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Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9                                                                                                             775
www.fsp.usp.br/rsp




Qualidade microbiológica de leite humano
obtido em banco de leite
Microbiological quality of human milk from a
Brazilian milk bank
Álvaro B Serafini, Maria Cláudia D P B André, Márcia A V Rodrigues, André Kipnis,
Cynthia O Carvalho, Maria Raquel H Campos, Érica C Monteiro, Fábia Martins e Thiago F
N Jubé

Departamento de Microbiologia, Imunologia, Parasitologia e Patologia do Instituto de Patologia
Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás. Goiânia, GO, Brasil


Descritores                                           Resumo
Bancos de leite. Leite humano.
Controle de qualidade.                                Objetivo
                                                      Determinar a prevalência de microrganismos indicadores e potencialmente patogênicos
                                                      que indicam as condições higiênico-sanitárias das amostras de leite humano ordenhado
                                                      coletadas em banco de leite.
                                                      Métodos
                                                      Foram realizadas análises microbiológicas de 338 amostras de leite humano ordenhado,
                                                      sendo 194 de leite cru e 144, pasteurizado, coletadas em banco de leite humano de um
                                                      hospital materno infantil de Goiânia, GO. As análises microbiológicas foram realizadas
                                                      com semeadura em ágar Mc Conkey, de acordo com o tipo de bactéria.
                                                      Resultados
                                                      No leite cru, verificou-se a presença de Staphylococcus spp. Streptococcus spp.,
                                                      bolores e leveduras e Enterobacteriaceae. Observou-se que Staphylococcus aureus
                                                      esteve presente em 10 (5,2%) amostras, Staphylococcus epidermidis em 28 (14,4%),
                                                      Streptococcus spp. em três (1,6%), bolores e leveduras em 43 (22,2%) e
                                                      Enterobacteriaceae em 49 (25,3%). Das 144 amostras de leite humano ordenhado
                                                      pasteurizado, detectaram-se Staphylococcus aureus em cinco (3,5%), Staphylococcus
                                                      epidermidis em 15 (10,4%), Staphylococcus lugdenensis em duas (1,4%),
                                                      Streptococcus spp. em quatro (2,8%), bolores e leveduras em 37 (25,7%) e
                                                      Enterobacteriaceae em nove (6,3%).
                                                      Conclusões
                                                      Os resultados mostraram um alto grau de contaminação no leite cru. No leite
                                                      pasteurizado, apesar da eliminação da grande maioria de microrganismos potencialmente
                                                      patogênicos, a percentagem de bolores e leveduras excedeu a de leite cru, mostrando
                                                      a necessidade de obtenção de um leite com carga microbiana inicial mais baixa para
                                                      que a pasteurização seja eficiente no controle microbiológico.

Keywords                                              Abstract
Milk banks. Milk, human. Quality
control.                                              Objective
                                                      The objectives of the present study were to determine the prevalence of potentially
                                                      pathogenic microorganisms that indicate the hygienic and sanitary conditions of
                                                      human milk samples collected at a Human Milk Bank.
                                                      Methods
                                                      Three hundred and thirty eight (338) samples of human milk collected from a milk
Correspondência para/ Correspondence to:              Financiado pela Fundação de Apoio à Pesquisa/FUNAPE/UFG (Processo n. 66.357).
Álvaro Bisol Serafini                                 Recebido em 23/1/2002. Reapresentado em 27/6/2003. Aprovado em 3/7/2003.
Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública
R. Delenda Rezende de Melo, s/n Setor Universitário
74605-050 Goiânia, GO, Brasil
E-mail: abisol@iptsp.ufg.br.
776   Qualidade do leite humano em banco de leite                                                 Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9
      Serafini AB et al                                                                                                   www.fsp.usp.br/rsp



                                                    bank in a maternity in the municipality of Goiânia, in the state of Goias, Brazil were
                                                    submitted to microbiological analysis. The latter were plated on McConkey agar
                                                    according to the type of bacteria. Among the total number of samples collected, 194
                                                    consisted of raw milk and the remaining 144 were pasteurized milk.
                                                    Results
                                                    The presence of Staphylococcus spp., Streptococcus spp., yeasts and molds, and
                                                    Enterobacteriaceae was verified in the raw milk samples. Staphylococcus aureus were
                                                    isolated in 10 (5.2%) samples, Staphylococcus epidermidis in 28 (14.4%) samples,
                                                    Streptococcus spp. in three (1.6%) samples, yeasts and molds in 43 (22.2%) and
                                                    Enterobacteriaceae in 49 (25.3%) samples. In a hundred and forty four (144) samples
                                                    which underwent thermal treatment Staphylococcus aureus was detected in five (3.5%)
                                                    samples, Staphylococcus epidermidis in 15 (10.4%), Staphylococcus lugdenensis in
                                                    two (1.4%), Streptococcus spp. in four (2.8%), yeasts and molds in 37 (25.7%), and
                                                    Enterobacteriaceae in nine (6.3%).
                                                    Conclusions
                                                    Analysis indicated a high degree of contamination in raw human milk, and as for the
                                                    pasteurized milk, despite elimination of the great majority of potentially pathogenic
                                                    microorganisms, the percentage of yeasts and molds was higher than in raw milk,
                                                    demonstrating that a lower degree of initial contamination would be necessary for
                                                    pasteurization to be an efficient means of microbiological control.




      INTRODUÇÃO                                                             nhado (LHO) distribuído por esses bancos é um as-
                                                                             sunto de interesse para a saúde pública, pois as crian-
         As infecções exógenas oriundas do ambiente hos-                     ças que consumirão este produto têm baixa resistên-
      pitalar são as que merecem maior atenção dos sanita-                   cia a infecções neonatais.1,2,13,21 O problema mais im-
      ristas, pois são provocadas por agentes cuja fonte é o                 portante dos BLHs é o controle bacteriológico do
      ser humano, como: funcionários, pacientes e visitan-                   leite doado,11 sendo que o consumo de leite humano
      tes, e também por equipamentos e instrumental.5 Como                   contaminado pode ser a causa de doenças neonatais.23
      é muito difícil a implantação simultânea de medidas
      de controle de infecções hospitalares em todos os                         Torna-se importante a obtenção de mais dados
      seus setores, os esforços devem ser concentrados nas                   epidemiológicos sobre a contaminação bacteriana de
      áreas de risco, como berçários, serviço de nutrição e                  leite humano e o desenvolvimento de um trabalho
      os centros cirúrgicos, de esterilização e de terapia                   educativo com as mães, enfermeiras, técnicos de en-
      intensiva. Desta forma, destaca-se entre esses setores                 fermagem, nutricionistas, médicos pediatras e
      o berçário, devido à contaminação cruzada ou pelo                      intensivistas, conscientizando-os sobre os riscos na
      banco de leite, implicando que a veiculação de mi-                     preparação e consumo do leite humano.21 O presente
      crorganismos patogênicos ou potencialmente                             trabalho tem por objetivo conhecer a prevalência de
      patogênicos possa ser considerada fator de risco                       microrganismos existentes no leite oferecido por ban-
      microbiológico em potencial. Sabe-se que para os                       cos de leite humano para subsidiar as autoridades
      bebês alimentados com leite materno, os primeiros                      competentes na melhor condução de programas de
      seis meses podem ser a época mais sadia de vida. Este                  prevenção de infecções de recém- nascidos.
      tipo de alimentação preenche perfeitamente suas de-
      mandas de nutrição e higiene.24 Porém, os recém-nas-                   MÉTODOS
      cidos prematuros não dispõem de forças para sugar o
      leite materno e têm que ser alimentados por outros                       Foram coletadas 338 amostras de leite de um banco
      métodos. Há ainda o fato de que algumas mães, por                      de leite humano de um hospital materno infantil de
      algum problema fisiológico ou emocional, não con-                      Goiânia, GO, sendo 194 amostras de leite humano
      seguem produzir leite. Por outro lado, pode causar                     cru e 144 pasteurizado. Essas amostras eram remeti-
      alergia aos recém-nascidos o leite oriundo de ani-                     das imediatamente acondicionadas, ao Laboratório
      mais. Por estes e outros motivos, muitos lactentes são                 de Microbiologia de Alimentos do Departamento de
      alimentados com leite obtido em bancos de leite hu-                    Microbiologia do Instituto de Patologia Tropical e
      mano (BLH), produto de doações voluntárias de mu-                      Saúde Pública de Goiânia, onde se procederam as
      lheres que têm produção excedente.                                     análises microbiológicas.

         A qualidade microbiológica do leite humano orde-                      Por se tratar de secreção e da quantidade dispo-
Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9                                                     Qualidade do leite humano em banco de leite    777
www.fsp.usp.br/rsp                                                                                                Serafini AB et al



nibilizada para a coleta, as análises microbiológicas       pela utilização de nutrientes do leite pela microbiota
foram realizadas segundo Koneman et al14 (1997) com         contaminante e a diminuição dos fatores de defesa.2
semeadura inicial em ágar sangue e ágar Mc Conkey           Estas situações determinam, na maioria das vezes, a
e, de acordo com o tipo de bactéria isolada, posterior      classificação do produto como impróprio para o con-
identificação em meios apropriados. As bactérias per-       sumo, tendo em vista a vulnerabilidade da clientela
tencentes ao gênero Staphylococcus foram testadas           receptora. Além disso, o processo de pasteurização
para a capacidade de produção de coagulase, resis-          será tanto menos eficiente quanto maior for a carga
tência à novobiocina. Para os Streptococcus, basea-         microbiana do produto. Observa-se que há uma gran-
do na hemólise, foram realizadas provas de resistên-        de lacuna nos critérios para seleção do leite para a
cia à bacitracina, optoquina e outras provas bioquí-        pasteurização.
micas. Na identificação de Gram-negativos, a tria-
gem era realizada em TAF (tríplice açúcar ferro) e a          Staphylococcus aureus é encontrado na orofaringe
identificação por provas bioquímicas. Para a análise        dos seres humanos com prevalência de 35 a 40% e na
de bolores e leveduras, utilizou-se a técnica de acor-      boca e saliva de 10 a 35%.10 Sua presença, porém, no
do com a American Public Health Association,25 com          leite humano pode ser interpretada como contamina-
semeadura em ágar batata dextrose acidificado com           ção secundária a partir da pele e fossas nasais, ou por
ácido tartárico a 10% até pH 3,5, incubação a 25oC±1        condições higiênicas ou sanitárias insatisfatórias dos
por cinco a sete dias.                                      utensílios empregados. A maior preocupação quanto
                                                            à sua presença incide sobre a ocorrência de cepas
RESULTADOS                                                  produtoras de toxinas resistentes à pasteurização.3

  Das 194 amostras de LHO não pasteurizado, foram             Pereira et al 19 (1995) relataram a presença de
isoladas 136 cepas (70,4%) de microrganismos indi-          Staphylococcus em todas amostras de leite materno
cadores e/ou potencialmente patogênicos, e das 144          procedentes de 19 mulheres com sintomas de mastite.
de leite pasteurizado, 73 (50,7%) apresentaram con-         Das 19 cepas, oito sintetizavam quantidades
taminação (Tabela 1).                                       detectáveis de enterotoxinas, sendo que algumas,
                                                            além desta capacidade, mostraram-se produtoras da
   Nas amostras de LHO cru, foram isoladas três (2,2%)      toxina do síndrome do choque tóxico.
cepas de Streptococcus do grupo viridans; 10 (7,35%)
Staphylococcus aureus; 28 (20,59%) S. epidermidis             Em relação ao leite cru, os presentes resultados são
e 49 (36,0%) amostras contaminadas por Entero-              semelhantes aos de Carroll et al7 (1979) que observa-
bacteriaceae. Observou-se ainda, 43 (31,6%) amos-           ram S. aureus em 13 (6,2%) amostras, das 207 de
tras de leite cru contaminadas por bolores e levedu-        LHO pesquisados. Outros autores encontraram
ras (Tabela 2).                                             Staphylococcus coagulase positiva nas amostras es-
                                                            tudadas: 28,1% (Nikodemuz16), 29% (Almeida et al3),
  Das 144 amostras de LHO pasteurizado, foram en-           51,7% (Almeida et al2) e ainda de 7.570 amostras,
contradas 73 cepas, sendo duas (2,7%) Staphy-               observaram crescimento bacteriano em 230, sendo
lococcus lugdenensis, Streptococcus pyogenes,               40% destas, S. aureus.8
Streptococcus do grupo viridans; cinco (6,9%)
Staphylococcus aureus; 15 (20,6%) S. epidermidis e             Wyatt & Mata26 (1969), em 51 amostras de colostro,
12,3% das amostras foram detectadas Entero-                 detectaram enterobactérias em 18% das amostras, re-
bacteriaceae. Ainda, 37 (50,7%) amostras mostraram-         fletindo o baixo nível de higiene pessoal e de condi-
se positivas para bolores e leveduras (Tabela 2).           ções sanitárias na população, no vilarejo de Santa
                                                            Maria Cauquí, Guatemala.
DISCUSSÃO
                                                              Outros autores encontraram E. coli em 8,5% de 59
  A presença de contaminantes em níveis elevados            amostras de leite materno,22 em 2% de 44 amostras,9
no LHO cru acarreta a redução do valor biológico            indicando uma contaminação fecal do leite, e de

Tabela 1 - Percentagem de amostras positivas e negativas encontradas no leite humano ordenhado cru e pasteurizado de
banco de leite humano em Goiânia, GO.
Microorganismos                 LHO não pasteurizado                                      LHO pasteurizado
                            N                           %                          N                          %

Positivas                   136                      70,1                         73                                    50,7
Negativas                    58                      29,9                         71                                    49,3

Total                    194                         100                         144                                    100
LHO – Leite Humano Ordenhado
778   Qualidade do leite humano em banco de leite                                               Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9
      Serafini AB et al                                                                                               www.fsp.usp.br/rsp


      Tabela 2 - Distribuição dos resultados das análises microbiológicas das amostras de leite humano ordenhado cru e pasteurizado,
      coletadas em bancos de leite humano, de 1999 a 2001, em Goiânia, GO.
      Microorganismo                                      LHO não pasteurizado                           LHO pasteurizado
                                                               analisadas      positivas                   analisadas     positivas
                                                    N              %              %              N             %              %

      Staphylococcus aureus                         10              5,2            7,4            5            3,5               6,9
      S. epidermidis                                28             14,4           20,6           15            10,4              20,6
      S. lugdenensis                                 -               -              -             2            1,4               2,7
      Streptococcus grupo viridans                   3              1,6            2,2            2            1,4               2,7
      S. pyogenes                                    -               -              -             2            1,4               2,7
      Klebsiella sp                                  3              1,6            2,2            1            0.7               1,4
      K. oxitoca                                     3              1,6            2,2            1            0.7               1,4
      K. rhinoscleromatis                            6              3,1            4,4            -             -                 -
      K. pneumoniae                                  4              2,1            2,9            2            1,4               2,7
      Enterobacter sp                                1              0,5            0,7            -             -                 -
      E. aerogenes                                   2              1,0            1,5            -             -                 -
      E. agglomerans                                 3              1,6            2,2            -             -                 -
      E. cloacae                                    12              6,2            8,8            3            2,1               4,1
      E. hormaechei                                  2              1,0            1,5            -             -                 -
      Escherichia coli                               3              1,6            2,2            -             -                 -
      Citrobacter freundii                           1              0,5            0,7            -             -                 -
      C. diversus                                    1              0,5            0,7            -             -                 -
      Morganella morganii                            1              0,5            0,7            -             -                 -
      Serratia marcescens                            3              1,6            2,2            -             -                 -
      S. liquefaciens                                -               -              -             1            0.7               1,4
      Proteus mirabilis                              1              0,5            0,7            1            0.7               1,4
      Hafnia alvei                                   2              1,0            1,5            -             -                 -
      Pantoea sp.                                    1              0,5            0,7            -             -                 -
      Pseudomonas sp.                                3              1,6            2,2            1            0.7               1,4
      Bolores e leveduras                           43             22,2           31,6           37            25,7              50,7

      Total: amostras analisadas                    194            100             -            144            100                 -
      Total: amostras positivas                     136            70,4            -             73            50,7                -



      enterobactérias em 15 (7%).7 Os presentes resultados                    do usual (água e sabão) de higiene da glândula ma-
      revelaram a presença de enterobactérias em 25,3%                        mária. Já outros pesquisadores observaram 230 (6,5%)
      das amostras de LHO cru analisadas e ainda em 6,2%                      amostras com bolores e leveduras de 7.570 analisa-
      do leite após pasteurização. Apresentaram, portanto,                    das.8 Os presentes resultados, de 22% para leite cru,
      qualidade higiênica inferior aos estudos citados.                       mostraram-se inferiores aos de outros autores,4 po-
                                                                              rém, preocupantes para leite pasteurizado (25,7%),
         Entre as enterobactérias, destaca-se a importância                   denotando possível contaminação ambiental pós-
      da determinação do grupo coliforme no controle da                       processamento ou ineficácia da pasteurização. A pre-
      qualidade microbiológica de BLH, pois sua presen-                       sença de leveduras patogênicas em LHO pasteuriza-
      ça pode indicar contaminação, mesmo que indireta,                       do sugere que este poderia ser uma fonte de infeção
      de origem fecal, sem implicar necessariamente a                         para recém-nascidos durante o aleitamento. O con-
      identificação de E. coli.2 Pesquisas têm mostrado                       trole de qualidade com o uso da contagem de levedu-
      que a contaminação por coliformes pode ser prove-                       ras em LHO pode ser um bom indicador de problemas
      niente do ambiente, como estudo feito em 472 amos-                      na higiene, estocagem ou transporte.21
      tras, que revelaram 38,4% deste grupo de bactérias,17
      ou de 5.710 amostras de leite humano foram detec-                         A pasteurização inadequada não é somente um pe-
      tados coliformes em 1139 (19,9%)17 e em 837 amos-                       rigo presumível às propriedades benéficas do LHO,
      tras, 71 (8,48%) estavam contaminadas com coli-                         mas pode também aumentar a susceptibilidade para
      formes, porém apenas três por E. coli.18 No presente                    subseqüentes contaminações.6
      estudo, os coliformes estiveram presentes em 21,1%
      das amostras de leite cru e em 5,6% das pasteuriza-                       A Resolução RDC no 12, de janeiro de 2001, do
      das, mostrando que a eficiência da pasteurização                        Ministério da Saúde14 estabelece, pela primeira vez
      pode ser comprometida por uma carga microbiana                          no Brasil, critérios para controle microbiológico do
      inicial elevada.                                                        leite humano. Nela, a contagem de microrganismos
                                                                              aeróbios mesófilos viáveis permitida é de até 100
        A presença de bolores e leveduras em alimentos                        UFC/mL, coliformes a 35 oC e Staphylococcus
      pode indicar contaminação advinda do meio ambi-                         coagulase positiva ausentes em 1 mL e Salmonella
      ente ou resultado de manipulação em condições hi-                       sp. ausente em 25 mL. De acordo com essa Resolu-
      giênico-sanitárias insatisfatórias.15 Almeida4 (1986)                   ção, 4,9% das amostras analisadas no presente traba-
      encontrou uma prevalência de fungos e leveduras em                      lho estão impróprias para o consumo humano por
      69,4% das amostras obtidas após emprego de méto-                        não apresentarem os parâmetros analíticos de acordo
Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9                                                         Qualidade do leite humano em banco de leite    779
www.fsp.usp.br/rsp                                                                                                    Serafini AB et al



com o permitido no Anexo I da referida Resolução.                rização. Para tanto, resultados e medidas mais rigoro-
Diante dos resultados obtidos, acredita-se que devem             sas de monitoramento da qualidade do leite humano
haver esforços para melhorar a qualidade micro-                  são imprescindíveis para garantir um alimento segu-
biológica do LHO, mesmo o que se destina à pasteu-               ro para os recém-nascidos.




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Qualidade MicrobiolóGica De Leite Humano

  • 1. Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9 775 www.fsp.usp.br/rsp Qualidade microbiológica de leite humano obtido em banco de leite Microbiological quality of human milk from a Brazilian milk bank Álvaro B Serafini, Maria Cláudia D P B André, Márcia A V Rodrigues, André Kipnis, Cynthia O Carvalho, Maria Raquel H Campos, Érica C Monteiro, Fábia Martins e Thiago F N Jubé Departamento de Microbiologia, Imunologia, Parasitologia e Patologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás. Goiânia, GO, Brasil Descritores Resumo Bancos de leite. Leite humano. Controle de qualidade. Objetivo Determinar a prevalência de microrganismos indicadores e potencialmente patogênicos que indicam as condições higiênico-sanitárias das amostras de leite humano ordenhado coletadas em banco de leite. Métodos Foram realizadas análises microbiológicas de 338 amostras de leite humano ordenhado, sendo 194 de leite cru e 144, pasteurizado, coletadas em banco de leite humano de um hospital materno infantil de Goiânia, GO. As análises microbiológicas foram realizadas com semeadura em ágar Mc Conkey, de acordo com o tipo de bactéria. Resultados No leite cru, verificou-se a presença de Staphylococcus spp. Streptococcus spp., bolores e leveduras e Enterobacteriaceae. Observou-se que Staphylococcus aureus esteve presente em 10 (5,2%) amostras, Staphylococcus epidermidis em 28 (14,4%), Streptococcus spp. em três (1,6%), bolores e leveduras em 43 (22,2%) e Enterobacteriaceae em 49 (25,3%). Das 144 amostras de leite humano ordenhado pasteurizado, detectaram-se Staphylococcus aureus em cinco (3,5%), Staphylococcus epidermidis em 15 (10,4%), Staphylococcus lugdenensis em duas (1,4%), Streptococcus spp. em quatro (2,8%), bolores e leveduras em 37 (25,7%) e Enterobacteriaceae em nove (6,3%). Conclusões Os resultados mostraram um alto grau de contaminação no leite cru. No leite pasteurizado, apesar da eliminação da grande maioria de microrganismos potencialmente patogênicos, a percentagem de bolores e leveduras excedeu a de leite cru, mostrando a necessidade de obtenção de um leite com carga microbiana inicial mais baixa para que a pasteurização seja eficiente no controle microbiológico. Keywords Abstract Milk banks. Milk, human. Quality control. Objective The objectives of the present study were to determine the prevalence of potentially pathogenic microorganisms that indicate the hygienic and sanitary conditions of human milk samples collected at a Human Milk Bank. Methods Three hundred and thirty eight (338) samples of human milk collected from a milk Correspondência para/ Correspondence to: Financiado pela Fundação de Apoio à Pesquisa/FUNAPE/UFG (Processo n. 66.357). Álvaro Bisol Serafini Recebido em 23/1/2002. Reapresentado em 27/6/2003. Aprovado em 3/7/2003. Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública R. Delenda Rezende de Melo, s/n Setor Universitário 74605-050 Goiânia, GO, Brasil E-mail: abisol@iptsp.ufg.br.
  • 2. 776 Qualidade do leite humano em banco de leite Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9 Serafini AB et al www.fsp.usp.br/rsp bank in a maternity in the municipality of Goiânia, in the state of Goias, Brazil were submitted to microbiological analysis. The latter were plated on McConkey agar according to the type of bacteria. Among the total number of samples collected, 194 consisted of raw milk and the remaining 144 were pasteurized milk. Results The presence of Staphylococcus spp., Streptococcus spp., yeasts and molds, and Enterobacteriaceae was verified in the raw milk samples. Staphylococcus aureus were isolated in 10 (5.2%) samples, Staphylococcus epidermidis in 28 (14.4%) samples, Streptococcus spp. in three (1.6%) samples, yeasts and molds in 43 (22.2%) and Enterobacteriaceae in 49 (25.3%) samples. In a hundred and forty four (144) samples which underwent thermal treatment Staphylococcus aureus was detected in five (3.5%) samples, Staphylococcus epidermidis in 15 (10.4%), Staphylococcus lugdenensis in two (1.4%), Streptococcus spp. in four (2.8%), yeasts and molds in 37 (25.7%), and Enterobacteriaceae in nine (6.3%). Conclusions Analysis indicated a high degree of contamination in raw human milk, and as for the pasteurized milk, despite elimination of the great majority of potentially pathogenic microorganisms, the percentage of yeasts and molds was higher than in raw milk, demonstrating that a lower degree of initial contamination would be necessary for pasteurization to be an efficient means of microbiological control. INTRODUÇÃO nhado (LHO) distribuído por esses bancos é um as- sunto de interesse para a saúde pública, pois as crian- As infecções exógenas oriundas do ambiente hos- ças que consumirão este produto têm baixa resistên- pitalar são as que merecem maior atenção dos sanita- cia a infecções neonatais.1,2,13,21 O problema mais im- ristas, pois são provocadas por agentes cuja fonte é o portante dos BLHs é o controle bacteriológico do ser humano, como: funcionários, pacientes e visitan- leite doado,11 sendo que o consumo de leite humano tes, e também por equipamentos e instrumental.5 Como contaminado pode ser a causa de doenças neonatais.23 é muito difícil a implantação simultânea de medidas de controle de infecções hospitalares em todos os Torna-se importante a obtenção de mais dados seus setores, os esforços devem ser concentrados nas epidemiológicos sobre a contaminação bacteriana de áreas de risco, como berçários, serviço de nutrição e leite humano e o desenvolvimento de um trabalho os centros cirúrgicos, de esterilização e de terapia educativo com as mães, enfermeiras, técnicos de en- intensiva. Desta forma, destaca-se entre esses setores fermagem, nutricionistas, médicos pediatras e o berçário, devido à contaminação cruzada ou pelo intensivistas, conscientizando-os sobre os riscos na banco de leite, implicando que a veiculação de mi- preparação e consumo do leite humano.21 O presente crorganismos patogênicos ou potencialmente trabalho tem por objetivo conhecer a prevalência de patogênicos possa ser considerada fator de risco microrganismos existentes no leite oferecido por ban- microbiológico em potencial. Sabe-se que para os cos de leite humano para subsidiar as autoridades bebês alimentados com leite materno, os primeiros competentes na melhor condução de programas de seis meses podem ser a época mais sadia de vida. Este prevenção de infecções de recém- nascidos. tipo de alimentação preenche perfeitamente suas de- mandas de nutrição e higiene.24 Porém, os recém-nas- MÉTODOS cidos prematuros não dispõem de forças para sugar o leite materno e têm que ser alimentados por outros Foram coletadas 338 amostras de leite de um banco métodos. Há ainda o fato de que algumas mães, por de leite humano de um hospital materno infantil de algum problema fisiológico ou emocional, não con- Goiânia, GO, sendo 194 amostras de leite humano seguem produzir leite. Por outro lado, pode causar cru e 144 pasteurizado. Essas amostras eram remeti- alergia aos recém-nascidos o leite oriundo de ani- das imediatamente acondicionadas, ao Laboratório mais. Por estes e outros motivos, muitos lactentes são de Microbiologia de Alimentos do Departamento de alimentados com leite obtido em bancos de leite hu- Microbiologia do Instituto de Patologia Tropical e mano (BLH), produto de doações voluntárias de mu- Saúde Pública de Goiânia, onde se procederam as lheres que têm produção excedente. análises microbiológicas. A qualidade microbiológica do leite humano orde- Por se tratar de secreção e da quantidade dispo-
  • 3. Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9 Qualidade do leite humano em banco de leite 777 www.fsp.usp.br/rsp Serafini AB et al nibilizada para a coleta, as análises microbiológicas pela utilização de nutrientes do leite pela microbiota foram realizadas segundo Koneman et al14 (1997) com contaminante e a diminuição dos fatores de defesa.2 semeadura inicial em ágar sangue e ágar Mc Conkey Estas situações determinam, na maioria das vezes, a e, de acordo com o tipo de bactéria isolada, posterior classificação do produto como impróprio para o con- identificação em meios apropriados. As bactérias per- sumo, tendo em vista a vulnerabilidade da clientela tencentes ao gênero Staphylococcus foram testadas receptora. Além disso, o processo de pasteurização para a capacidade de produção de coagulase, resis- será tanto menos eficiente quanto maior for a carga tência à novobiocina. Para os Streptococcus, basea- microbiana do produto. Observa-se que há uma gran- do na hemólise, foram realizadas provas de resistên- de lacuna nos critérios para seleção do leite para a cia à bacitracina, optoquina e outras provas bioquí- pasteurização. micas. Na identificação de Gram-negativos, a tria- gem era realizada em TAF (tríplice açúcar ferro) e a Staphylococcus aureus é encontrado na orofaringe identificação por provas bioquímicas. Para a análise dos seres humanos com prevalência de 35 a 40% e na de bolores e leveduras, utilizou-se a técnica de acor- boca e saliva de 10 a 35%.10 Sua presença, porém, no do com a American Public Health Association,25 com leite humano pode ser interpretada como contamina- semeadura em ágar batata dextrose acidificado com ção secundária a partir da pele e fossas nasais, ou por ácido tartárico a 10% até pH 3,5, incubação a 25oC±1 condições higiênicas ou sanitárias insatisfatórias dos por cinco a sete dias. utensílios empregados. A maior preocupação quanto à sua presença incide sobre a ocorrência de cepas RESULTADOS produtoras de toxinas resistentes à pasteurização.3 Das 194 amostras de LHO não pasteurizado, foram Pereira et al 19 (1995) relataram a presença de isoladas 136 cepas (70,4%) de microrganismos indi- Staphylococcus em todas amostras de leite materno cadores e/ou potencialmente patogênicos, e das 144 procedentes de 19 mulheres com sintomas de mastite. de leite pasteurizado, 73 (50,7%) apresentaram con- Das 19 cepas, oito sintetizavam quantidades taminação (Tabela 1). detectáveis de enterotoxinas, sendo que algumas, além desta capacidade, mostraram-se produtoras da Nas amostras de LHO cru, foram isoladas três (2,2%) toxina do síndrome do choque tóxico. cepas de Streptococcus do grupo viridans; 10 (7,35%) Staphylococcus aureus; 28 (20,59%) S. epidermidis Em relação ao leite cru, os presentes resultados são e 49 (36,0%) amostras contaminadas por Entero- semelhantes aos de Carroll et al7 (1979) que observa- bacteriaceae. Observou-se ainda, 43 (31,6%) amos- ram S. aureus em 13 (6,2%) amostras, das 207 de tras de leite cru contaminadas por bolores e levedu- LHO pesquisados. Outros autores encontraram ras (Tabela 2). Staphylococcus coagulase positiva nas amostras es- tudadas: 28,1% (Nikodemuz16), 29% (Almeida et al3), Das 144 amostras de LHO pasteurizado, foram en- 51,7% (Almeida et al2) e ainda de 7.570 amostras, contradas 73 cepas, sendo duas (2,7%) Staphy- observaram crescimento bacteriano em 230, sendo lococcus lugdenensis, Streptococcus pyogenes, 40% destas, S. aureus.8 Streptococcus do grupo viridans; cinco (6,9%) Staphylococcus aureus; 15 (20,6%) S. epidermidis e Wyatt & Mata26 (1969), em 51 amostras de colostro, 12,3% das amostras foram detectadas Entero- detectaram enterobactérias em 18% das amostras, re- bacteriaceae. Ainda, 37 (50,7%) amostras mostraram- fletindo o baixo nível de higiene pessoal e de condi- se positivas para bolores e leveduras (Tabela 2). ções sanitárias na população, no vilarejo de Santa Maria Cauquí, Guatemala. DISCUSSÃO Outros autores encontraram E. coli em 8,5% de 59 A presença de contaminantes em níveis elevados amostras de leite materno,22 em 2% de 44 amostras,9 no LHO cru acarreta a redução do valor biológico indicando uma contaminação fecal do leite, e de Tabela 1 - Percentagem de amostras positivas e negativas encontradas no leite humano ordenhado cru e pasteurizado de banco de leite humano em Goiânia, GO. Microorganismos LHO não pasteurizado LHO pasteurizado N % N % Positivas 136 70,1 73 50,7 Negativas 58 29,9 71 49,3 Total 194 100 144 100 LHO – Leite Humano Ordenhado
  • 4. 778 Qualidade do leite humano em banco de leite Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9 Serafini AB et al www.fsp.usp.br/rsp Tabela 2 - Distribuição dos resultados das análises microbiológicas das amostras de leite humano ordenhado cru e pasteurizado, coletadas em bancos de leite humano, de 1999 a 2001, em Goiânia, GO. Microorganismo LHO não pasteurizado LHO pasteurizado analisadas positivas analisadas positivas N % % N % % Staphylococcus aureus 10 5,2 7,4 5 3,5 6,9 S. epidermidis 28 14,4 20,6 15 10,4 20,6 S. lugdenensis - - - 2 1,4 2,7 Streptococcus grupo viridans 3 1,6 2,2 2 1,4 2,7 S. pyogenes - - - 2 1,4 2,7 Klebsiella sp 3 1,6 2,2 1 0.7 1,4 K. oxitoca 3 1,6 2,2 1 0.7 1,4 K. rhinoscleromatis 6 3,1 4,4 - - - K. pneumoniae 4 2,1 2,9 2 1,4 2,7 Enterobacter sp 1 0,5 0,7 - - - E. aerogenes 2 1,0 1,5 - - - E. agglomerans 3 1,6 2,2 - - - E. cloacae 12 6,2 8,8 3 2,1 4,1 E. hormaechei 2 1,0 1,5 - - - Escherichia coli 3 1,6 2,2 - - - Citrobacter freundii 1 0,5 0,7 - - - C. diversus 1 0,5 0,7 - - - Morganella morganii 1 0,5 0,7 - - - Serratia marcescens 3 1,6 2,2 - - - S. liquefaciens - - - 1 0.7 1,4 Proteus mirabilis 1 0,5 0,7 1 0.7 1,4 Hafnia alvei 2 1,0 1,5 - - - Pantoea sp. 1 0,5 0,7 - - - Pseudomonas sp. 3 1,6 2,2 1 0.7 1,4 Bolores e leveduras 43 22,2 31,6 37 25,7 50,7 Total: amostras analisadas 194 100 - 144 100 - Total: amostras positivas 136 70,4 - 73 50,7 - enterobactérias em 15 (7%).7 Os presentes resultados do usual (água e sabão) de higiene da glândula ma- revelaram a presença de enterobactérias em 25,3% mária. Já outros pesquisadores observaram 230 (6,5%) das amostras de LHO cru analisadas e ainda em 6,2% amostras com bolores e leveduras de 7.570 analisa- do leite após pasteurização. Apresentaram, portanto, das.8 Os presentes resultados, de 22% para leite cru, qualidade higiênica inferior aos estudos citados. mostraram-se inferiores aos de outros autores,4 po- rém, preocupantes para leite pasteurizado (25,7%), Entre as enterobactérias, destaca-se a importância denotando possível contaminação ambiental pós- da determinação do grupo coliforme no controle da processamento ou ineficácia da pasteurização. A pre- qualidade microbiológica de BLH, pois sua presen- sença de leveduras patogênicas em LHO pasteuriza- ça pode indicar contaminação, mesmo que indireta, do sugere que este poderia ser uma fonte de infeção de origem fecal, sem implicar necessariamente a para recém-nascidos durante o aleitamento. O con- identificação de E. coli.2 Pesquisas têm mostrado trole de qualidade com o uso da contagem de levedu- que a contaminação por coliformes pode ser prove- ras em LHO pode ser um bom indicador de problemas niente do ambiente, como estudo feito em 472 amos- na higiene, estocagem ou transporte.21 tras, que revelaram 38,4% deste grupo de bactérias,17 ou de 5.710 amostras de leite humano foram detec- A pasteurização inadequada não é somente um pe- tados coliformes em 1139 (19,9%)17 e em 837 amos- rigo presumível às propriedades benéficas do LHO, tras, 71 (8,48%) estavam contaminadas com coli- mas pode também aumentar a susceptibilidade para formes, porém apenas três por E. coli.18 No presente subseqüentes contaminações.6 estudo, os coliformes estiveram presentes em 21,1% das amostras de leite cru e em 5,6% das pasteuriza- A Resolução RDC no 12, de janeiro de 2001, do das, mostrando que a eficiência da pasteurização Ministério da Saúde14 estabelece, pela primeira vez pode ser comprometida por uma carga microbiana no Brasil, critérios para controle microbiológico do inicial elevada. leite humano. Nela, a contagem de microrganismos aeróbios mesófilos viáveis permitida é de até 100 A presença de bolores e leveduras em alimentos UFC/mL, coliformes a 35 oC e Staphylococcus pode indicar contaminação advinda do meio ambi- coagulase positiva ausentes em 1 mL e Salmonella ente ou resultado de manipulação em condições hi- sp. ausente em 25 mL. De acordo com essa Resolu- giênico-sanitárias insatisfatórias.15 Almeida4 (1986) ção, 4,9% das amostras analisadas no presente traba- encontrou uma prevalência de fungos e leveduras em lho estão impróprias para o consumo humano por 69,4% das amostras obtidas após emprego de méto- não apresentarem os parâmetros analíticos de acordo
  • 5. Rev Saúde Pública 2003;37(6):775-9 Qualidade do leite humano em banco de leite 779 www.fsp.usp.br/rsp Serafini AB et al com o permitido no Anexo I da referida Resolução. rização. Para tanto, resultados e medidas mais rigoro- Diante dos resultados obtidos, acredita-se que devem sas de monitoramento da qualidade do leite humano haver esforços para melhorar a qualidade micro- são imprescindíveis para garantir um alimento segu- biológica do LHO, mesmo o que se destina à pasteu- ro para os recém-nascidos. REFERÊNCIAS 1. Almeida JAG. Brasil perde 180 milhões de litros de 14. Ministério da Saúde. Resolução no 12/2001 da leite materno no Rio. Folha de São Paulo 12 de maio Agência Nacional de Vigilância Sanitária – ANVISA. de 1999; Caderno Cotidiano: 3-5. Regulamento Técnico Sobre Padrões Microbiológicos Para Alimentos. Diário Oficial da União. Brasília 2. Almeida JAG, Novak FR, Almeida CHG, Serva VB. (DF); 10 de janeiro de 2001. Avaliação parcial da flora microbiana do leite humano ordenhado no IMIP. Rev Inst Mat Inf 15. Mislivec PB, Beuchat LR, Cousin MA. Yeasts and Pernambuco 1989;3:13-6. molds. In: Vanderzant C, Splittstoesser DF, editors. Compendium of methods for the microbiological 3. Almeida JAG, Novak FR, Silva IS. Estudo da ocorrên- examination of foods. 3rd ed. Washington (DC): cia de Staphylococcus aureus em amostras de leite American Public Health Association; 1992. p. 239-49. humano odenhado. In: I Congresso Brasileiro de Bancos de Leite Humano; 8-12 de julho de 1998. 16. Nikodemuz I. Microflora in human milk sample. Brasília (DF); 1998. p. 10. Nahrung 1986;30:901-6. 4. Almeida JAG. Qualidade do leite humano coletado e 17. Novak FR, Almeida JAG, Almeida CHG. Detecção e processado em bancos de leite humano [Tese de identificação de coliformes em leite humano orde- mestrado]. Viçosa: Universidade Federal de Viçosa; 1986. nhado. Rev Inst Mat Inf Pernambuco 1989;3:17-9. 5. Bittencourt BB, Melo CG. A infecção hospitalar e o 18. Novak FR, Almeida JAG, Asensi MD, Moraes BA, serviço de nutrição. Rev Paul Hosp 1972;20:28-31. Rodrigues DP. Resistência antimicrobiana de coliformes isolados de leite humano ordenhado. Cad 6. Bjorkstén B, Burman LG, Chatev P, Fredrikzon B, Saúde Pública 2001;17:317-21. Gothefors L, Hernell O. Collecting and banking human milk: to heat or not to heat? BMJ 1980;281:765-9. 19. Pereira ML, Santos EJ, Sellos I, Bergdoll M. Staphylococci in breast milk from women without 7. Carroll L, Davies DP, Osman M, McNeish A. mastites. Rev Microbiol 1995;26:117-20. Bacteriological criteria for feeding raw breast-milk to babies on neonatal units. Lancet 1979;2:732-3. 20. Picollo RC, Pimentel EP, Fávero LM, Rizzo MA. Surto de salmonelose ocorrido em cantina escolar, no 8. Colaço W, Serva VB, Lira CS. Perfil microbiológico do município de São Paulo, em 1991. Rev Hig Alimentar leite humano ordenhado, distribuído no banco de leite 1992;6:28-30. humano do IMIP, no período de julho/95 a dezembro/ 99. In: XII Encontro Nacional de Analista de Alimentos; 21. Rosa CA, Novak FR, Almeida JAG, Hagler LC, Hagler 04 a 08 de novembro de 2001. Maceió; 2001. p. 213. AN. Yeasts from human milk collected in Rio de Janeiro, Brazil. Rev Microbiol 1990;21:361-3. 9. Eidelman AI, Szilagyi G. Patterns of bacterial colonization of human milk. Obstetrics & Gynecology 22. Szollosy E, Marjai E, Lanatos J. Bacterial 1979;53:550-2. contamination and sparing heat treatment of mother’s milk. Acta Microbiol Acad Sci Hungarian 10. Herceg RJ, Peterson LR. Normal flora in health and 1974;21:319-25. disease. In: Mandell, Douglas, Bennilt, editors. Principles and pratice of infectious disease. 3rd ed. 23. Tyson J, Edwards W, Rosenfeld A, Beer A. Collection New York: Churchill Levingstone; 1990. p. 6-14. methods and contamination of bank milk. Arch Dis Child 1982;57:396-8. 11. Ikonem RS, Miettinem A, Groonos P. Bacteriological quality control in a human milk bank. Klin Pädiatr 24. Unicef - Fundo das Nações Unidas para a Infância. 1982;194:295-7. Importância do leite materno na infância. Rev Hig Alimentar 1984;3:172-3. 12. Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn Jr WC. Color atlas and 25. Vanderzant C, Splittstoesser DF, editors. Compendium textbook of diagnostic microbiology. 5th ed. of methods for the microbiological examination of Philadelphia: Lippincott; 1997. foods. 3rd ed. Washington (DC): American Public Health Association; 1992. 13. Law B, Urias B, Lertzman J, Robson D, Romance L. Is ingestion of milk-associated bacteria by premature infants 26. Wyatt RG, Mata LJ. Bacteria in colostrum and milk of fed raw human milk controlled by routine bacteriologic Guatemalan Indian Women J Pediatr 1969;91:102-7. screening? J Clin Microbiol 1989;27:1560-6.