas de dientes, regenerando con éxito Songtao Shi la raíz del diente y ligamento periodontal para restaurar la función dental en un modelo animal. 2 Tesis doctoral examinó la identificación y purificación del estroma de la Stan Gronthos médula ósea células precursoras con el potencial de desarrollarse en múltiples tipos de células del estroma. 3 1 www.wikipedia.org 2 www.usc.edu/about/people/shi.html 3 http://csdb.ndcr.nih.gov/gronthos.htm
  • 7. Aspectos Bioéticos de las células Stem Células Madre Enorme potencial para aplicaciones clínicas embrionarias RELIGIÓN POLITICA RELIGIOSO ETICA Munévar JC. in vitro obtention and characterization of Stem Cells from the human umbilical cord as an alternative of embryonic Stem Cells for regenerative Medicine. Rev. Lat. Bioetica. 2005 9: 40-71
  • 8. STEM CELLS PROPIEDADES  CELULAS CLONÓGENICAS Capacidad de generar al menos una célula hija AUTORRENOVACIÓN con características similares a la célula de origen. Posibilidad de la célula para dividirse sin cambiar su fenotipo celular indiferenciado PROLIFERACIÓN Potencial para modificar el fenotipo de la DIFERENCIACIÓN célula de origen en distintos tipos celulares diferentes al tejido embrionario original •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3, numero 003 , 2005. •http://stemcells.nih.gov/
  • 9. Fuentes de CelulasStem Humanas  Embriones  Tejido fetal  Células germinales tumorales  Tejidos postnatales como: medula ósea, sangre periférica, cordón umbilical, cerebro, piel, pulpa dental, folículos pilosos, ligamento periodontal. •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Biologia de las celulas Stem Nova, enero-junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 10. CLASIFICACIÓN DE LAS CÉLULAS STEM
  • 11. 1. SEGÚN SU CAPACIDAD DE PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN TOTIPOTENCIALES PLURIPOTENCIALES MULTIPOTENCIALES UNIPOTENCIALES •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar y BERMUDEZ OLAYA, Claudia. Aspectos celulares y moleculares de las células madres involucrados en la regeneración de tejidos con aplicaciones en la práctica clínica odontológica. Acta odontol. venez, dic. 2008, vol.46, no.3, p.361-369. ISSN 0001-6365.
  • 12. TOTIPOTENCIALES  Del latín totus, que significa completo Células que tienen el potencial de dar origen a un organismo completo incluyendo el tejido germinal •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 13. PLURIPOTENCIALES  ”Pluri” (del latín plures, que significa muchos o varios) Células que pueden dar origen a células de las tres capas germinativas •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 14. MULTIPOTENCIALES Son células comprometidas en una línea celular específica y dan origen a células de un órgano o tejido particular •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 15. UNIPOTENCIALES  Del latín unus, que significa uno Células que solo pueden generar otras células hijas y diferenciarse a lo largo de una única línea celular •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 16. 2. SEGÚN SU ORIGEN: Células Madre Células Madre EMBRIONARIAS ADULTAS • http://stemcells.nih.gov/
  • 17. Células Stem EMBRIONARIAS •Originadas de la masa celular interna del embrión •Estadio de blastocito (7-14 días) •Se originaran las tres capas que darán origen a todos los tejidos del cuerpo humano ECTODERMO ENDODERMO MESODERMO •http://stemcells.nih.gov/
  • 19. Células Stem HEMATOPOYETICAS (HSCs) ADULTAS MESENQUIMATOSAS (MSCs) •Células indiferenciadas que pueden estar presentes en tejidos diferenciados con propiedades de auto renovación. •Son capaces de diferenciarse en células idénticas del tejido de origen. •http://stemcells.nih.gov/
  • 20. NICHOS DE LAS CÉLULAS STEM Espacio especifico donde se desarrollan las células stem, en el cual confluyen elementos del microambiente como sustancias químicas entre ellas hormonas y diversos tipos celulares Paola Andrea Acevedo Toro1; Mónica María Cortés Márquez, Células madre: generalidades, eventos biológicos y moleculares iatreia.rev.fac.med.univ.antioquia vol.21 no.3 Medellín July/Sept. 2008
  • 21. PLASTICIDAD La capacidad de diferenciación en células maduras de un tejido distinto al de origen. •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 22. Plasticidad de las células stem Mesenquimatosas (MSCs) Células de tipo mesodermico: •Osteoblastos in vitro •Condroblastos in vivo •Adipocitos •Fibroblastos •Mioblastos MSCs Características diferentes Endoteliales al origen Neuroectodermico Endodermo •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 24. Las capacidades de auto renovación y diferenciación son propias de los diferentes tipos de células Stem, según el microambiente y el tejido en que se encuentren. Paola Andrea Acevedo Toro1; Mónica María Cortés Márquez, Células madre: generalidades, eventos biológicos y moleculares iatreia.rev.fac.med.univ.antioquia vol.21 no.3 Medellín July/Sept. 2008
  • 25. Stem Cell mesenquimales (hMSCs) Stem Cell mesenquimales (hMSCs) poseen un potencial de diferenciación en múltiples linajes  La señalizacion molecular de hMSCs no es bien conocida, y los mecanismos de la regulación de su auto-renovación, diferenciación y transdiferenciacion no se entienden completamente. Se han identificado una serie de “stemness" y de "Genes de diferenciación" que podría ser esencial para mantener la multipotencialidad de las stem cell adultas, así como un compromiso específico a la unidad de linaje. Estos genes son los que codifican moléculas de superficie celular, así como los componentes de las vías de señalización. LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 26. Las stem cell adultas permanecen en un estado no proliferativo a lo largo de su vida hasta que son estimuladas por las señales provocadas por el daño tisular y la remodelación CICLO CELULAR: ESTIMULACION repone la reserva de células madre CELULAS PROGENITORAS: HOMEOSTASIS DE CITOQUINAS DETERMINANTES FACTORES DE CRECIMIENTO DEL VARIEDAD DE CELULAS MOLECULAS DE ADHESION COMPONENTES DELA MATRIZ MICROAMBIENTE DIFERENCIADAS EXTRACELULAR LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 27. Las células poseen la capacidad de diferenciarse, es decir, que pueden cambiar su linaje de desarrollo específico en otro tipo de células de un linaje diferente, a través de capas germinales embrionarias. ejemplo: (MSC) puede ser inducida a astrocitos, oligodendrocitos, y células endoteliales, por estímulos extrínsecos in vitro. Recientemente se ha demostrado que los osteoblastos, condrocitos y adipocitos diferenciados de las células madre mesenquimales (hMSCs) puede transdiferenciarse en otros tipos de células en respuesta a factores extrinsecos a través de la reprogramación genética LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 28. Se han identificado una lista de genes que son marcadores de hMSCs y pueden funcionar para mantener las células madre en un estado no diferenciado o iniciar su proceso de diferenciación: proteína actina filamentosa asociada [AFAP] frizzled7 [FZD7], dickkopf 3 [DKK3]  El receptor F de la proteína tirosina fosfatasa [PTPRF], RAB3B proliferación de multilinajes Stem Cell supervivencia LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 29. Genes identificados en la diferenciación celular IL1R2 Participa en múltiples vías de señalización NF-kB, p38 MAPK, PPAR, e IL-6 señalización Inactivar la vía MAP2K3 y Reprimir la producción de P38 MAPK citoquinas y la apoptosis Disminuir NF-kB Reducción de la IL6 LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 30. Vía NF-kB (factor nuclear de transcripción)  Regulan el crecimiento, la diferenciación y la apoptosis Estímulo extracelular P P I-kB I-kB Poliubiquitinización NF-kB NF-kB Traslocación al núcleo NF-kB Proteosoma
  • 31. Genes identificados  Receptor F de la proteína tirosina PTPRF, regula el crecimiento celular, transformación oncogénica  THY-1 Marcador de células madres, Formación de inmunoglobulinas.  Frizzled 7 Receptores de proteínas de señalización Wnt  Dickkopf 3 Desarrollo embrionario en su interacción en la via Wnt  Biglycan Mineralización del hueso  Decorin Regulación del ciclo celular , propiedades anti- oncogénica.  Thrombospondin 1 Interactúa con receptores de adhesión celular  CD73 Media señales coestimuladoras de linfocitos T. LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 32. Factores de señalización  PI3K( FOSFATIDILINOSITOL 3 KINASA). Involucrados  PTPRF ( proteína tirosina fosfatasa)  AFAP (proteína actina filamentosa asociada )  RAB3B ( familia de oncogenes) Apoptosis y  WNT BETA CATENINA proliferación  FZD7 celular  DKK3 La señalización de Wnt induce la diferenciación de células madre pluripotenciales en células progenitoras mesodermo y endodermo. Journal of Biological Las células progenitoras creadas a través de la activación de Wnt parecía tener el potencial alto para diferenciarse en hueso y cartílago. Chemistry Sugirieren que la beta-catenina juega un papel importante en el desarrollo esquelético. LIN SONG,NICOLE E. WEBB,YINGJIE SONG,ROCKY S. TUAN, Identification and Functional Analysis of Candidate Genes Regulating Mesenchymal Stem Cell Self-Renewal and Multipotency Stem Cells. 2006 Jul;24(7):1707-18
  • 35. Cada tipo de célula. Combinación de receptores de su superficie Distinguirse Otros tipos de células Basado Moléculas que se unen a los Nombres de Marcadores receptores de superficie de células madre
  • 36. Células Stem Mesenquimatosas (MSCs) Una célula es identificada por consenso internacional como célula madre o Stem cell cuando se detecta la expresión de varios marcadores fenotípicos específicos. Las MSCs se caracterizan por expresar marcadores POSITIVOS para : CD 73, CD 90, CD 105, CD 166 NEGATIVOS para: CD 14, CD 45, CD34
  • 38. Célula Célula CLASIFICACION CELULAR ACTIVADO POR FLUORESCENCIA Boquilla pequeña Atravesadas por una luz laser Excita las moléculas fluorescentes Unidas Marcadores específicos Señal eléctrica Indica la población de células detectadas Genera una grafica •http://stemcells.nih.gov/
  • 39. Green Fluorescent Protein Consiste Fluorescencia no dependiente de marcadores de superficie Insertar “Gen reportero CÉLULA MADRE Sólo se activa Produce Células indiferenciadas Se apaga Proteína fluorescente de PROBLEMA color verde brillante Una vez Especializada •http://stemcells.nih.gov/ Marca otras células
  • 40. Marcadores Nombre del marcador Tipo de célula Importancia Células Stem Hematopoyética Proteína de superficie celular en células de médula CD34 (HSC) ósea, un indicativo de HSC y progenitoras Y progenitoras endoteliales endoteliales CD34, Sca 1 (MSC) Identifica MSCs marcador de diferenciación para adipocitos, osteocitos, condrocitos y miocitos •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 41. Marcadores Nombre del Tipo de Importancia marcador célula c-Kit HSC, MSC Los receptores de superficie celular de médula ósea , Identifica HSC y MSC vinculados con la estimulación de células con suero fetal de Bovino, permitiendo la proliferación de ES, MSC, HSC. Nestina Progenitor Proteína estructural filamentosa expresada en tejido neuronal Neural primitivo. Oct - 4 Único factor de transcripción a PSCs esenciales para el establecimiento y mantenimiento de PSCs indiferenciados Factor célula Pluripotencial Proteína de membrana que permite la proliferación de HSCs y Stem (SCF) o C- Célula Stem MSCs, KIT ligando Telomerasa Enzima asociada con la inmortalidad de enzimas celulares usada para la identificación de PSCs •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 42. Utilidad Clínica Stem Cells TRANSPLANTES BANCOS DE CELULAS STEM CELULARES Acceso a poblaciones celulares bien definidas Neuronas dopaminergicas…… Parkinson Células beta de langerhans …….Diabetes Juvenil Cardiomiocitos……………………Infarto de miocardio Diferenciación de acuerdo a la necesidad del paciente •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar, HERNANDEZ DIAZ, Angelica Maria. Nova, enero- junio, año/vol 3, numero 003 , 2005.
  • 44. Células madres en el complejo Pulpo-Dentinal Es un tejido conectivo de alta vascularidad rodeado por dentina, conformado por una población heterogénea de células periodontoblastos, fibroblastos células estromales homeótasis de los tejidos células endoteliales dentinales mineralizados perivasculares células nerviosas. Vasos sanguíneos REPARACION •MUNEVAR NINO, Juan Carlos, BECERRA CALIXTO, Andrea del Pilar y BERMUDEZ OLAYA, Claudia. Aspectos celulares y moleculares de las células madres involucrados en la regeneración de tejidos con aplicaciones en la práctica clínica odontológica. Acta odontol. venez, dic. 2008, vol.46, no.3, p.361-369. ISSN 0001-6365.
  • 46. The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering GeorgeT.-J. Huang, DDS, MSD, DSc*, WataruSonoyama, DDS, PhD§,YiLiu, DDS, PhD‡, He Liu, DDS, PhD∥, SonglinWang, DDS, PhD‡, and SongtaoShi, DDS, PhD† J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 47. Papila dental ECTOMESENQUIMA superposición de la lámina dental Papila apical: localizada en el ápice del diente permanente ya formado George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 48. Papila Apical Ligeramente adherida al ápice puede retirarse fácilmente. UBICACION Este tejido puede ser beneficiado por la circulación colateral, lo que le permite sobrevivir durante el proceso de necrosis de la pulpa. George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 49. El descubrimiento de las SCAP El primer tipo de Stem cells dental fue aislado de tejido pulpar de terceros molares extraídos DPSCs STRO-1 + en cel.de la papila apical. Se han aislado MSC Evidencia que sugiere la existencia de células madre en (SHED) (PDLSCs) SCAP este tejido. George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 50. En SCAP cultivadas se han encontrado marcadores para dentinogénesis Sialofosfoproteina dentinal . SCAP presentan capacidad de diferenciación adipogénica y neurogénica cuando son tratadas con el estímulo adecuado. Ex vivo SCAP fueron trasplantadas en ratones inmunocomprometidos utilizando partículas de HA / TCP como un portador. George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 51. El papel potencial de la papila apical en la maduración de la raíz humana Cuando la papila apical de la raíz distal bucal del primer molar inferior de un cerdo miniatura de 9 meses de edad se eliminó quirúrgicamente, la raíz (A ) fractura de la (B) Tratamiento (C) Tres meses (D) Siete meses distal bucal dejó de corona incisivo Inmediato del después del después del desarrollarse en el 3- Humano que se conducto radicular se tratamiento tratamiento, una meses de seguimiento produjo antes de la elimino el tejido endodóntico, el cantidad significativa (flechas en negro), pero finalización del pulpar por completo ápice siguió de otras raíces muestran una desarrollo de la raíz. se realizo selle con desarrollandose. punta de la raíz se crecimiento y desarrollo material de relleno. formó. normal (flechas rojas). George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 52. Desarrollo de la raíz con la punta junto a la papila apical fue cultivadas in vitro durante 3 días antes de ser teñida con hematoxilina y eosina . Odontoblastos (negro flechas), rica zona apical celular George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 53. SCAP en el TTo y Regeneración de dientes inmaduros con periodontitis o absceso La infección prolongada puede APEXOGÉNESIS llevar eventualmente a una sería poco probable necrosis total de la pulpa y la papila apical, en estas condiciones. La hipotética vía de infección de los dientes permanentes inmaduros. La infección puede pasar a través de la papila apical y llegar a los tejidos causando amplia resorción ósea perirradicular . George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 54. SCAP en Reimplante y trasplante Vojinovic Al rastrear la migración de las células Periodontales después de la pulpotomía en dientes inmaduros encontró que las células Periodontales migran en el espacio de la pulpa apical durante el proceso de reparación. Por lo tanto podemos asumir que cuando hay una pérdida total del tejido pulpar y el espacio del canal permanece estéril, el resultado es el crecimiento interno de los tejidos periodontales. Involucra extracción de un diente supernumerario o Autotransplante tercer molar y la implantación en una zona receptora Se ha considerado que mientras el HERS sigue siendo viable, estimula las células mesenquimatosas indiferenciadas en los tejidos periapicales a diferenciarse en odontoblastos que contribuyen a la formación de dentina nueva y maduración de la raíz.
  • 55. Ingeniería de tejidos y regeneración tisular Un ejemplo esquemático de la propuesta de inserción gradual de pulpa de ingeniería de tejidos en el escenario clínico . George T.-J. Huang, DDS, The Hidden Treasure in Apical Papilla: The Potential Role in Pulp/Dentin Regeneration and BioRoot Engineering. J Endod. 2008 June ; 34(6): 645–651. doi:10.1016/j.joen.2008.03.001
  • 56. Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study Wataru Sonoyama, D.D.S., Ph.D. 4, Yi Liu, D.D.S., Ph.D. 3, Takayoshi Yamaza, D.D.S, Ph.D.2,Rocky S. Tuan, PhD5, Songlin Wang, D.D.S., Ph.D.3, Songtao Shi, D.D.S., h.D. 2,6, and George T.-J. Huang, D.D.S., M.S.D., D.Sc. 1,6 J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021.
  • 57. Antecedentes Se han aislado y caracterizado en humanos células madre de pulpa dental (DPSCs) de dientes permanentes Células madre a partir de la pulpa de los dientes deciduos exfoliadas (SHED) DPSCs son capaces de diferenciar en odontoblasto y producir dentina ectópico en el espacio subcutáneo de ratones . Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 58. Antecedentes SHED parecen ser capaces de formar odontoblastos y osteoblastos cuando son trasplantados en ratones inmunodeficientes. Se descubrió otro tipo de MSC humanos … las de la papila apical (SCAP), parecen ser diferentes población de células madre de DPSCs . Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 59. Materiales y Métodos terceros molares (n = 10) Con raíces saludables e inmaduros Pacientes (6 donantes 16-24 años de edad) en las Clínicas de Odontología de la Universidad del Sur de California y la Universidad de Maryland. La médula ósea se obtuvo de los huesos largos de una paciente sana (~ 20 años de edad) sometida a cirugía ortopédica en el Walter Reed Army Medical Center. Protocolo y consentimiento informado Las muestras del diente fueron almacenadas y transportadas en medio de los laboratorios. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 60. Cultivo celular  Papila apical de raíz se separa ligeramente de la superficie de la raíz  Es llevada a una solución de 3 mg / ml de colagenasa tipo I y 4 mg / ml dispasa durante 30 minutos a 37 ° C. Las únicas células que se obtuvieron al pasar por un filtro fueron de 70 micras de suspensiones SCAP Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 61. • Cultivadas con Medio de Eagle α-Modificado Complementado con un 15-20% de suero bovino fetal, 100 mM de ácido L-ascórbico 2-fosfato, 2 mM L-glutamina, 100 U / ml de penicilina 100 mg / ml de estreptomicina a 37 ° C en 5% de CO2. EVALUACIÓN DE LA FORMACIÓN DE COLONIAS: día-10 se fijaron con 4% de formalina ≥ 50 agregados de células se tiñen con azul de toluidina 0,1%. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 62. DPSCs y (BMMSCs) fueron aislados y cultivadas como se ha descrito anteriormente SCAP fueron cultivadas en: Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) 100 unidades / ml de penicilina 100 mg / ml de estreptomicina Células fueron 25 ng / ml Fungizone, subcultivadas a 1:3, cuando llegaron a ~ 85% de confluencia. 10% FBS preseleccionados. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 63. Análisis de la proliferación celular in situ Se tomo la papila apical de las puntas de las raices Cultivaron y etiquetados con bromodeoxyuridina (BrdU) . La concentración de BrdU utilizado fue el mismo en las células descritas anteriores . Después de 3,5 y 18 horas de la incorporación BrdU Los tejidos fueron fijados y desmineralizadaos Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 64. Análisis de la proliferación celular in Las muestras fueron seccionadas y situdesparafinadas para tinción inmunohistoquímica de células BrdU positivos con anticuerpos anti-BrdU. Las células teñidas positivamente se contabilizaron en las zonas seleccionadas al azar en un microscopio de luz. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 65. INDUCCION OSTEO/DENTINOGENICA Condiciones para la inducción de la acumulación de calcio dadas por el medio. MEDIO OSTEO / DENTINÓGENICO contiene los elementos básicos mencionados además de: 10 nM dexametasona, 10 mM β-glicerofosfato 50 mg / ml de fosfato de ascorbico  25 dihidroxivitamina D3 calcio acumulada fue detectado con la tinción 2% Rojo de alizarina S (pH 4,2) . Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 66. INDUCCION ADIPOGENICA Medio adipogénico contiene básicos los elementos más: 1 dexametasona μM, 1 mg / ml de insulina 0,5 mM IBMX (3-isobutil-1 - methylxantine). Aplicación de gotas de aceite acumulado en las células después de la diferenciación adipogénica se tiñeron con el rojo reactivo O. INDUCCIÓN NEURÓGENA Las células fueron cultivadas en la presencia de Suplemento B27, bFGF (40 ng / ml) y EGF (20 ng / ml) . Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 67. DE CONTROL NEGATIVO RATÓN Anticuerpos DSP (LF-21)………………………………… (Dr. Larry Fisher, NIDCR / NIH) STRO-1 …………………. (Dr. Stan Gronthos, del Instituto de Medicina y anti-FGF incluido básica (FGF),  TGFβRI Y TGFβRII Ciencias Veterinarias, Australia), nestin, neurofilamento M (NFM) NSE (enolasa neuronal específica),  núcleos neuronalesVEGF 1) Flt-1 (Receptor de (Neun)  Flg (FGFR1) y FGFR3 de Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz  2 ', 3'-nucleótido cíclico-3'- deLF-120) sialophosphoprotein hueso (BSP, la fosfodiesterasa (CNPase) de fosfatasa Chemicon alcalina (ALP, LF-47) CONEJO Osteocalcina (OCN, LF-32) βIII anti-tubulina de Promega y monoclonales anti-CD146/MUC18  anti-fosfatasa alcalina (ALP) (FL-47)  la matriz extracelular phosphaglycoprotein (MEPE) (LF-155) de la Dra. L. (glicoproteína melanoma asociada) de Chemicon. Fisher  anti-endostatina, ácido glutámico  descarboxilasa (GAD) de Chemicon. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 68. Secciones desparafinadas fueron inmersas en 3% H2O2/metanol por 15 minutos para apagar la actividad de peroxidasa endógena Se incubaron con anticuerpos primarios (1:200 a 1:500 diluciones). Isotipo de concordancia de anticuerpos de control se utiliza en las mismas condiciones durante 1 hora. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 69. Tinción inmunohistoquímica enzimática, polímero Zymed SuperPicTure (Zymed / Invitrogen) Posteriormente, las secciones fueron contrastados con hematoxilina. Para el análisis de immunocitofluorescencia, las células fueron subcultivadas en ocho dispositivos en la cámara (2 ×10 a la 4 células por campo) Las células fueron fijadas en Formaldehído al 4% durante 15 min y luego bloquearon y se incubaron con anticuerpos primarios (1:200 - Diluciones 1:500) por 1 h, respectivamente. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 71. Características histológicas de la papila apical Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 72. Los resultados demuestran que papila apical contienen 2 - a 3 veces más células BrdU positivos que los de tejido de la pulpa en el mismo diente 3,5 horas o 18 horas después de la incorporación BrdU. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 73. Se examino la expresión in situ de marcadores osteogenicos y dentinógenicos en papila apical. DSP, ALP, BSP, y OCN inmunohistoquímica positiva sólo en odontoblastos alineados en contra de la recién formada la dentina (fig. 3), mientras que ninguno de estos marcadores se han detectado en la papila apical. Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 74. Potencial: osteogénico dentinogénic o adipogénico Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 75. Inmunofenotipo en los cultivos de SCAP Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 76. Expresión de marcadores neurales en SCAP Wataru Sonoyama, Characterization of Apical Papilla and its Residing Stem Cells from Human Immature Permanent Teeth –A Pilot Study, J Endod. 2008 February ; 34(2): 166–171. doi:10.1016/j.joen.2007.11.021
  • 77. Papila dental ha sido considerada como la fuente de los odontoblastos durante el desarrollo dental. En general se cree que la formación de dentina en la raíz es el resultado de la señalización en la papila apical y las células mesenquimatosas indiferenciadas adyacentes, que luego se convierten en odontoblastos y son responsables formación de la dentina radicular. La localización anatómica de las células mesenquimatosas indiferenciadas no ha sido claramente definida.Pueden encontrarse, ya sea en pulpa o papila apical. La pulpa dental también existe poblaciones de células mesenquimatosas indiferenciadas que se sabe que son capaces de diferenciarse en odontoblastos nuevos para reemplazar los odontoblastos originales que se han perdido.
  • 78. DPSC aislados a partir de pulpa han demostrado la capacidad de diferencian en odontoblastos células y producir dentina ectópica en inmunocomprometidos ratones. Las células de papila apical proliferan mas rápido y en mayor cantidad comparadas con las de pulpa dental. Una de las propiedades de las MSC de adultos es que normalmente permanecen en un no-proliferativo, estado de reposo en vivo hasta estimulado por las señales provocadas por el daño tisular y la remodelación haciendo que entren en el ciclo celular. BMMSCs son el MSC estándar de oro en términos de multipotencialidad SCAP y DPSC, parecen tener un perfil diferente de multipotencia y están más comprometidos con osteo / dentinogenenesis.
  • 79. CONCLUSIONES •Las células madre, junto con la manipulación genética, van a constituir dos pilares básicos de la medicina de los próximos años. • La tecnología genética impedirá la aparición de muchas enfermedades inscritas en nuestros genes. • El entendimiento de la biologia de las células Stem dentales y el principio de la ingenieria de tejidos nos proporciona una mejor base de conocimientos para establecer planes de tratamiento clinicos mas adecuados.
  • 80. PERSPECTIVAS La implementación y mejoría de las técnicas de cultivos de las células madre humana nos ofrece la posibilidad de acercarnos al conocimiento de los eventos que controlan la biología y la medicina humana. A pesar del avance vertiginoso en el campo de la investigación de las células stem es todavía mucho lo que queda por investigar sobre ellas.
  • 81. PERSPECTIVAS Regeneración dental Y periodontal Regeneración tisular Alternativa terapéutica funcional para mejorar el estado del paciente