CÉLULAS TRONCOCÉLULAS TRONCO
Fatos, Ficção e FuturoFatos, Ficção e Futuro
Nance Beyer NardiNance Beyer Nardi
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Fatos, ficção e futuro:
1. Identidade, características básicas
2. Métodos de obtenção
3. Manutenção in vitro
4. Plasticida...
3 – Manutenção in vitro
3.1 – Manutenção in vitro de células-tronco
embrionárias
Células tronco embrionárias: manutenção in vitro
• primeiros experimentos: sobre camadas de células alimentadoras (MEF)
• ...
Spherical embryoid bodies (EBs)
Deixadas em condições de cultivo que não mantenham
ativamente seu estado indiferenciado, a...
Fig. 1. From blastocyst, to
embryonic stem cell line,
to somatic cells.
Estratégias:
• adição de ácido retinóico
• adição ...
3.2 – Manutenção in vitro de células-tronco
adultas
Células-tronco do adulto: manutenção in vitro
Por que manter/expandir as células tronco?
• pesquisa
• isolamento de tipos ...
Células-tronco do adulto: manutenção in vitro
• condições de cultivo específicas para cada tipo celular e
espécie de orige...
Cultivo de
células-tronco
hematopoiéticas
Cultivo de células-tronco
mesenquimais
Células-tronco do adulto: manutenção in vitro
• condições de cultivo específicas para cada tipo celular e
espécie de orige...
RESULTADO:
MODIFICAÇÕES NA BIOLOGIA DA CÉLULA???
Cai et al. In search of “stemness”. Experimental Hematology 32 (2004) 585–598.
Alguns tipos de células tronco são senescen...
Células-tronco do adulto: diferenciação in vitro
• cultivo sobre superfícies recobertas (e.g., fibronectina)
• adição de v...
MSC murina
Diferenciação da MSC em
osteoblasto (10-8
M dexamethasone,
5 mg/ml ascorbic acid 2-phosphate,
10 mM b-glycerophosphate)
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Fatos, ficção e futuro:
1. Identidade, características básicas
2. Métodos de obtenção
3. Manutenção in vitro
4. Plasticida...
4 - Plasticidade das células-tronco
As células-tronco embrionárias têm, por definição,
plasticidade de 100%
As células-tronco embrionárias têm, por definição,
plasticidade de 100%
Futuro:
• quando esta expectativa
será alcançada?
Questão ainda não definida!!!
Qual a plasticidade das células-tronco adultas?
Ficção???
Múltiplos tipos de artefatos nos estudos in vitro
e in vivo.
Multipotent Adult
Progenitor Cells
MAPC
Catherine Verfaillie
MAPC
ectoderma
mesoderma
endoderma
Qual a plasticidade das células-tronco adultas?
Fatos:
1 – A plasticidade é bem maior
que inicialmente suposto.
2 – Alguns...
As células-tronco mesenquimais (MSCs) são as células-tronco de
adultos MAIS PLÁSTICAS conhecidas até o momento.
A plasticidade das células tronco do adulto depende de
transdiferenciação ou é devida a fusão celular?
5 – O papel do nicho
O contato com o nicho mantém as células-tronco quiescentes.
células + MEC + fatores
Cell, Vol. 116, 769–778, March 19, 2004
Fuchs et al. Socializing with the Neighbors: Stem Cells and
Their Niche
Contato com o nicho e a mitose assimétrica.
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  1. 1. CÉLULAS TRONCOCÉLULAS TRONCO Fatos, Ficção e FuturoFatos, Ficção e Futuro Nance Beyer NardiNance Beyer Nardi Departamento de Genética UFRGSDepartamento de Genética UFRGS
  2. 2. Fatos, ficção e futuro: 1. Identidade, características básicas 2. Métodos de obtenção 3. Manutenção in vitro 4. Plasticidade 5. O papel do nicho 6. Aplicações terapêuticas
  3. 3. 3 – Manutenção in vitro
  4. 4. 3.1 – Manutenção in vitro de células-tronco embrionárias
  5. 5. Células tronco embrionárias: manutenção in vitro • primeiros experimentos: sobre camadas de células alimentadoras (MEF) • 1988: mESC cultivadas com LIF • 2001- : hESC cultivadas em meio semi-definido (MEF-condicionado + bFGF + Maqtrigel) • procedimento laborioso
  6. 6. Spherical embryoid bodies (EBs) Deixadas em condições de cultivo que não mantenham ativamente seu estado indiferenciado, as ESCs formam os corpos embrióides.
  7. 7. Fig. 1. From blastocyst, to embryonic stem cell line, to somatic cells. Estratégias: • adição de ácido retinóico • adição de vários fatores de crescimento • bloqueio de vias inibitórias •co-cultivo com células diferenciadas Passier & Mummery. Origin and use of embryonic and adult stem cells in differentiation and tissue repair. Cardiovascular Research 58 (2003) 324–335. Células tronco embrionárias: diferenciação in vitro mistura heterogênea de vários tipos celulares indução e seleção
  8. 8. 3.2 – Manutenção in vitro de células-tronco adultas
  9. 9. Células-tronco do adulto: manutenção in vitro Por que manter/expandir as células tronco? • pesquisa • isolamento de tipos específicos de células tronco para terapia (e.g., MSCs da medula óssea) • expansão do número de células tronco para terapia (e.g., HSCs do sangue de cordão umbilical)
  10. 10. Células-tronco do adulto: manutenção in vitro • condições de cultivo específicas para cada tipo celular e espécie de origem •meio de cultivo •substrato •adição de fatores de crescimento específicos
  11. 11. Cultivo de células-tronco hematopoiéticas
  12. 12. Cultivo de células-tronco mesenquimais
  13. 13. Células-tronco do adulto: manutenção in vitro • condições de cultivo específicas para cada tipo celular e espécie de origem •meio de cultivo •substrato •adição de fatores de crescimento específicos • tempo de manutenção variável • grau de dificuldade variável RESULTADO: MODIFICAÇÕES NA BIOLOGIA DA CÉLULA???
  14. 14. RESULTADO: MODIFICAÇÕES NA BIOLOGIA DA CÉLULA???
  15. 15. Cai et al. In search of “stemness”. Experimental Hematology 32 (2004) 585–598. Alguns tipos de células tronco são senescentes
  16. 16. Células-tronco do adulto: diferenciação in vitro • cultivo sobre superfícies recobertas (e.g., fibronectina) • adição de vários tipos de reagentes e fatores de crescimento método empírico! Extensa literatura.
  17. 17. MSC murina
  18. 18. Diferenciação da MSC em osteoblasto (10-8 M dexamethasone, 5 mg/ml ascorbic acid 2-phosphate, 10 mM b-glycerophosphate) Diferenciação da MSC em adipócito (10-8 M dexamethasone and 5 mg/ml insulin)
  19. 19. Fatos, ficção e futuro: 1. Identidade, características básicas 2. Métodos de obtenção 3. Manutenção in vitro 4. Plasticidade 5. O papel do nicho 6. Aplicações terapêuticas
  20. 20. 4 - Plasticidade das células-tronco
  21. 21. As células-tronco embrionárias têm, por definição, plasticidade de 100%
  22. 22. As células-tronco embrionárias têm, por definição, plasticidade de 100% Futuro: • quando esta expectativa será alcançada?
  23. 23. Questão ainda não definida!!! Qual a plasticidade das células-tronco adultas?
  24. 24. Ficção??? Múltiplos tipos de artefatos nos estudos in vitro e in vivo.
  25. 25. Multipotent Adult Progenitor Cells MAPC Catherine Verfaillie
  26. 26. MAPC ectoderma mesoderma endoderma
  27. 27. Qual a plasticidade das células-tronco adultas? Fatos: 1 – A plasticidade é bem maior que inicialmente suposto. 2 – Alguns tipos de células-tronco adultas são mais plásticas que outros.
  28. 28. As células-tronco mesenquimais (MSCs) são as células-tronco de adultos MAIS PLÁSTICAS conhecidas até o momento.
  29. 29. A plasticidade das células tronco do adulto depende de transdiferenciação ou é devida a fusão celular?
  30. 30. 5 – O papel do nicho
  31. 31. O contato com o nicho mantém as células-tronco quiescentes. células + MEC + fatores
  32. 32. Cell, Vol. 116, 769–778, March 19, 2004 Fuchs et al. Socializing with the Neighbors: Stem Cells and Their Niche
  33. 33. Contato com o nicho e a mitose assimétrica.

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