UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA
INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS
DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃO
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA I –...
• A imunofluorescência permite a detecção e localização de
antígenos em células e tecidos utilizando anticorpos
específico...
• Baseia-se na capacidade das moléculas de anticorpo
se ligarem covalentemente a fluorocromos sem perder
sua reatividade e...
o FLUOROCROMOS:
• Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados
constituídos de anticorpos ligados covalentem...
o FLUOROCROMOS:
•São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios
clínicos para imunofluorescência.
•Isotion...
o MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA:
• A reação imunofluorescente que é desencadeada no
microscópio de epifluorescência ocor...
DIRETA INDIRETA
Detecção de Ag Detecção de AcDetecção de Ag
o TIPOS DE REAÇÃO:
O anticorpo específico marcado com
Fluorocromo (conjugado) é adicionado
e se fixa ao antígeno, formando um
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o VANTAGENS
• Alta especificidade e sensibilidade
• Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua
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o APLICAÇÕES
• Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes,
em cortes de tecidos etc. Também é uti...
PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS
Incuba-se a célula ou tecido em que se
quer pesquisar o antígeno com o
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Antígenos padronizados são fixados a
lâminas de vidro.
PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS
Realizam-se lavagens para a retirada
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o VANTAGENS
• Sensibilidade
• Especificidade
• Reprodutibilidade
• De simples padronização e execução
• O mesmo conjugado ...
o APLICAÇÕES
• Medicina humana
• Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas
como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS...
As técnicas de imunofluorescência ainda são
empregadas na rotina laboratorial, mas estão sendo
gradativamente substituídas...
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Imunofluorescencia

  1. 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃO DISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Aretha Alves Borges da Silva sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
  2. 2. • A imunofluorescência permite a detecção e localização de antígenos em células e tecidos utilizando anticorpos específicos, marcados com fluorocromos, de modo que a localização dos antígenos se torna visível ao microscópio de fluorescência. • De acordo com o mesmo princípio, podemos detectar e localizar anticorpos em fluidos biológicos usando seu antígeno correspondente.
  3. 3. • Baseia-se na capacidade das moléculas de anticorpo se ligarem covalentemente a fluorocromos sem perder sua reatividade específica com o antígeno. • Teste qualitativo/semi-quantitativo. • Método de alta sensibilidade e alta especificidade.
  4. 4. o FLUOROCROMOS: • Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas fluorocromos. • 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos. • Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes.
  5. 5. o FLUOROCROMOS: •São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios clínicos para imunofluorescência. •Isotionato de fluoresceína e compostos da rodamina são os fluorocromos mais usados para conjugação com anticorpos para torná-los fluorescentes sob condições adequadas de iluminação.
  6. 6. o MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA: • A reação imunofluorescente que é desencadeada no microscópio de epifluorescência ocorre através da emissão de luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto comprimento de onda (UV). • Para deixar passar somente a emissão secundária desejada, devem-se utilizar filtros apropriados dependendo da cor do fluorocromo.
  7. 7. DIRETA INDIRETA Detecção de Ag Detecção de AcDetecção de Ag o TIPOS DE REAÇÃO:
  8. 8. O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se fixa ao antígeno, formando um imunocomplexo estável. O anticorpo não ligado é removido por lavagens. O preparado é observado em microscópio de fluorescência. Y Y Y Y Y Y Y Antígeno pesquisado Conjugado
  9. 9. o VANTAGENS • Alta especificidade e sensibilidade • Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização. o DESVANTAGENS • Alto custo do microscópio de fluorescência • Necessidade de um conjugado para cada antígeno que se deseja identificar ou localizar • Subjetividade da leitura
  10. 10. o APLICAÇÕES • Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes, em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais. • Em bacteriologia, um dos poucos métodos de IFD ainda usados em laboratória clínico é a identificação do Streptococcus do grupo A.
  11. 11. PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS Incuba-se a célula ou tecido em que se quer pesquisar o antígeno com o anticorpo específico obtido em animal ou um monoclonal, levando à formação de um imunocomplexo. Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo não ligante excedente. O preparado é observado em microscópio de fluorescência. YY YYYY A preparação é incubada com um conjugado antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espécie de animal. Y Y YY Antígeno pesquisado Conjugado Anticorpo Monoclonal Y Y
  12. 12. Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro. PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos não ligados. O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado para permitir a formação do complexo antígeno-anticorpo. A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno. Observa-se o preparado em microscópio de fluorescência. YYY Y Y Y YY YY Antígeno padronizado Conjugado Anticorpo pesquisado Y Y
  13. 13. o VANTAGENS • Sensibilidade • Especificidade • Reprodutibilidade • De simples padronização e execução • O mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes • Para determinar as classes e subclasses de anticorpos são utilizados conjugados específicos o DESVANTAGENS • Necessidade de microscópio de fluorescência • Subjetividade na leitura • Não-automação
  14. 14. o APLICAÇÕES • Medicina humana • Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes. • Medicina Veterinária • Toxoplasmose, Neosporose, Raiva, Campilobacteriose Genital Bovina.
  15. 15. As técnicas de imunofluorescência ainda são empregadas na rotina laboratorial, mas estão sendo gradativamente substituídas por testes imunoenzimáticos, principalmente devido à necessidade de microscopia, subjetividade de leitura e impossibilidade de automação.

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