Describe las técnicas de imagen cerebral por tinciones

1. FACULTAD DE PSICOLOGÍA.
UNAM SUA
José Méndez Venegas
Maestro josemv@unam.mx
Unidad Técnicas de
Imagenología Tinciones
2 Cerebral
Ciudad de México, 2012
Para utilizar el contendio de esta presentación, favor de citar la fuente

2. Análisis de imágenes de células
nerviosas obtenidas mediante
técnicas de tinción.
Nitrato de plata
Violeta de cresil
Otras técnicas de tinción

3. Tinciones para el análisis de
células cerebrales

4. Tinción de Nissl
Es un método fundamental que utiliza colorantes
acidófilos como el azul de metileno, el violeta de
cresilo, la tionina, la hematoxilina, el azul de
toluidina o el rojo neutro, que se unen al ARN
contenido en los ribosomas, tiñendo el núcleo, el
nucléolo y los ribosomas del retículo
endoplasmático rugoso o sustancia de Nissl.
En las células gliales solamente se tiñen los
núcleos.
Con esta tinción no se logran visualizar las
ramificaciones de las neuronas.

5. Tintura de Nils Cuerpos de tres neuronas multipolares del asta
ventral de la materia gris de la médula espinal, con las características
típicas del soma incluyendo los nucleolos prominentes (flecha verde)
dentro de un gran núcleo leptocromático y grumos de sustancia de
Nissl o poliribosomas rER (flecha roja). La sustancia de Nissl o
cromática se extiende desde la base de cada dendrita (D) pero no
dentro del promontorio que da nacimiento al axon

6. Tinción de Nils que ilustra la tinción en neuronas,
células gliales y células endoteliales de los
capilares sanguíneos de la corteza cerebral
humana

7. Hipocampo humano con tinción de Nissl mostrando
la citoarquitectura y la distribución de los campos
neuronales.

8. Hipocampo humano con Tinción de Nissl, procedente
de un paciente epiléptico, se observa un patrón de
esclerosis de hipocampo, con extensa muerte neuronal
(marcada con asteriscos).

10. Soma neuronal del asta ventral de la médula
espinal de rata.
Las estructuras basófilas aparecen teñidas de
color azul.

11. Tinciones por medio de
impregnación con metales
Técnicas con nitrato de plata
reducido : Bielschowsky, Bodian,
Cajal, Glees, Nauta, que
utilizan compuestos con nitrato
de plata para posteriormente
tratarse las muestras con alguna
sustancia reductora.

12. Tinción de Cajal del
nucléolo y otros
componentes de una
célula piramidal.

13. Tinción de Cajal en donde se observan
fibras y axones colaterales en células de
Purkinje.

14. Neurona del bulbo raquídeo
Tinción de Cajal

15. Tinción de Golgi
Se basa en la adición de nitrato de plata y
dicromato potásico en un tejido, formando
un denso precipitado marrón oscuro que
impregna completamente las células del
sistema nervioso. Con este método se
obtiene acceso a la morfología completa de
las neuronas y células gliales, y asimismo
el marcaje de los axones de las neuronas
permite obtener información acerca de la
conectividad de las distintas regiones
cerebrales.

16. Permite diferenciar
morfológicamente cada una de
los tipos celulares del cerebro y
además ayuda a agruparlas
según sus características
externas. La técnica tiñe
selectivamente un porcentaje
muy bajo de células

17. Tinción de Golgi para células piramidales.

18. Neurona piramidal de la corteza cerebral
teñida con una
modificación del método de Golgi.

19. Tinción de Golgi de la corteza cerebral en donde
el precipitado negro permite observar a las
neuronas y los astrocitos

20. A. Neurona piramidal que exhibe el soma y su arborización
dendrítica en diferentes planos de profundidad (Técnica
de Golgi y Colonnier)
B. Neurona piramidal a partir del soma .Abajo en el centro,
se desprende hacia arriba la dendrítica apical (Tinción de
hematoxilina y eosina)

21. En esta imagen se observa
un corte delgado de
cerebro de gato teñido por
dos procedimientos:
la Tinción de Nissl, que tiñe
TODOS los cuerpos
celulares de violeta y la
Tinción de Golgi que
muestra los perfiles de
algunas neuronas teñidos
de negro observándose las
siluetas de los cuerpos
celulares y sus
prolongaciones. El método
de Golgi tiñe el 5 % o
menos de las neuronas.
Si se tiñeran todas las
neuronas del tejido el corte
parecería casi totalmente
negro.

22. Tinciones para mielina
Se basan en el uso de colorantes con
afinidad por las proteínas unidas a los
fosfolípidos. Sirven para identificar
tractos de fibras. En neuropatología se
utilizan combinaciones de tinciones
para Nissl y mielina.

23. 1. Con tetróxido de osmio. Tiñe tejidos grasos
de color pardo.
Muestra de una fibra
de mielina preparada
con tetróxido de
osmio Se observa un
nodo de Ranvier a
través de la mitad de
ella. La tinción más
oscura de la mielina
se interrumpe en el
nodo, donde la fibra
está cubierta sólo por
el citoplasma de la
célula de Schwann.

24. Fibras separadas teñidas con tetróxido de osmio,
mostrando degeneración axonal.

25. Corte semifino teñido con colorante de Richardson
mostrando engrosamiento de dos fibras nerviosas,
una de ellas mielinizada y la otra con una lámina fina
de mielina.

26. 2.Klüver-Barrera
Utiliza reactivos como azul de luxol rápido,
ácido periyódico de Schiff (PAS) y
hematoxilina. Permite marcar de un color los
somas y de otro color la mielina de los
axones, permitiendo detectar las principales
rutas por las que las neuronas se proyectan
a otras áreas. El colorante rojo neutro se
utiliza para teñir los cuerpos de la sustancia
gris y el colorante azul de luxol pone de
manifiesto las vías de la sustancia blanca.

27. Método de Klüver- Barrera para núcleos,
grumos de Nissl y vainas de mielina
Núcleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas
de mielina azul oscuro.

28. Fragmento de
corteza cerebral
que contiene
neuronas
corticales,
piramidales
(flechas). Tinción de
Klüver-Barrera.

29. Intoxicación aguda por disolventes. Corte
hemisférico del cerebro con necrosis del centro
oval. Tinción de mielina, luxol fast blue-KIüver
Barrera.

30. Tinciones para la glía
Tinción de Cajal que utiliza oro
sublimado. Este método permite
identificar los dos tipos de células
neurogliales de la corteza cerebral,
especialmente, los astrocitos
protoplásmicos rebeldes a la tinción con
otros métodos. Esta técnica posibilitó
describir detalles como los pies
chupadores de las células de la astroglía
en la sustancia blanca de cerebros
humanos

31. Sección del cerebro de un paciente con la
enfermedad de Alzheimer teñido con el método de
Cajal con oro sublimado

32. Proximidad a una vena sanguínea
Tinción de Cajal con oro sublimado

33. Para revelar neurotransmisores

34. Fluorescencia inducida por formaldehído
y ácido glioxílico.
Este método permita la visualización de
monoaminas debido a su unión con el
formaldehído y provee una estimación
semicuantitativa de las terminales
monoaminérgicas y la distribución de la
densidad de los cuerpos celulares en los tejidos
del Sistema Nervioso Central de los mamíferos.

35. Neurona de rata marcada con fluorescencia
Foto tomada con microscopía laser confocal; tinción
con anticuerpos contra tubulina en neuronas cultivadas
in vitro.

36. Inmunocitoquímica
Las técnicas inmunocitoquímicas son un tipo de
técnicas histológicas que permiten identificar
elementos del Sistema Nervioso como orgánulos
celulares, neurotransmisores, enzimas de síntesis
o de degradación de neurotransmisores,
receptores para neurotransmisores, etc.
La técnica consiste en crear artificialmente
sustancias químicas que reconozcan
específicamente al elemento que se quiere
estudiar; estas sustancias reciben el nombre de
anticuerpos.

37. Detección de la molécula tirosina hidroxilasa mediante
inmunocitoquímica usando un anticuerpo primario sin
marcar, un anticuerpo secundario conjugado con biotina y
el complejo avidia-biotina-peroxidasa.

38. Detección con inmunofluorescencia de dos antígenos en una
sección de tejido nervioso: la molécula tirosina hidroxilasa (a la
izquierda) y el neuropéptido Y (a la derecha), usando fluoresceína y
texas red como fluorocromos, respectivamente, mediante un
método de marcaje indirecto. En esta sección la tirosina hidroxilasa
aparece en cuerpos celulares (flecha) mientras que el neuropéptido
Y aparece en fibras. El asterisco indica donde está la célula con
tirosina hidroxilasa, pero no emite luz visible porque la foto se ha
tomado iluminando la sección con una longitud de onda que no
excita a la fluoresceína.

39. Una vez extraído del cerebro y
preparado el tejido, se incuba en una
solución que contiene el anticuerpo que
se unirá al elemento a estudiar.
Posteriormente, se procede a la
localización del anticuerpo porque éste
emite señales bajo cierta condiciones,
por ejemplo, señales radioactivas u
fluorescentes o porque lo exponemos a
un segundo anticuerpo que reconoce al
primero y que emite una señal.

40. Estas técnicas pueden utilizarse
también para medir la actividad
cerebral a través de detectar
proteínas que se sintetizan
cuando las neuronas se activan
gracias a los genes de acción
inmediata

41. Secciones del cerebro del ratón inmunoteñidas con un anticuerpo
antineuroglobina.
A. Corteza
B. Hipocampo y surco dentado
C. Tallo cerebral
D. Cerebelo y células de Purkinje.

42. Cerebro, neuronas y células gliales teñidas
con una técnica inmunohistoquímica

43. Células de Purkinje del Cerebelo con tinción de Golgi,
fotografía obtenida de una preparación original del
laboratorio de Golgi en el Istituto di Patologia nella
Università di Pavia

44. Estas imágenes se obtuvieron de cortes de tejido nervioso tratados
con impregnaciones argenticas
Las células que observamos en la imagen A son neuronas
piramidales y en la B astrocitos fibrosos

45. BIBLIOGRAFÍA
Histología y biología celular: introducción a la anatomía patológica. A.
Kierszenbaum. Pp. 248
•Fundamentos de psicobiología: libro de prácticas. María Dolores Escarabajal
Arrieta. Pp. 52-54
•Neuroimagen. Técnicas y procesos cognitivos. Ríos, M. pp. 9-10
•Fundamentos de Psicobiología. Diego Redolar Ripoll (coor)) pp. 119-120.
•Garcia-Lopez P, Garcia-Marin V and Freire M (2010). The histological slides
and drawings of Cajal. Front. Neuroanat. 4:9. doi: 10.3389/neuro.05.009.2010.
•http://www.golgistain.com/Services.php
•http://www.siumed.edu/~dking2/ssb/NM032b.htm
•http://www.courseweb.uottawa.ca/medicine-
histology/english/ss_basictissues/nervous_tissue.htm
•http://www.ihcworld.com/royellis/gallery/cajal.htm
•http://www.anatomyatlases.org/MicroscopicAnatomy/Section06/Plates
•Histochemistry and Cell Biology Volume 49, Number 2, 81-93, DOI: 10.1007/
http://redalyc.uaemex.mx/pdf/843/84342604.pdf
http://campus.usal.es/~histologia/PDAtecnicas/histotec/neurotec/neurotec.ht
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do