Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí.
Curso de Agronomia
Disciplina de Fitopatologia
Apresentador : Jose Fernando M. Gon...
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INTRODUÇÃO
• O vírus em batata mop-top (PMTV) tem partículas
frágeis em forma de bastonete, transmitida pelo
vector plasmó...
• Sintomas Primários: pode ocorrer como arcos
castanhos e círculos na carne de tubérculos de
cultivares suscetíveis em cim...
• Transmissão
• Vetor S.do PMTV se transmite in vivo por
meio de mono cultura .O vírus pode manter a
sua efetividade por m...
OBJETIVO
A detecção, identificação e caracterização de PMTV
usando técnicas convencionais e moleculares.
Fonte: Stock Roya...
MATERIAIS E MÉTODOS
• Exame de Campo: coleção de plantas e amostras de
solos
• Teste “isca do solo”
• Detecção serológica ...
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Tab. 1. Detecção de PMTV em Nicotiana debneyi crescidas por 6-8 semanas em solos virulíferos coleta...
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Tab. 2. Detecção de PMTV em cultivares comerciais cultivadas em vários locais do nordeste do Paquis...
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Fig. 1. Detecção de PMTV através de bioensaio com solos contaminados. A. Nicotina debneyi
apresenta...
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Fig. 2. Detecção de PMTV por RT-PCR em N. debneyi pelos ensaios “bait plant”. A. raizes, B. folhas ...
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Considerações finais
• Através do teste ELISA ou PCR ambos em tubérculos de
batata com arco marrom ou interna sintomas de ...
REFERÊNCIAS
• Ahmad, I., Iftikhar, S., Soomro, MH, Merz, U., 1996. Primeiro relato de
Spongospora subterranea f.sp. subter...
• Arif, M., Reavy, B., Barker, H., 1999b. Engenharia alto nível de proteína
casaco medi-ciado resistência à transmissão do...
• Calvert, EL, Harrison, BD, 1966. Potato mop-top, um vírus transmitido
pelo solo. Pathol Plant.15, 134-139.
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• Harrison, BD, Reavy, B., 2002. Potato Mop Top-Virus. Descrições CMI / AAB de
Fábrica Os vírus, No. 389. Commonwealth Myc...
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Detecção de “potato mop-top virus” em solos e tubérculos de batata utilizando bioensaios bait-plant, ELISA e RT-PCR - Apresentador Jose Fernando M. Gondim - Prof. Milton Luiz da Paz Lima.

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ARIF, M., ALI, M., REHMAN, A., FAHIM, M. Detection of potato mop-top virus in soils and potato tubers using bait-plant bioassay, ELISA and RT-PCR. Journal of Virological Methods, 195:221–227, 2014.

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Detecção de “potato mop-top virus” em solos e tubérculos de batata utilizando bioensaios bait-plant, ELISA e RT-PCR - Apresentador Jose Fernando M. Gondim - Prof. Milton Luiz da Paz Lima.

  1. 1. Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí. Curso de Agronomia Disciplina de Fitopatologia Apresentador : Jose Fernando M. Gondim ARIF, M., ALI, M., REHMAN, A., FAHIM, M. Detection of potato mop-top virus in soils and potato tubers using bait-plant bioassay, ELISA and RT-PCR. Journal of Virological Methods, 195:221–227, 2014. Detecção de “vírus em batata mop-top ” em solos e tubérculos de batata utilizando bioensaios bait-plant, ELISA e RT-PCR. 1
  2. 2. 2
  3. 3. INTRODUÇÃO • O vírus em batata mop-top (PMTV) tem partículas frágeis em forma de bastonete, transmitida pelo vector plasmódio, que -se desenvolve no solo subterrâneo, é uma espécie de tipo do gênero Pomovirus o genoma de RNA de cadeia simples rica em cisteína 8 kDa proteína. • O vírus também foi detectado em zoósporos de Spongospora subterrâneo derivada a partir de cascas de tubérculos selecionados usando tripla sanduíche de anticorpos . • O vetor de PMTV, S. subterrânea também causa sarna em pó doença em tubérculos de cultivares suscetíveis. Infecções com vírus que podem causar sintomas graves em tubérculos de batata. 3
  4. 4. • Sintomas Primários: pode ocorrer como arcos castanhos e círculos na carne de tubérculos de cultivares suscetíveis em cima da batata em plantação em áreas infestadas . • Os sintomas secundários de PMTV são produzidos quando as plantas de batata são cultivadas a partir de vírus de tubérculos infectados , adquirido, após a infecção primária. Os sintomas de produção são, manchas amarelas nas folhas, e o efeito è devido à acumulação e encurtamento dos entrenós. INTRODUÇÃO 4
  5. 5. • Transmissão • Vetor S.do PMTV se transmite in vivo por meio de mono cultura .O vírus pode manter a sua efetividade por mais de 18 anos , ocorre em regiões produtoras de batata do Norte e Central da Europa, e regiões andinas da América do Sul, China e Japão. INTRODUÇÃO 5
  6. 6. OBJETIVO A detecção, identificação e caracterização de PMTV usando técnicas convencionais e moleculares. Fonte: Stock Royalty FreeFonte:cnptia.embrapa 6
  7. 7. MATERIAIS E MÉTODOS • Exame de Campo: coleção de plantas e amostras de solos • Teste “isca do solo” • Detecção serológica através do fungo Spongospora subterranea pelo método ELISA-Direto • Detecção serológica de PMTV em batata e plantas cultivadas em ensaios “bait plant” através do método de ELISA Indireto • Detecção molecular de PMTV em ensaios de “bait plants” (isca planta) e tubérculos de batata – Extração de RNA e sintese de moléculas de cDNA – Reação de polimerase em cadeia (RT-PCR) 7
  8. 8. RESULTADOS E DISCUSSÃO Tab. 1. Detecção de PMTV em Nicotiana debneyi crescidas por 6-8 semanas em solos virulíferos coletados de várias regiões do noroeste do Paquistão 8
  9. 9. RESULTADOS E DISCUSSÃO Tab. 2. Detecção de PMTV em cultivares comerciais cultivadas em vários locais do nordeste do Paquistão 9
  10. 10. RESULTADOS E DISCUSSÃO Fig. 1. Detecção de PMTV através de bioensaio com solos contaminados. A. Nicotina debneyi apresentando sintomas cloróticas em forma de V, demarcando as margens foliares. Aos 4-6 semanas depois do crescimento das mudas que se desenvolveram em solos infestados utilizando o bioensaio “bait-test”. As mudas de N. debneyi foram transplantadas em solos infestados coletadas de várias regiões produtoras de batata do Nordeste do Paquistão. B. Plantas de N. benthamiana mostrando sintomas de mosaico e manchas as 2-3 semanas depois da inoculação por seiva de raízes de N. debneyi utilizadas como fonte para inoculação. 10
  11. 11. RESULTADOS E DISCUSSÃO Fig. 2. Detecção de PMTV por RT-PCR em N. debneyi pelos ensaios “bait plant”. A. raizes, B. folhas de batata de 6-8 semanas de crescimento em solos infestados coletados de varias regiões do nordeste do Paquistão. As áreas amostradas foram: 1. Khwazakhela, 2. Shin, 3. Fatehpur, 4. Madyan, 5. Miandam, 6. Kher Abad, 7. Jukhtai, 8. Senay, 9. Shahgram, 10. Cham Ghari, 11.Ashrait, 12. Mankyal, 13. Kaidam, 14. Balakot, 15. Ghruna, 16. Laikot, 17.Peshmal, 18. Kalam, 19. Gabral, 20. Ashuran, 21. Tarhana, 22. Bilal Town, 23. Academy town, 24.Doraha, 25. Ghitti Ghatti, 26. Baffa, C. controle livre de virus, bandas formadas na posição de 566 bp. 11
  12. 12. RESULTADOS E DISCUSSÃO 12
  13. 13. Considerações finais • Através do teste ELISA ou PCR ambos em tubérculos de batata com arco marrom ou interna sintomas de escurecimento em carne do tubérculo. Concluiu-se que a ELISA ou PCR não conseguiu detectar PMTV em tubérculos sarnentos ou tubérculos com spraing verificou-se PMTV em algum extrato, mas não em outras partes do mesmo tubérculo. Pode ser devida a idade fisiológica ou a temperatura a que os tubérculos foram armazenados isso pode afetar a replicação do vírus,ou a planta mãe foi infectada tarde e tem baixo título do vírus ou até mesmo alta es-pecificidade do TAS-ELISA. 13
  14. 14. REFERÊNCIAS • Ahmad, I., Iftikhar, S., Soomro, MH, Merz, U., 1996. Primeiro relato de Spongospora subterranea f.sp. subterranea na batata, no Paquistão. Planta Dis. 80, 959. • Arif, M., 1995. Estudos sobre Fungo Transmissão e Patologia Molecular da Batata Mop-Top Furovirus. A Universidade de Edimburgo, Reino Unido (tese de doutorado). • Arif, M., Torrance, L., Reavy, B., 1994. Melhoria da eficácia da detecção de batata mop-top furovirus em tubérculos de batata e nas raízes e folhas de plantas de solo- isca.Batata RES. 37, 373-381. • Arif, M., Torrance, L., Reavy, B., 1995. Aquisição e transmissão de batata mop- melhores furovirus por uma cultura de Spongospora subterranea f. sp. subterranea derivadode cystosorus individuais. Ann. Appl. Biol. 126, 493-503. • Arif, M., Reavy, B., Torrance, L., 1999a. Gene leitura através da proteína de batata- mop topo furovirus está associada com a aquisição e a transmissão do vírus através Spongospora f.sp subterranea substerranea. Pak. J. Bot. 31, 225-236. 14
  15. 15. • Arif, M., Reavy, B., Barker, H., 1999b. Engenharia alto nível de proteína casaco medi-ciado resistência à transmissão do fungo da batata mop-top furovirus em Nicotiana benthamiana. Pak. J. Biol. Sci. 2, 478-483. • Arif, M., 2000. Vírus em forma de bastonete por fungos transmissíveis, transmissão e biologia patologia molecular. Pak. J. Biol. Sci. 3, 1194-1212. • Barker, H., Webster, KD, Reavy, B., 1993. Detecção do vírus Y da batata em tubérculos de batata: uma comparação de reacção em cadeia da polimerase e imunoabsorvente ligado a enzimaensaio. Batata RES. 36, 13- 20. • Barker, H., Reavy, B., McGeachy, KD, Dawson, S., 1998. A transformação de Nicotiana benthamiana com gene da capa protéica do vírus da batata mop-top produz uma novela fenótipo de resistência mediada pela proteína de revestimento. Mol. Plant-Micro. Inter. 11,626- 633. • Budziszewska, M., Wieczorek, P., Nowaczyk, K., Borodynko, N., Pospieszny, H.,Obrepalska-Steplowska, A., 2010. Primeiro relato de batata vírus mop-top na batata na Polônia. Planta Dis. 94, 920. • Calvert, EL, 1968. A reação de variedades de batata para enxugar-top vírus. Rec. Agric. Res.(Minis. Agric. Norte. Irlanda) 17, 31-40. 15
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  18. 18. Nascemos sem saber Vivemos aprendendo E morremos sem saber nada 18
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