Extracção do DNA do kiwi

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Extracção do DNA do kiwi

  1. 1. <ul><li>Extracção do ADN do Kiwi </li></ul>
  2. 2. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Maceração do kiwi </li></ul><ul><li>Depois de descascado, introduziu-se o kiwi na liquidificadora. Com a força centrífuga, as células que constituem a polpa do fruto são dissociadas dos tecidos a que pertencem e pode haver destruição da sua estrutura (parede e membrana celular). </li></ul>
  3. 3. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Destruição das paredes e membranas celulares </li></ul><ul><li>Para ajudar a romper membranas celulares (incluindo as membranas nucleares) removendo os lípidos das suas estruturas, juntou-se detergente ao kiwi e sal para neutralizar proteínas e estabilizar o ADN. </li></ul>Sal Detergente
  4. 4. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Separação dos fragmentos celulares das moléculas de ADN através de 2 filtrações: </li></ul><ul><li>1ª com papel de filtro </li></ul><ul><li>2ª com algodão hidrófilo </li></ul><ul><li>Obteve-se um filtrado. </li></ul>
  5. 5. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Aglutinação das moléculas de ADN com separação dos restantes constituintes do filtrado </li></ul><ul><li>Ao filtrado juntou-se álcool com a formação de duas fracções: uma alcoólica e outra aquosa. </li></ul><ul><li>Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada. </li></ul>Álcool Filtrado
  6. 6. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada. </li></ul>
  7. 7. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Extracção do precipitado para coloração </li></ul><ul><li>Com a ajuda de gaze, procedeu-se à filtração do precipitado. </li></ul>
  8. 8. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Coloração do ADN </li></ul><ul><li>Utilizando a técnica de Feulgen (ADN em água destilada, ADN em HCl, ADN em água destilada e ADN em reagente de Schiff) não se obtiveram os resultados esperados: “flóculos carmins”. </li></ul><ul><li>Com a aplicação de verde de metilo ao ADN (experimentando), obteve-se apenas um contraste como evidencia a figura. </li></ul>ADN
  9. 9. Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi <ul><li>Discutindo os resultados... </li></ul><ul><li>Tendo em conta que os procedimentos foram seguidos com rigor, a coloração não terá sido bem evidente por alteração da qualidade do corante utilizado (?...) </li></ul><ul><li>Concluindo ... </li></ul><ul><li>Recomenda-se a repetição de todo o processo de coloração com a utilização de outros reagentes (o corante do protocolo - reagente de Schiff, bem como de outros corantes com afinidade com o ADN - verde de metilo, azul de metileno, água iodada...) para identificação e destaque do ADN extraído. </li></ul>

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