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MÉTODOS
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MÉTODOS
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MÉTODOS
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MÉTODOS
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MÉTODOS
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RESULTADOS
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• Os subtipos de câncer de mama HR⊖HER2⊕ e
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Triple Negative Breast Tumors in African American and Hispanic: Latina Women Are High in CD44⊕, Low in CD24⊕, and Have Loss of PTEN

  1. 1. TRIPLE NEGATIVE BREAST TUMORS IN AFRICAN- AMERICAN AND HISPANIC/LATINA WOMEN ARE HIGH IN CD44⊕, LOW IN CD24⊕, AND HAVE LOSS OF PTEN YANYUAN WU, MARIANA SARKISSYAN, YAHYA ELSHIMALI, JAYDUT V. VADGAMA
  2. 2. INTRODUÇÃO • Portadoras de câncer de mama afroamericanas e latinas têm pior prognóstico que portadores de câncer de mama caucasianas • A causa provável reside na expressão de receptores para esses 2 grupos populacionais: • ER (Estrogen Receptor); • PR (Progesterone Receptor); • HER2 (Human Epidermal growth factor Receptor 2). HR (Hormone Receptor)
  3. 3. TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER (TNBC) • Câncer de mama triplo negativo corresponde a: • ER⊖; • PR⊖; • HER2⊖. • Possuem tratamento limitado, pois não respondem a: • Tamoxifeno, voltado para HR⊕; • Trastuzumabe, voltado para HER2⊕. HR⊖
  4. 4. CANCER-STEM-CELL-LIKE CELLS (CSC) • Células cancerígenas similares a células-tronco • O fenótipo CSC é manifestado por uma maior presença de células CD44⊕ e CD24⊖: pior prognóstico e uso como novos biomarcadores • TNBC tem sido repetidamente associado ao fenótipo CSC
  5. 5. http://www.kegg.jp/pathway/hsa05205(modificado)
  6. 6. http://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?hsa04640+100133941 (modificado)
  7. 7. BIOMARCADORES TRADICIONAIS • Há diversos biomarcadores da via Akt/PI3K, associado ao ciclo celular: • PTEN (Phosphatase and TENsin homologue); • pAkt (phosphorylated Akt); • FOXO1 (Forkhead bOX protein O1a). • Marcador de proliferação: Ki67
  8. 8. http://pathwaymaps.com/maps/676_map.png(modificado)
  9. 9. http://string-db.org/version_9_05/newstring_cgi/show_network_section.pl? limit=0&targetmode=proteins&caller_identity=gene_cards&network_flavor=evidence&identifiers=9606.ENSP00000357643%0D9606.ENSP 00000285814%0D9606.ENSP00000405965%0D9606.ENSP00000305355%0D9606.ENSP00000324020%0D9606.ENSP00000306043%0 D9606.ENSP00000336687%0D9606.ENSP00000209875%0D9606.ENSP00000225603%0D9606.ENSP00000344818%0D9606.ENSP0000 0354522%0D9606.ENSP00000363689%0D9606.ENSP00000336591%0D9606.ENSP00000259335%0D9606.ENSP00000376076%0D960 6.ENSP00000269397%0D9606.ENSP00000343925%0D9606.ENSP00000206249%0D9606.ENSP00000379607%0D9606.ENSP00000329 466%0D9606.ENSP00000361423%0D9606.ENSP00000350941%0D9606.ENSP00000357656(modificado)
  10. 10. NOVOS BIOMARCADORES • Eixo do IGF (Insuline-like Growth Factor): • IGF1 (Insuline-like Growth Factor 1); • IGFBP3 (Insuline-like Growth Factor Binding Protein 3). • CD44 [Cluster of Differentiation 44 (Indian blood group)] • CD24 (Cluster of Differentiation 24)
  11. 11. EIXO DO IGF • IGF1: fator de crescimento sistêmico que se liga a diversas proteínas ligantes, especialmente IGFBP3 • IGFBP3: principal proteína ligante da IGF-1 (atenção: ≠ receptor) ★ Cânceres de mama de pior prognóstico níveis séricos de IGF-1 e de IGFBP3 (∴ ➡ quantidades livres circulantes)
  12. 12. http://pathwaymaps.com/maps/540_map.png(modificado)
  13. 13. OBJETIVOS • Caracterizar diferenças entre subtipos de tumores entre pacientes afroamericanas e latinas • Identificar potenciais biomarcadores associados com progressão tumoral em cada subtipo tumoral • Determinar o prognóstico em pacientes com câncer de mama com diferente expressão de biomarcadores e subtipos de tumores
  14. 14. MÉTODOS • n = 318, dos quais: • 166 eram autodeclaradas afroamericanas; • 152 eram autodeclaradas latinas. • Definição de subtipos de tumor: • HR⊕ e HER2⊕ • HR⊕ e HER2⊖ • HR⊖ e HER2⊕ • HR⊖ e HER2⊖ 4 subtipos de tumor classificados por IHC (imuno-histoquímica)
  15. 15. MÉTODOS • Padrões para cada subtipo de tumor: • HR⊕: >5% de positividade nuclear • HR⊖: <5% de positividade nuclear • HER2⊕: alto, quando >20% de positividade nuclear • HER2⊖: baixo, quando <20% de positividade nuclear
  16. 16. MÉTODOS • Padrões para PTEN: • PTEN⊕: >5% de positividade citoplasmática • PTEN⊖: <5% de positividade citoplasmática
  17. 17. MÉTODOS • Padrões para CD44, sitiado à membrana plasmática e ao citoplasma, para porcentagem de positividade: • 0: negativo; • 1: <10% de células positivas; • 2: 11-50% de células positivas; • 3: 51-80% de células positivas; • 4: 80-100% de células positivas. Porcentagem de positividade ≠ in- tensidade de colo- ração (⊕, ⊕⊕, ⊕⊕⊕)
  18. 18. MÉTODOS • Padrões para CD24, sitiado à membrana celular e ao núcleo, são os mesmos de CD44 • Score final: porcentagem de positividade x intensidade de coloração
  19. 19. COLORAÇÃO POR IHC • Dos 318 blocos disponíveis, apenas 150 blocos, i.e., aqueles com >10% de células tumorais, foram selecionados • Para CD44/CD24 (1º corte): Tratamento com citrato de sódio a 95ºC por 10min Coloração dupla por IHC para CD44/CD24 com anticorpos anti-CD44 e anti-CD24 CD44: 60min em RT, detecção por Permanent Red CD24: 30min em RT, detecção por diaminobenzideno (DAB)
  20. 20. COLORAÇÃO POR IHC • Para PTEN (2º corte): ! ! • Para FOXO1 e pAkt (3º corte): obtidas de outros estudos do mesmo grupo. Tratamento com citrato de sódio a 95ºC por 10min Coloração dupla por IHC para PTEN com anticorpo anti-PTEN 60min em RT, detecção por Vectastain Universal elite ABC kit e visua- lizado por DAB
  21. 21. MÉTODOS • A determinação de IGF1 e IGFBP3 ocorreu por radioimunoensaio (RIA). • Análise estatística: Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier Sobrevida livre de doença (DFS): proporção de pessoas com câncer que atingem recidiva ou metástase Risco relativo (RR) Regressão de Cox: análises uni- e multi-variadas ANOVA: comparação de variáveis quantitativas Qui-quadrado: comparação de variáveis categóricasp-valor < 0,05 é estatisticamente significativo
  22. 22. RESULTADOS • Características demográficas • O subtipo mais prevalente em ambas afroamericanas (49,4%) e latinas (48,7) foi o HR⊕HER2⊖; • O segundo subtipo mais prevalente em ambas afroamericanas (35%) e latinas (28,3%) foi o TNBC (HR⊖HER2⊖).
  23. 23. RESULTADOS • Expressão de CD44, CD24 e outros biomarcadores: • CD44⊖: associado a HR⊕HER2⊖; • CD44⊕CD24⊖: TNBC; • IGF1: mulheres em pré-menopausa; • IGFBP3: sem relações estatisticamente significativas
  24. 24. RESULTADOS • Expressão de PTEN, pAkt e FOXO1: • PTEN⊖: TNBC; • pAkt⊕: CD24⊕; • FOXO1⊖: HR⊖HER2⊕. • DFS: • TNBC e HER2⊕ têm DFS menor que outros subtipos em ambas afroamericanas e latinas; • PTEN⊖ reduziu DFS em afroamericanas, mas não em latinas
  25. 25. DISCUSSÃO • Os subtipos de câncer de mama HR⊖HER2⊕ e TNBC (associado ao subtipo CD44⊕CD24⊖, o fenótipo CSC) são muito comuns em afroamericanas e latinas • PTEN⊖: TNBC em afroamericanas e latinas, com diminuição de DFS naquelas, mas não nestas.

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