Fuente:Gaviria,BlancaC.,ManualdePrácticasdeMicrobiologíadeAlimentos,1997,Bogotá,Colombia,CarreradeBacteriologíaPUJ

1. PRÁCTICA 8: NUMERO MÁS PROBABLE N.M.P. DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES
N.M.P. DE COLIFORMES TOTALES
Materiales
• Diluciones de la muestra
• Incubadora a 35°C
• Gradilla
• Pipetas de 1 mL estériles
• Asa bacteriológica
• 9 tubos de 150 x 15 mm conteniendo 10 mL de Caldo Bilis Verde Brillante con tubo de
fermentación de 70 x 10 mm
Procedimiento
 Inocular de cada una de las diluciones 10-1, 10-2, 10-3, 1 ml a cada uno de 3 tubos conteniendo
Caldo Bilis Verde Brillante.
 Incubar los tubos a 35°C durante 24-48 horas
 Observar los tubos que presenten producción de gas
 Comparar en la tabla de N.M.P. e informar como Coliformes Totales por gramo ó ml
 Puede continuarse con pruebas para Coliformes Fecales.
N.M.P. DE COLIFORMES FECALES
(PRUEBA DE MACKENZIE)
Materiales
• Asa bacteriológica
• Baño de agua a 44°C
• Tubos con 10 mL de Caldo Bilis Verde Brillante con tubos de fermentación
• Gradillas
• Tubos con Agua de triptona
• Reactivo de Indol según Kovac
Procedimiento
 De cada tubo positivo en Caldo Bilis Verde Brillante de la Prueba de Coliformes totales, inocular
con asa a un tubo con Caldo Bilis Verde Brillante y un tubo con Agua de triptona
 Incubar a 44°C durante 24 horas
 Observar la formación de gas en Caldo Bilis Verde Brillante
 Efectuar prueba de Indol sobre el agua de triptona
 Los tubos con producción de gas y reacción de Indol positivo, se tienen en cuenta para el
reporte como coliformes fecales
 Comparar en la tabla N.M.P. e informar como Coliformes Fecales por gramo o mililitro.

2. NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) DE BACTERIAS, SEMBRANDO TRES TUBOS POR CADA DILUCIÓN
No. de tubos Positivos en cada Límites de confianza
dilución NMP/g ó ml
Diluciones Infer. Super. Infer. Super.
10-1 10-2 10-3 99% 95%
0 1 0 3 <1 23 <1 17
1 0 0 4 <1 28 1 21
1 0 1 7 1 35 2 27
1 1 0 7 1 36 2 28
1 2 0 11 2 44 4 35
2 0 0 9 1 50 2 38
2 0 1 14 3 62 5 48
2 1 0 15 3 65 5 50
2 1 1 20 5 77 8 61
2 2 0 21 5 80 8 63
3 0 0 23 4 177 7 129
3 0 1 40 10 230 10 180
3 1 0 40 10 290 20 210
3 1 1 70 20 370 20 280
3 2 0 90 20 520 30 390
3 2 1 150 30 660 50 510
3 2 2 210 50 820 80 640
3 3 0 200 <100 1900 100 1400
3 3 1 500 100 3200 200 2400
3 3 2 1100 200 6400 300 4800
Fuente: Gaviria, Blanca C., Manual de Prácticas de Microbiología de Alimentos, 1997, Bogotá,
Colombia, Carrera de Bacteriología PUJ.