CENTRO UNIVERSITÁRIO CAMPOS DE ANDRADE 
CURSO DE ENFERMAGEM 
EUNICE AP. DOS SANTOS 
GEOMARA AP. CZERNIAK 
LEILIANE MARTINS...
1. INTRODUÇÃO 
As enzimas são catalizadores protéicos que aumentam a velocidade de 
uma reação química e não são consumida...
2. OBJETIVOS 
2.1 Caracterizar a estrutura da presente amostra; 
2.2 Verificar as reações positivas para atividade, especi...
3. Materiais e Métodos 
3.1 Materiais 
3.1.1 Equipamentos; geladeira, balança analítica, capela, banho 
fervente 100 ºC 
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3.2 Métodos 
3.2.1 Caracterização 
1 Reação de Biureto – Em um tubo pipetar 10 gotas da solução de 
Urease e do reativo de...
4 Resultados 
4.1 Reação positiva pela mudança da coloração azul por azul violeta, 
determinando as ligações peptídicas 
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6 Discussão 
O vermelho de fenol não indica positividade e sim diferenciação de intensidade 
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  1. 1. CENTRO UNIVERSITÁRIO CAMPOS DE ANDRADE CURSO DE ENFERMAGEM EUNICE AP. DOS SANTOS GEOMARA AP. CZERNIAK LEILIANE MARTINS NERI PIRES VERA LUCIA FIGUEREDO CARACTERIZAÇÃO DE UMA ENZIMA CURITIBA 2014
  2. 2. 1. INTRODUÇÃO As enzimas são catalizadores protéicos que aumentam a velocidade de uma reação química e não são consumidas durante a reação que catalisam (CHAMPE et al., 2009). Muitos alimentos contem enzimas, as quais podem causar degradação dos componentes e analisar. Por esse motivo, a atividade enzimática deve ser eliminada ou controlada antes da analise, através de métodos selecionados de acordo com as características do alimento. Um dos métodos mais comuns é de agentes redutores no caso das enzimas com atividade oxidante ( FIGUEIREDO, 2009). A uréase é uma enzima responsável pela catalise da ureia em amônia e dióxido de carbono, de acordo com a reação abaixo: (NH2)2CO + H2O Co2+2NH3 (NH4)2CO3 Esta enzima é encontrada em diversos microrganismo os como bactérias, fungos e também em seres superiores como algumas plantas. (SANTOS, et. al. 2013). Como grande parte dos catalisadores biológicos a estrutura bioquímica da uréase é protéica, apresentando características compatíveis com esta classe de biomoléculas. (SANTOS, et. al. 2013).
  3. 3. 2. OBJETIVOS 2.1 Caracterizar a estrutura da presente amostra; 2.2 Verificar as reações positivas para atividade, especificidade, processo de desnaturação pelo calor e pelos metais pesados.
  4. 4. 3. Materiais e Métodos 3.1 Materiais 3.1.1 Equipamentos; geladeira, balança analítica, capela, banho fervente 100 ºC 3.1.2 Reativos 3.1.3 Vidraria: tubos de ensaio e pipetas 3.1.4 Acessórios: estante para tubos, pipetador, psético com água, conta gotas papel toalha.
  5. 5. 3.2 Métodos 3.2.1 Caracterização 1 Reação de Biureto – Em um tubo pipetar 10 gotas da solução de Urease e do reativo de biureto. 2 Reação de Heller – Em um tubo de ensaio pipetar 10 gotas da solução de Urease e de água destilada. Acrescentar, pela parede do tubo e sem agitar, 2 ml de acido nitrico concentrado. Notar o aparecimento do anel de interfase. 3.2.2 Reações Enzimáticas 3 - Atividade enzimática: marcar dois tubos de ensaio com A e B. No tubo A pipetar 2 ml de tampão fosfato pH7 com ureia, 1 gota de vermelho fenol e 2 gotas da solução de urease. No tubo B pipetar 3 ml da solução tampão fosfato pH 7 sem ureia, 1 gota de vermelho fenol e 2 gotas da solução de urease. 4 - Processo de desnaturação pelo calor: em um tubo de ensaio pipetar 5 gotas da solução de urease e 3 ml de agua destilada. Ferver em BM por 5 minutos. Em outro tubo de ensaio pipetar 3 ml da solução tampão fosfato pH 7 com ureia, 1 gota de vermelho de fenol e 1 ml da solução de urease fervida. 5 - Processo de desnaturação por sais de metais pesados: em um tubo de ensaio pipetar 3 ml da solução tampão fosfato pH 7 com ureia, 5 gotas de cloreto de mercurio, 1 gota de vermellho de fenol e 2 gotas da solução de urease. 6 - Teste da especifidade da enzima: marcar dois tubos de ensaio com A e B. No tubo A pipetar 3 ml de tampão fosfato pH7 com ureia, 1 gota de vermelho fenol e 2 gotas da solução de urease. No tubo B pipetar 3 ml da solução tampão fosfato pH 7 sem tioureia, 1 gota de vermelho fenol e 2 gotas da solução de urease.
  6. 6. 4 Resultados 4.1 Reação positiva pela mudança da coloração azul por azul violeta, determinando as ligações peptídicas 4.2 Heler – Reação positiva pela presença de um anel entre as fases, portanto a amostra é proteica. 4.3 Atividades Enzimática Com Uréia - Maior atividade enzimática com o tampão fosfato da enzima urease. Sem Uréia - Menor atividade enzimática com o tampão fosfato da enzima urease. 5 – A 40 35 30 25 20 15 10 5 0 Platô Enzima Processo de desnaturação Platô
  7. 7. 6 Discussão O vermelho de fenol não indica positividade e sim diferenciação de intensidade de cor. Ele é um indicador de pH que é frequentemente usado em laboratórios de biologia celular. Por causa da especificidade de cada enzima para catalisar reações apenas com substratos adequados ao lugar em que ocorre a reação (sito ativo), substratos diferentes não são catalisados pela enzima devido à forma do sitio ativo.

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