1. EBV ViraStripe® Диагностический набор для определения lgG, IgM
Иммунодиагностический метод для качественного обнаружения IgG или IgM-специфичных антител к вирусу Эпштейна-Барра EBV в человеческой
сыворотке.
EBV ViraStripe' IgG использует EBV специфические антигены: вирусные антигены капсулы вируса VCA gp125 и VCA p18, ядерный антиген
EBNA1P76 и ранний антиген-D p54.
Каждая полоска имеет интегрированную систему контроля, включающую контроль сыворотки, контроль конъюгата и пороговый контроль.
50 тестов Номер изделия: V-EBSGOK
EBV ViraStripe
Диагностический набор для
определения IgG
50 тестов Номер изделия V-EBSMOK
EBV ViraStripe
Диагностический набор для
определения IgМ
Образец для тестирования 20 мкл сыворотки
Время тестирования 90 минут
Хранение/Стабильность: около 12 месяцев при 8 °C
Компоненты диагностического набора
50 полосок Полоски с антигенами, полоски из нитроцеллюлозы с системой (Номер изделия: V-EBSFAS)
контроля и EBV-специфичными антигенами в
аналитической секции; код полоски: EB, пронумерованны от 1-50
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы против IgG или IgM человека, (Номер изделия: V-UVNG/MKI)
10-кратный концентрат
100 мл Буфер для разведения/промывки, 10-кратный концентрат (Номер изделия: V-UVNUWP)
1 упаковка Порошок для разведения/промывки (5г) (Номер изделия: V-UVNUMP
90 мл Раствор хромоген/субстрата, готовый к использованию (Номер изделия: V-UVNUCS)
1 экз. Инструкция по применению диагностического набора ENA
ViraStripe® IgG для определения IgG
2 экз. Протокол оценки диагностического набора ENA ViraStripe®
IgG для определения IgG, с изображением полоски
положительного контрольного образца (PC EВ)
Буфер для разведения/промывки, порошок для разведения/промывки и раствор хромоген/субстрата взаимозаменяемы между различными
ViraStripe ® и ViraBlot ® диагностическими наборами.
Доступны дополнительно:
0,33 мл EBV IgG Положительный контрольный образец, человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-EBSGPK)
человеческая сыворотка, готовая к использованию готовая к использованию
0,33 мл EBV IgМ Положительный контрольный образец, человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-EBSMPK)
человеческая сыворотка, готовая к использованию готовая к использованию
0,33 мл EBV IgG, IgM, IgA отрицательный контрольный человеческая сыворотка, (Номер изделия: V-EBSPNK)
образец, человеческая сыворотка, готовая к готовая к использованию
использованию
9 мл Конъюгат щелочной фосфатазы с антителами (Номер изделия: V-UVNAKI)
против IgА человека, 10-кратный концентрат,
жидкий
Хранение и стабильность реактивов
Полоски с антигенами: полоски в закрытых упаковках устойчивы Рабочий раствор буфера: 2 недели годен к использованию если
до истечения срока годности, если хранятся при температуре 2-8 °C. хранится при температуре 2-8 °C.
Плотно закрывайте пакеты с не использованными полосками. Рабочий раствор буфера может быть сохранен в необходимых
Конъюгат, 10-кратный концентрат: устойчив до истечения срока количествах в течение более длительного времени в замороженном
годности, если хранится при при температуре 2-8 °C состоянии.
Рабочий раствор: использовать немедленно. Раствор хромоген/субстрата: устойчив до истечения срока
Буфер для разведения/промывки: концентрат и порошок: годности, если хранится температуре 2-8 °C. Хранить в темном
устойчив до истечения срока годности, если хранится при месте!
температуре 2-8 °C.
Подготовка реактивов и исследуемого образца
Конъюгат (рабочий раствор):
Перед использованием доведите все компоненты теста до
Растворите необходимое количество 10-кратного концентрата
комнатной температуры (20-25°C).
согласно таблице (1): Раствор всегда готовится свежий во время
Полоски с антигенами:
процедуры промывания (пункт 7 проведения теста).
Тщательно отделите требуемое число полосок при помощи пинцета.
Другие реактивы: готовы к использованию.
Касайтесь полосок пинцетом только в области маркировки.
Образцы пациента:
Буфер для разведения/промывки (рабочий раствор):
Используйте 20 мкл неразведенной сыворотки на один тест
Чтобы подготовить рабочий раствор буфера, разведите 10-кратный
Дополнительно доступные контроли:
концентрат в пропорции1:10 дистиллированной водой (100 мл
Используйте 100 мкл каждого положительного, порогового и
концентрата + 900 мл дистиллированной воды), добавьте порошок
отрицательного контроля, в неразведенном виде, на серию тестов.
для разведения/промывки до полного растворения. Поместите
рабочий раствор буфера на 10 - 15 минут на магнитную мешалку, pH
= 7,5 ± 0,1.
2. Таблица 1: Приготовление конъюгата рабочего раствора
Число Разбавитель /промывной буфер Конечный
Конъюгат - концентрат
полос рабочий раствор объем
0,15 мл
1,35 мл 1,5 мл
1 +
0,30 мл
2.70 мл 3,0 мл
2 +
0.45 мл
4,05 мл 4,5 мл
3 +
0,60 мл
5,40 мл 6,0 мл
4 +
6,75 мл 0,75 мл 7,5 мл
5 +
8,10 мл 0,90 мл 9,0 мл
6 +
9,45 мл 1,05 мл 10,5 мл
7 +
10,80 мл 1,20 мл 12.0 мл
8 +
12,15 мл 1,35 мл 13,5 мл
9 +
13,50 мл 1,50 мл 15,0 мл
10 +
14,85 мл 1,65 мл 16,5 мл
11 +
16,20 мл 1,80 мл 18,0 мл
12 +
17,55 мл 1,95 мл 19,5 мл
13 +
18,90 мл 2,10 мл 21,0 мл
14 +
20,25 мл 2,25 мл 22,5 мл
15 +
21,60 мл 2,40 мл 24,0 мл
16 +
22,95 мл 2,55 мл 25,5 мл
17 +
24,30 мл 2,70 мл 27,0 мл
18 +
25,65 мл 2,85 мл 28,5 мл
19 +
27,00 мл 3,00 мл 30,0 мл
20 +
28,35 мл 3,15 мл 31,5 мл
21 +
29,70 мл 3,30 мл 33,0 мл
22 +
31,05 мл 3,45 мл 34,5 мл
23 +
32,40 мл 3,60 мл 36,0 мл
24 +
33,75 мл 3,75 мл 37,5 мл
25 +
35,10 мл 3,90 мл 39,0 мл
26 +
36,45 мл 4,05 мл 40,5 мл
27 +
37,80 мл 4,20 мл 42,0 мл
28 +
39,15 мл 4,35 мл 43,5 мл
29 +
40,50 мл 4,50 мл 45,0 мл
30 +
41,85 мл 4,65 мл 46,5 мл
31 +
43,20 мл 4,80 мл 48,0 мл
32 +
44,55 мл 4,95 мл 49,5 мл
33 +
45,90 мл
34 + 5,10ml 51,0ml
47,25 мл 5.25 мл 52,5 мл
35 +
48,60 мл 5,40 мл 54,0 мл
36 +
49.95 мл 5,55 мл 55,5 мл
37 +
51,30 мл 5.70 мл 57,0 мл
38 +
52,65 мл 5,85 мл 58,5 мл
39 +
54,00 мл 6,00 мл 60,0 мл
40 +
55,35 мл 6,15 мл 61,5 мл
41 +
56,70 мл 6,30 мл 63,0 мл
42 +
58,05 мл 6,45 мл 64,5 мл
43 +
59,40 мл 6,60 мл 66,0 мл
44 +
60,75 мл 6,75 мл 67,5 мл
45 +
62,10 мл 6,90 мл 69,0 мл
46 +
63,45 мл 7,05 мл 70,5 мл
47 +
64,80 мл 7,20 мл 72,0 мл
48 +
66,15 мл 7,35 мл 73,5 мл
49 +
67,50 мл 7,50 мл 75,0 мл
50 +
Проведение теста.
Ополоснуть инкубационную ванну буфером для Маркировать подносы несмываемым маркером. Удалять
1.
разведения/промывки и удалить раствор. загрязнения кратким ополаскиванием буфером.
2. Разместить по одной полоске в каждый канал. Разместить полосы в каналы подноса инкубации, одна полоса для
каждого образца, соответственно для контроля, номером вверх.
Используйте пинцет.
3. Добавить в каждый канал по 1.5 мл буфера и инкубировать в Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и не
течение 5 минут при комнатной температуре на шейкере. плавают частично на поверхности буфера. Используйте платформу
шейкера с частотой колебаний 40 циклов/мин.
4. Добавить 20 мкл каждого образца пациента или 100 мкл каждого Пипеткой наносите контроль и образцы непосредственно на номер
контроля соответственно полос, в то время как происходят колебания платформы.
6. Декантировать жидкость. Полосы прилипают к подносу инкубации. Удалите оставшуюся
жидкость тщательным осушением подноса инкубации
фильтровальной бумагой.
7. 3x5 минут промывка: добавьте разбавитель/промывной буфер 1.5 Промойте платформу шейкера. При промывке готовят конъюгат
мл, выдержите 5 мин., декантируйте жидкость полностью рабочее растворение согласно таблице растворения конъюгата.
Осушите инкубационный поднос на фильтровальной бумаге, чтобы
удалить оставшуюся жидкость.
8. Пипеткой нанести 1.5 мл рабочего раствора конъюгата в каждый Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и
канал. частично не плавают на поверхности буфера.
9. Выдержать в течение 15 минут, при колебаниях, в комнатной
температуре.
10.Декантировать жидкость. Удалите оставшуюся жидкость, тщательно осушая поднос
инкубации на фильтровальной бумаге.
11. 3x кратная промывка, как описывает шаг 7.
12. Добавить дистиллированную воду 1.5 мл.
13. Выдержать в течение 1 минуты, при колебаниях в комнатной
температуре.
3. 14. Декантировать жидкость. Удалите оставшуюся жидкость, тщательно осушая поднос
инкубации на фильтровальной бумаге.
15. Добавить 1.5 мл хромоген/раствор субстрата Визуально удостоверьтесь, что полосы полностью смочены и не
плавают частично на поверхности хромоген/раствора субстрата.
16. Инкубировать на платформе шейкера:EVB lgG 5-15 минут, Остановите реакцию, когда пороговый контроль (cut off) полосы
EVB IgM 5-15 минут. станет видим. Внимание:
Превышение срока инкубации приводит к появлению фоновых
пятен.
Пороговый контроль полосы IgG: 60 kD / аналитическая секция
Пороговый контроль полосы IgA: 66 kD / аналитическая секция.
17.Остановить реакцию, декантируя жидкость. Удалите оставшуюся жидкость, тщательно осушая поднос
инкубации на фильтровальной
бумаге.
18. Трехкратная промывка дистиллированной водой 1.5 мл. Вне времени инкубации.
19. Высушить полосы для интерпретации. Удалите влажные полосы из каналов, используя пинцет. Разместите
влажные полосы на полотенце из фильтровальной бумаги и
высушите на воздухе перед интерпретацией данных.
Принцип испытания.
При помощи EBV ViraStrip EBV-специфические антитела могут Процедуры промывки между инкубацией сыворотки, конъюгата и
быть определены в человеческой сыворотке. хромоген-субстрата удаляют непрореагировавшие реактивы.
Специфические антитела связываются фиксированным антигеном Иммуноблот с интегрированной системой контроля: зеленая линия
на полосе в течение инкубации сыворотки. АP-конъюгат разделения делит полосу на раздел контроля и аналитический
связывается с этим комплексом антитело антиген в течение раздел. Раздел контроля включает контроль сыворотки, три
сопряженной инкубации. Щелочная фосфатаза конвертирует контроля конъюгата (IgG, IgA, IgM) и пороговый контроль.
хромоген-субстрат и окрашивает комплекс антитело антиген на Аналитический раздел включает EBV-специфические антигены.
полосе фиолетовым цветом.
Оценка
Регистрируйте данные в протоколе оценки. Приклейте или закрепите пленкой полосы на протокол. Разместите
1.Подготовить
протокол оценки: зеленую линию разделения точно по напечатанной линии разделения в протоколе.
Испытание действительно, если полосы функционального контроля, конъюгат контроля и порогового контроля
2.Действительность
теста становятся ясно видимы на каждой полосе. Если нет реакции по крайней мере одного из них, тест недействителен
и должен быть проведен повторно при точном соблюдении инструкций.
Не оценивайте недействительные полосы.
Протокол оценки включает в себя напечатанную полосу положительного контроля (маркировка PC EV).
3.Определение
образцов пациента Выровняйте разделительные линии на полосе пациента и полосе положительного контроля. Совместите полосы и
отметьте их в протоколе. Не оценивайте неопределенные полосы.
4.Оценка полос В соответствии с лабораторными качественными методиками, пороговый контроль должен использоваться для
с помощью порогового каждой серии испытаний (11).Полоса порогового контроля интегрирована в контрольную секцию каждой полосы
контроля: EBV ViraStrip. Интенсивность полосы порогового контроля указывает пограничную линию для оценки полосы.
Полоса считается реактивной, если ее интенсивность равна или превышает пороговый контроль. Реактивные
полосы маркированы знаком Х в протоколе.
Полоса считается слабой, если ее интенсивность ниже, чем полосы порогового контроля. Слабые полосы
отмечаются знаком (Х) в протоколе.
Оценка образцов пациента:
Полосы нужно рассматривать как симптомы заболевания. Для заключительного клинического диагноза все результаты этого и других испытаний
должны быть соотнесены с клинической историей, эпидемиологическими данными и другими данными, доступными лечащему врачу.
Антигены VCA gp125, VCA p18, EBNA1 p76, EA-D, p54 характеризованы как специфические для EBV. Дополнительные нехарактерные полосы
Идентифицированные полосы/kD Результат Интерпретация
Нет полос Отрицательный Специфических антител против EBV не
обнаружено.
Слабая полоса VCA gp125 или VCA p18. VCA сомнительный Низкий титр антител против VCA, соотв.
.EBNA 1 соотв.
Слабая полоса EBNA 1 p76. EA-D определяется. В случае клинического
EBNA 1 сомнительный подозрения инфекции EBV повторно
Слабая полоса EA-D p54. проверить образец через 2-3 недели.
EA-D сомнительный
Реактивная полоса VCA gp 125 или VCA p18 VCA положительный Обнаружены антитела против VCA
антигена.
Реактивная полоса EBNA1 p76 EBNA 1 положительный Обнаружены антитела против EBNA 1
антигена.
Реактивная полоса EA-D p54 EA-D положительный Обнаружены антитела против EA-D
антигена.
могут появиться, но они не оцениваются.
