2. FASES
MINERALES
• Numerosos fenómenos biológicos de mineralización
tisular.
• Los tipos de minerales implicados son restringidos.
Calcita
Aragonita
TEJIDOS DUROS
Ácido sílico
Minerales en forma cristalina
coelestina
apatita
witlockite
3. FASES
MINERALES
Calcita CaC03,
Aragonita Moluscos, artrópodos,
Ácido silico Diatomeas.
coelestina Radiolares
apatita Dientes, esqueleto
witlockite Calcificaciones patológicas.
Fosfato octacálcico
Los fosfatos de calcio poco solubles (apatita) son de gran interes por
ser componentes del esqueleto y la dentina
4. TEORIAS
•La formación de la fase mineral en un tejido calcificado no es
un fenómeno biológico fortuito.
Correlación entre precipitación mineral & desarrollo tisular general
Ej: PRECIPTACION DENSA,
cristales HA alrededor de la trama
colágena del hueso compacto
• Coincidencia entre el depósito mineral, la presencia de
células y eventos metabólicos específicos
Macromoléculas no colágenas (osteocalcina,
fosfoproteínas, fosfatasa alcalina, amelogeninas)
¿Las interacciones moleculares y los procesos físico-químicos...?
5. MECANISMOS
Posición del problema
a). Tipo de mineral:
•Gran número de compuestos fosfocálcicos que pueden ser
sintetizados, aislados y estudiados (métodos analíticos y
estructurales)
•Compuestos inestables a pH 7, recristalizan en medio acuoso a un
estado sólido termodinámicamente estable = Hidroxiapatita.
b). Los hechos:
•Iones circulantes en mamíferos permanecen en rápido intercambio
con el esqueleto.
La concentración plásmatica: Ca2 = 1,3 mM
HPO42- = 1 mM
6. • SISTEMA DE CONTROL SELECCIONADO POR EL
PROCESO DE EVOLUCION
flexible y controlable por la actividad celular
•La solubilidad del hueso es constante y en equilibrio con el plasma sanguíneo.
•[Ca2+], [HPO 2-], [OH-] interrelacionadas e influenciadas por la alimentación.
4
• Las concentraciones permanecen en límites
Exigencias biológicas estrechos
(metabolismo de órganos y células)
• La fase mineral del esqueleto constituye un
tampón para esos iones
(homeostasis intestinal y renal)
• Durante el crecimiento la mineralización se
produce en zonas nuevas
7. DEFINICIONES
• NUCLEACION: Paso de una fase líquida al estado sólido.
Formación del primer núcleo sólido o germen.
• NUCLEACION HOMOGENÉA: Cuando el medio mineralizable
está LIBRE de cualquier elemento diferente al calcio o fosfato.
• NUCLEACION HETEROGENÉA: Cuando el medio mineralizable
CONTIENE partículas o elementos diferentes al calcio o fosfato que
poseen un efecto catalizador
•Nucleación Primaria: Es la nucleación homogénea y heterogénea.
•Nucleación Secundaria: Es aquella que se produce en presencia de un cristal que
ya está en solución.
• EPITAXIA: Crecimiento de un cristal en contacto de otro material
cristalino que actúa como un esbozo.
8. INICIO DE LA MINERALIZACION
¿Como a partir de una solución iónica por debajo del
producto de solubilidad se puede constituir una fase sólida?
MECANISMO BOOSTER (DRIENSSENS 1982)
Por medio del cual se produce un aumento del producto
iónico por encima del nivel de precipitación espontánea.
•COMPARTIMENTOS
(sitios donde aumenta la concentración de iones)
1. COMPARTIMENTOS VERDADEROS
A. VESICULAS MATRICIALES B. MITOCONDRIAS
2. ZONAS ASIMILABLES A COMPARTIMENTOS
9. COMPARTIMENTOS
(sitios donde aumenta la concentración de iones)
1. VERDADEROS
•Organelos membranosos intracelulares de
25 - 200 nm de diámetro, PAS +.
• Los primeros depósitos minerales se
• Contienen glucoproteínas, lípidos,
localizan dentro y alrededor de las
proteoglucanos, y una fuerte actividad PAL
vesículas.
• Las membranas concentran Ca2+
• Los agregados crecen hasta formar
NODULOS DE CALCIFICACION.
• Presentes alrededor de condrocitos, en
el hueso esponjoso medular, no se
observan en ESMALTE dental .
B. MITOCONDRIAS
• Concentran Ca2+ para liberarlo súbitamente y que reaccione con el
fósforo inorgánico abundante en el citosol. (FOSFATO DE CALCIO).
10. COMPARTIMENTOS
2. ZONAS ASIMILABLES A COMPARTIMENTOS
• ESPACIOS DE COLAGENO (grupos químicos reactivos)
+ Los iones se acumulan a lo largo de las fibras colágeno.
+ Existe una estrecha relación entre las fibrillas de colágeno
y las sustancias inorgánicas desde las primeras etapas de la
mineralización.
LAS FIBRILLAS SE CONSIDERAN INDUCTORES Y
GLIMCHER, 1976
REGULADORES DE LA MINERALIZACION.
+ El inicio de la nucleación se podría hacer a partir de pequeños nódulos
cristalinos desprendidos de los cristales HA existentes.
+ Esos nódulos quedan atrapados en los espacios colágenos para permitir el
crecimiento del cristal.
11. INICIO DE LA MINERALIZACION
¿Como a partir de una solución iónica por debajo del
producto de solubilidad se puede constituir una fase sólida?
INTERVENCION DE INICIADORES MOLECULAS ORGÁNICAS
A. FOSFOPROTEINAS
•Fuerte afinidad por el Ca2, para formar un complejo
terciario con el Ca2 y P04 (SITIOS DE NUCLEACION).
Se fijan cerca de los espacios de colágeno.
B. PROTEINAS ACIDAS
• La Osteocalcina (proteína ácido γ carboxiglutámico
se observan en donde los cristales HA se orientan a lo
largo de la matriz colágeno)
C. FOSFOLIPIDOS ACIDOS
•Inducen in vitro la formación de HA en una solución
saturada de fosfato de calcio. (fosfatidilserina / Inositol)
D. COLAGENO
• En tejidos duros contiene fosfato, potenciales sitios
de inicio de la mineralización. Las proteínas ligadas al
colageno tienen fuerte afinidad por las APATITAS.
12. INICIO DE LA MINERALIZACION
¿Por qué los tejidos que contienen nucleadores potenciales NO se mineralizan o
bien por qué la mineralización se produce en momentos específicos?
INTERVENCION DE INIHIBIDORES
• Al bloqueo de sitios de nucleación
• A la competencia con iones indispensables, impidiendo la precipitación
de fosfato de calcio, el crecimiento y agregación de cristales.
A. PIROFOSFATOS
• Los iones P2O7 ocupan los sitios del fosfato HPO2- inhibiendo a baja [ ]º la
precipitación de fosfato de calcio. La PAL presenta actividad pirofosfatasica.
B. MAGNESIO & CITRATO
• Impiden la evolución de la fase amorfa mineral hacia la morfología cristalina.
C. PROTEOGLICANOS
• Son un obstáculo, al despolimerizarse se desactiva la inhibición.
13. CRECIMIENTO DEL CRISTAL
Aumento de la masa mineral que determina la NATURALEZA, NUMERO,
TALLA Y FORMA de los cristales.
Los procesos de regulación involucran:
♠ INTERACCIONES CON MOLECULAS ORGANICAS O MINERALES:
-
ATP, PPi, Mg2+, F , fosfoproteínas,proteínas séricas, proteínas
ácidas, fosfolípidos ácidos, colágeno.
♠ AUMENTO DEL ESPACIO DISPONIBLE DEBIDO A LA
DEGRADACIÓN DE PROTEOGLICANOS O AMELOGENINAS.
FASES:
(Ca2+) + (Pi) Brushita Fosfato de calcio amorfo
HIDROXIAPATITA Fosfato octocálcico.
• FASE TERMINAL ESTABLE
14. CRECIMIENTO DEL CRISTAL
TEORIAS
1. Control de la velocidad y repartición del crecimiento en cuanto a la
talla y número de cristales.
Diferencia en el crecimiento en longitud y espesor de
un cristal (ESMALTE DENTAL)
2. Control del cese de crecimiento; cuando se define la talla y forma de
los cristales se observa la detención del crecimiento.
Los parámetros físico-químicos no son los únicos que controlan el
crecimiento del cristal.
In vitro # In vivo CONTROL PROTEICO
15. BIOMINERALIZACION DENTAL
TEJIDOS DENTALES ESTRUCTURA DENTAL
MINERALIZADOS : MINERALIZADA :
•Dentina
•Esmalte
•Cemento
• Proceso común
de algunos tejidos • Proceso de • Proceso exclusivo
mineralización del organismo
conectivos.
especifico
Colágeno, Proteínas Proteínas específicas
no colágenas
•Proceso de
PULPA DENTAL envejecimiento.
• Patologías
16. BIOMINERALIZACIO
DENTINA N
• Intertubular.
• Peritubular CEMENTO
• Circumpulpar
• Manto
•El proceso de
mineralización es
especifico
• Microestructuras derivadas de la célula
• Vesículas matriciales.
• Debris celulares.
• M.E.C. secretada por la célula
El PO4 y Ca2+ se acumulan, se combinan y estabilizan para
formar HIDROXIAPATITA
17. Estructura derivada de
Tejido dental Componentes implicados
la célula o la matriz
Fosfolípidos mb.
Vesículas matriciales Manto dentina Proteoglicanos.
Microestructuras
Cemento acelular
celulares Mineralizaciones Anexina I.
intracelulares
Fosfolípidos mb.
Débris celulares Pulpolitos Proteoglicanos.
M.E.C.
Colágenos I,V,VI
Mineralización inducida Proteínas colagenas Dentina Intertubular
P. Fosforiladas
por la M.E.C. no colagenas
DSP no fosforilada
Cemento celular
Proteoglicanos
acelular
Proteína GLA
fosfolípidos
Proteínas séricas
Factores de
crecimiento
proteínas no colagenas Amelogeninas
Dentina Peritubular
M.E.C. Enamelinas
Lípidos
Esmalte Proteoglicanos
Glicoproteínas
18. MICROESTRUCTURAS DERIVADAS DE LA
CELULA
ENZIMAS
1. Vesículas matriciales
•PAL y Pirofosfatasa
2. Débris celulares
•Adenosintrifosfatas
• Protrusiones /fragmentaciones celulares, que se a
observan al inicio de mineralización.
•Nucleótido-3fosfato
(Dentina de Manto, inicio de cementogénesis) pirofosfohidrolasa.
•Organelos asociados a la membrana celular,
trilaminados, 30-200 nm de diámetro. •Metaloproteinasas
(lugares iniciales de mineralización.)
FOSFOLIPIDOS
• Composición y propiedades químicas específicas • Fosfatidilserina.
diferentes a la membrana celular. ANEXINA II.
• Esfingomielina.
(se originan de la membrana celular)
(Calcio y fosfato inorgánico) • Glucoesfingolípidos
• Colesterol libre
19. • Estas enzimas producen un ↑↑ de la concentración de
fosfato orgánico dentro de la vesículas matriciales.
– Anexina II (proteína dependiente de fosfolípidos y
fijadoras de Ca++)
– Los fosfolípidos son distintos de aquellos de la
membrana celular
∀↑ ↑ fosfatidilserina
• Esfingomielina
• Glucoesfingolípidos
• Colesterol libre
• No poseen fosfatidilcolina
20. • Grandes cantidades de Ca++ y fosfato inorgánico
están presentes en las V.M.
• En los períodos iniciales de calcificación se
observa en el cartílago en crecimiento dentro
de las V. M. (Fosfato octacálcico)
• En etapas tardías el mineral cristalino adopta
una apariencia más similar a la H.A.
(Bonucci, 1967. Anderson 1967)
21. • En los estadios iniciales de la formación de dentina
de manto y durante la formación inicial de cemento se
observa por difracción electrónica a las V.M. como
las únicas estructuras que poseen cristales de H.A.
• Esto sugiere que las V.M. están involucradas en la
mineralización durante algunos estadios de
formación
(Yamamoto 1960, Hayashi 1983, Kogaya / Furuhaschi 1988)
22. • Se han observado depósitos minerales amorfos
asociados con la membrana celular de
odontoblastos jóvenes y de condrocitos
(Almuddaris, Dougherty 1979)
• Estos depósitos amórfos de PO4 y Ca++, asociados a la
membrana celular, se han observado en vesículas que
protruyen desde la superficie de preodontoblastos y
de odontoblastos jóvenes
• Podría estar involucrados en la formación de V.M.
23. • Se ha observado gránulos amorfos intracelulares que
contienen Ca y fosfato en las mitocondrias
(SAYEGH y Escaigi 1984)
– Odontoblastos comprometidos en la mineralización
dentinal, pero no se observan cuando la
mineralización es avanzada
• El acumulo de depósito internos de Ca++ regula los
niveles de Ca++ en el citosol
– Permite la formación de tales agregados
independientemente de la etapa de mineralización
extracelular
Esto está regulado por las anexinas
24. • En la MEC la mineralización ocurre a través de
débris celular que se localizan en la vecindad
de los nódulos de calcificación durante la
biomineralización
(Cartílago Ghadilly y Lalonde 1981)
(Osteoblastos inl-vitro, Zimmerman y col 1991)
(Osificación de los huesos largos, Zimmerman 1994)
25. • También se ha observado en cultivos celulares de
pulpa dental
– Mineralización intracelular
– Necrosis celular y
– Formación de débris celular / o vesículas
(debida a fragmentación celular)
(Thoneman y col 1994)
• Los procesos de mineralización asociados con
microestructuras derivadas de la célula ocurren
principalmente durante:
– Formación del manto de dentina, cemento inicial
– Cultivo de células pulpares
26. • La mineralización de los tejidos duros del diente
(esmalte y dentina)
– Transformación de la M.E.C. en un tejido
calcificado
• La dentina intertubular resulta a partir de la
mineralización de una MEC compleja que
contiene colágeno como la principal proteína y
varias proteínas fosforiladas y no fosforiladas
así como GAG’S libres y lípidos
27. • El esmalte en contraste no posee colágeno
y es un buen ejemplo de mineralización no
colágena
– A pesar de los débris celulares están
presentes dentro del esmalte en
formación, estos no desempeña un papel
de vesícula matricial
28. DENTINOGENESIS
MINERALIZACION DE LA
DENTINA INTERTUBULAR CIRCUMPULPAR
• Desde un punto de vista estructural, la dentina
intertubular resulta de la Σ y secreción por los
odb’s de una M.C.E. colágena que constituye la
predentina mineralizándola para transformarla
en dentina
29. • Los cuerpos de los odb’s están implicados
en la Σ de moléculas colágenas y no
colágenas
– En la porción distal, las uniones de tipo
gap y las uniones semejantes a
desmosomas unen las mb. plasmáticas
de células adyacentes.
existen pocas tight junctions
30. • Estos complejos de unión sin embargo forman
una barrera que filtra y permite el paso de
iones, componentes séricos y algunos
compuestos de la pulpa que difunden entre las
células
– Ese material exógeno se incorpora primero
en la predentina que se transforma en
dentina
• Sin embargo la mayor parte de los
componentes de la dentina son Σ por
31. • Los procesos odontoblásticos y sus ramificaciones
laterales son responsables del transporte y secreción
de componentes de la matriz
– Esos componentes son secretados en la parte
proximal de la predentina (Colágeno y PGS) o bien
cerca del frente de mineralización en borde de la
dentina (proteínas no colágenas)
– La reinternalización de los residuos de la matriz
(extensiones N-terminales no helicoidales de
procolágena o los PGS degradados) se efectúa a lo
largo de los procesos odontoblásticos, controlados
por vesículas recubiertas.
32. COMPOSICION DE LA DENTINA
• En peso:
– 70% de la dentina es la fase mineral
– 20% matriz orgánica
– 10% agua
• En volumen
– La fase mineral 50%
– La matriz orgánica 30%
– La fase acuosa 20%
33. • Seria la composición general de la dentina
asumiendo homogeneidad
– Esta bien documentado que ocurre
variaciones considerables entre la
dentina circumpulpar y el manto de
dentina, así como entre la dentina
coronal y radicular
34. COLAGENOS
• Principal componente de la dentina
– 90% de la matriz dentinal
(ausente en la dentina peritubular)
• Col. I principal componente de la dentina
[α1(J)2, α2(I)]
• Col I trimero [α1(I)3 30%
35. • Col III ausente en predentina y dentina normal
– Presente en dentina hereditaria opalescente
• Col V en cultivo de odontoblastos y gérmenes
dentales (3% del colágeno, presente en predentina)
• Col IV al inicio de la dentinogenesis en la mb basal
que separa la primer capa de predentina (dentina de
manto de los ameloblastos presecretores)
• Col VI es un menor componente de la predentina
36. PROTEINAS NO COLAGENAS
• Fosfoproteínas dentinales en un 50% y es el mayor % de
proteínas no colágenas
– Fosfoproteínas altamente fosforiladas (fosforina)
– Fosfoproteínas moderadamente fosforiladas (25% fosfoseina)
– Fosfoproteínas ligeramente fosforiladas (5 - 7% fosfoserina)
– Las fosforinas PM. 155.000 y una conformación en hojas
plegadas β en toda la dentina mineralizada, excepto en la
primera capa externa de la dentina de manto (Takagi y col
1986)
– Ausente predentina y en células pulpares, tampoco en dentina
secundaria y reparativa
– Ausente en la dentinogenesis imperfecta tipo I y II
37. • Es interesante destacar que la dentina radicular contiene la
mitad de la cantidad de fosfoproteínas de la dentina de la
corona (Takaoi y col 1988)
• Al estar presente en dentina y no en predentina las DPP se
cree actúan como nucleadores de la mineralización
• In vitro según la concentración de DPP pueden promover o
inhibir la formación de HA
• Las DPP retardan la tasa en la cual las moléculas de
colágeno se autoensamblan en fibrillas, haciendo que las
fibras formales sean mayores en diámetro (Clarkson y col
1993)
Al introducirlas in vitro durante la fibrilación del col tipo I
38. • Las DPP actúan como P de unión al Ca++ extracelular con
alta afinidad en 2 sitios o dominios específicos
– Las DPP permiten la formación de nuevos núcleos de
mineralización, pero inhiben el crecimiento de los
cristales ya formados
• Las DPP podrían regular el crecimiento del cristal detrás
del frente de mineralización (Fujisawa y col 1987)
– En un sistema in vitro de difusión en gel la fosforina a
baja [ ]° promueve la formación de HA
– A altas [fosforina] el crecimiento de la HA se inhibe
esto sugiere la inhibición de la nucleación secundara
(Boskey y col 1990)
39. • Vale la pena destacar que la DPP
adherida a una superficie induce la
mineralización in-vitro, sin embargo
al estar libres en solución las DPP
actúan como inhibidores minerales
(Lussi y col 1988)
40. • LA OSTEONECTINA (SPARC)
– Glicoproteína fosforilada, con una estructura
que inhibe el crecimiento de HA
– Promueve la fijación de Ca y P al colágeno
desnaturalizado
• En dientes humanos, la predentina, los
odontoblastos y sus prolongaciones presentan
una fuerte tinción inmunohistoquímica y la
presencia de mRNA por hibridización in.situ en
odontoblastos
41. • LA OSTEOPONTINA (OPN), (BSP I)
– Fosfoproteina ósea de 44 kDa presente en dentina
– Estructura α helicoidal, con un bucle de unión al Ca++
rico en acido aspartico
– Esta glicoproteína fosforilada es rica en ácido aspártico,
serina y ácido glutámico posee 12 fosfoserinas
• La secuencia RGD (Arg-Gl - Asp) esta involucrada
en la adhesión y migración de fibroblastos y
odontoblastos por unión a las integrinas
• El mRNA OPN esta presente en odontoblastos
• Como proteína fosforilada en OPN puede promover la
formación de fases minerales en dentina
43. • Las BSP II posee una secuencia RGD y promueve la
adhesión y migración de células, pero menos que la
OPN
• Las BSP promueven la fibrilogenesis de col tipo I
– Se detectan pocas cantidades de BSP II en dentina
• En estadios iniciales de desarrollo dental no
esta presente
• Al día 21 de desarrollo en incisivos
mandibulares de rata hay un intenso marcaje
• Esta proteína puede mediar el estado inicial de
mineralización (Chen y col 1992)
44. Sialoproteínas no fosforiladas
• Sialoproteína dentinal
– Glicoproteína de 95 kDa
– Glicoproteína rica en ácido siálico
• La DSP posee abundantes:
– Ácido aspártico
– Ácido glutámico
– Serina y glicina
– No posee cisteína no fosfato
– 30% de carbohidratos
• 9% ácido siálico
45. ∀Σ por los odontoblastos, es secretada en
predentina y dentina, se distribuye
alrededor de los procesos odontoblastos
• No posee propiedades de adhesión
celular, como las otras sialoproteínas
46. OSTEOCALCINA
(Proteína Gla Dentina)
• Es análoga a la proteína ósea que contiene ácido γ
corboxiglutámico (Proteína Gla)
– Esta molécula no presenta efectos en la formación
mineral pero retarda el crecimiento de HA
– El marcaje es ligero en la predentina
(Camarda y col 1987)
– En dientes humanos no se observa marcaje en
odontoblastos ni en dentinas
• Solo la dentina de manto reacciona con el Anti- OC
47. PROTEOGLICANOS
• En dentina se han identificado como las principales
componentes el C4S y C6S (Pincus 1950)
• Se han demostrado que existen 2 grupos de PG’S
(Predentina) Pd- PGI y Pd-PGII
– El PdPGI poseen un mayor peso molecular y largas
cadenas de GAG conformadas por isoméro C4-S y C6S
– El Pd-PgII y D-PGCCM 70.000 - 120.000) posee pequeñas
cadenas de GAG’S xompuestas exclusivamente de
cadenas C-4-S
• Todos esos PG’S no interactúan con el ácido
hialúronico
48. • Se ha identificado pequeños proteoglicanos
como decorina y biglycan
– C4-S y Decorina se localizan en dentina
– C4-S, C6-S y KS, versican y biglycan en predentina
(TAKADI y col 1990)
• Por experimentos en MET e histoquímica
(colorantes catiónicos, complejos oro /
hialuronidasa) se observan PG’s entre los
espacios de la trama colágena en predentina
– En dentina parecen estructuras similares a agujas o
fantasmas (Sombras de cristales HA), asociadas a la
superficie de colágeno
49. • Los PG’s son Σ y secretados en la predentina
próximal en la unión entre el cuerpo celular y la
predentina
– (Frente de mineralización)
• Los PG’s son los principales componentes de
la S.F. Amorfa
– Proveen un medio adecuado para el
transporte y difusión de iones (Goldberg y
col 1987)
50. • En la dentina los PG’s estan estrachamente
asociados con las fibras colágeno
– Se observa como líneas punteadas o
estructuras cristalinas ocupando el
espacio con algunos fosfolípidos, como
sucede en otros tejidos calcificados
51. • Al iniciarse la mineralización se observa una
disminución de PG’s
– Experimentos in vitro demuestran que
durante la formación de HA se inhibe en
geles colágeno por el condroitin sulfato
(Chen y Boskey 1985)
– In vivo los PG’s podrían promover la
mineralización, actuando como un
reservorio de intercambio iónico de Ca++
(Hunter 1991)
52. • Los proteoglicanos
inmobilizados en un sustrato
de soporte inducen la
formación HA
• En solución los
proteoglicanos inhiben la
formación de HA y el
crecimiento
(Linde y col 1989)
53. CONCLUSION
• En la predentina, actúa como un gel hidratado
amorfo participan en el transporte, difusión y
actúan como inhibidores de HA
• En la dentina los PG’s se absorben a la
superficie del colágeno y promueven el
inicio de HA
54. PROTEINAS SERICAS
• Albúmina: esta presente en dentina
– Por auto radiografía, con albúmina marcada
se observó la incorporación del precursor en
la predentina, y posteriormente la difusión
entre los odontoblastos (Kinoshita 1979)
• α 2HS Glucoproteína
– PM 50 kDa, presente en dentina peritubular
55. LIPIDOS
• La distribución de fosfolípidos varia entre la dentina y la
predentina (Shapiro y col 1966)
• Algunas clases de fosfolípidos se asocian a la fase mineral y
están involucrados en la biomineralización de la dentina
– Los fosfolípidos se localizan entre los espacios de
colágeno en la predentina
– En la dentina se observan a lo largo de fibras individuales o
en la superficie de grupos de fibras colágenas
• Los fosfolípidos podrían ser los responsables de los niveles
elevados de Ca++ en la predentina distal, antes de cualquier
precipitación visible en el frente de mineralización
56. FACTORES DE CRECIMIENTO
– IGF - I
– SGF / IGF II
Presentes en dentina
– TGF β
Pueden actuar como citoquinas o
podrían fosilizarse durante la
formación de dentina