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PARTE  II Diagnóstico microbiológico de las Enfermedades Infecciosas: 2. Diagnóstico directo. Toma y calidad de las muestr...
JUSTIFICACIÓN DEL DIAGNÓSTICO ETIOLOGICO DE LAS  INFECCIONES VIRALES <ul><li>ENFERMEDADES GRAVES POR VIRUS </li></ul><ul><...
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DIAGNÓSTICO DE VIRUS: Toma de muestras
Muestras clínicas para el aislamiento de virus
CONSIDERACIONES A LA TOMA DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE LA INFECCION VIRAL <ul><li>Precoz </li></ul><ul><li>Adecuada ...
DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Microscopía óptica
Fibroblastos infectados por CMV
Célula epitelial infectada por HSV Células sanguíneas infectadas por CMV (antigenemia pp65) Varicela-zoster, influenza, pa...
DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Inmunocromatografía
DETECCIÓN DE ANTÍGENO (Inmunocromatografía)
FUNDAMENTO DE  INMUNOCROMATOGRAFÍA PARA DETECCIÓN DE ANTÍGENOS C T S TIRA NITROCELULOSA Antígeno en muestra Anticuerpo de ...
T ÉCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFÍA: DETECCIÓN DEL VIRUS INFLUENZA
<ul><li>Rotavirus  </li></ul><ul><li>Virus Respiratorio Sincitial </li></ul><ul><li>Influenza A, B </li></ul><ul><li>………… ...
CULTIVO DE VIRUS: Cultivos celulares
 
 
fibroblastos
<ul><li>CULTIVOS CELULARES: </li></ul><ul><li>Primarios </li></ul><ul><li>Diploides </li></ul><ul><li>Línea contínua </li>...
 
 
 
 
 
 
MICROSCOPIO INVERTIDO
DETECCION DE LA PRESENCIA DE LOS VIRUS EN LOS CULTIVOS CELULARES <ul><li>EFECTO CITOPÁTICO </li></ul><ul><li>- alteracione...
EFECTO CITOPÁTICO: Lisis de la monocapa
EFECTO CITOPÁTICO (parcial)
EFECTO CITOPÁTICO (completo)
INCLUSIONES VIRALES EN LOS CULTIVOS CELULARES
CUERPOS DE INCLUSIÓN
HEMADSORCIÓN
IDENTIFICACION DE LOS VIRUS EN LOS CULTIVOS CELULARES <ul><li>Neutralización del efecto observado  </li></ul><ul><li>(cito...
Fibroblastos infectados por CMV
 
 
 
 
SHELL VIAL
 
SHELL VIAL
Fibroblastos infectados por CMV
DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Técnicas moleculares
DIAGNÓSTICO DE LAS VIRIASIS RESPIRATORIAS <ul><li>Clínica </li></ul><ul><li>Imagen   Dtico. inespecífico </li></ul><ul><li...
Termociclador <ul><li>Ciclos de: </li></ul><ul><li>Desnaturalización </li></ul><ul><li>Anillamiento </li></ul><ul><li>Elon...
La amplificación de ac. nucleicos en el diagnóstico de las enfermedades virales <ul><li>Diagnóstico (sensibilidad, único m...
<ul><li>CUANTIFICACIÓN DEL VIRUS EN SANGRE  </li></ul><ul><li>(plasma, suero ) </li></ul><ul><li>VIREMIA    nº de copias ...
PCR CUANTITATIVA: Carga Viral    (sangre total, plasma, suero) <ul><li>VIH    copias / ml  [20-10.000.000] </li></ul><ul>...
DIAGNÓSTICO CITOMEGALOVIRUS <ul><li>Serología  </li></ul><ul><li>Antigenemia (pp65) </li></ul><ul><li>Cultivo convencional...
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Tema 6 DiagnóStico VirolóGico

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Tema 6 DiagnóStico VirolóGico

  1. 1. PARTE II Diagnóstico microbiológico de las Enfermedades Infecciosas: 2. Diagnóstico directo. Toma y calidad de las muestras. Procesamiento en el laboratorio de microbiología. Técnicas de diagnóstico rápido 3. Diagnóstico indirecto. Técnicas. Sensibilidad y especificidad de los estudios serológicos. Perfiles serológicos para el diagnóstico de diferentes patologías infecciosas 4. Microbiología molecular. Diagnóstico de microorganismos por la detección de ácidos nucleicos. Epidemiología molecular. Estudio de los polimorfismos genéticos 5. Diagnóstico de las enfermedades producidas por micobacterias. El laboratorio de micobacterias. Muestras clínicas y su procesamiento. Nuevas técnicas aplicadas al diagnóstico de M. tuberculosis 6. Diagnóstico de los virus . El laboratorio de virología. Muestras clínicas. Cultivos celulares y otras técnicas de diagnóstico. Cuantificación viral
  2. 2. JUSTIFICACIÓN DEL DIAGNÓSTICO ETIOLOGICO DE LAS INFECCIONES VIRALES <ul><li>ENFERMEDADES GRAVES POR VIRUS </li></ul><ul><li>- terapias agresivas (cáncer ..) </li></ul><ul><li>- transplantados </li></ul><ul><li>- sida </li></ul><ul><li>DESARROLLO DE NUEVAS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS </li></ul><ul><li>- más asequibles </li></ul><ul><li>- técnicas moleculares </li></ul><ul><li>EXISTENCIA DE TRATAMIENTOS EFICACES </li></ul>
  3. 3. Diagnóstico de laboratorio de las infecciones virales <ul><li>Confirmar el diagnóstico clínico </li></ul><ul><li>Seleccionar un tratamiento adecuado </li></ul><ul><li>Monitorizar la evolución de la enfermedad </li></ul><ul><li>Hacer un seguimiento epidemiológico de la </li></ul><ul><li>enfermedad </li></ul>
  4. 4. DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VIRALES <ul><li>Directo: </li></ul><ul><li>Demostración de la presencia del virus en la muestra clínica </li></ul><ul><li>Indirecto: </li></ul><ul><li>Demostración de la presencia de anticuerpos específicos en el suero </li></ul>
  5. 5. DIAGNOSTICO INDIRECTO DE LAS INFECCIONES VIRALES: <ul><li>Infecciones agudas: </li></ul><ul><li>IgM, seroconversión, serorefuerzo </li></ul><ul><li>Infecciones crónicas: </li></ul><ul><li>IgG, avidez </li></ul>Demostración de la presencia de anticuerpos específicos en el suero
  6. 6. DIAGNOSTICO DIRECTO DE LAS INFECCIONES VIRALES: <ul><li>Inoculación en animales de experimentación </li></ul><ul><li>Inoculación en huevo embrionado </li></ul><ul><li>Inoculación en cultivos celulares: </li></ul><ul><li>- primarios, diploides, líneas contínuas </li></ul><ul><li>Detección del virus en la muestra: </li></ul><ul><li>- visualización partícula viral (M/E) </li></ul><ul><li>- detección de componente estructural </li></ul><ul><li> (Ag, ac. nucleico) </li></ul>Demostración de la presencia del virus en la muestra clínica
  7. 7. DIAGNÓSTICO DE VIRUS: Toma de muestras
  8. 8. Muestras clínicas para el aislamiento de virus
  9. 9. CONSIDERACIONES A LA TOMA DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE LA INFECCION VIRAL <ul><li>Precoz </li></ul><ul><li>Adecuada (raspados, lavados ..)  ¡células! </li></ul><ul><li>Localización 1 ria de la infección y otras posibles </li></ul><ul><li>Transporte y conservación </li></ul><ul><li>Decontaminación </li></ul><ul><li>Infección enfermedad (viremia) </li></ul>
  10. 10. DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Microscopía óptica
  11. 11. Fibroblastos infectados por CMV
  12. 12. Célula epitelial infectada por HSV Células sanguíneas infectadas por CMV (antigenemia pp65) Varicela-zoster, influenza, parainfluenza, adenovirus … Células de mucosa respiratoria infectadas por HSV
  13. 13. DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Inmunocromatografía
  14. 14. DETECCIÓN DE ANTÍGENO (Inmunocromatografía)
  15. 15. FUNDAMENTO DE INMUNOCROMATOGRAFÍA PARA DETECCIÓN DE ANTÍGENOS C T S TIRA NITROCELULOSA Antígeno en muestra Anticuerpo de Captura contra antígeno específico G Anticuerpos de detección marcados con Oro Coloidal G Anticuerpo de Captura contra anticuerpo de detección
  16. 16. T ÉCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFÍA: DETECCIÓN DEL VIRUS INFLUENZA
  17. 17. <ul><li>Rotavirus </li></ul><ul><li>Virus Respiratorio Sincitial </li></ul><ul><li>Influenza A, B </li></ul><ul><li>………… </li></ul>
  18. 18. CULTIVO DE VIRUS: Cultivos celulares
  19. 21. fibroblastos
  20. 22. <ul><li>CULTIVOS CELULARES: </li></ul><ul><li>Primarios </li></ul><ul><li>Diploides </li></ul><ul><li>Línea contínua </li></ul>
  21. 29. MICROSCOPIO INVERTIDO
  22. 30. DETECCION DE LA PRESENCIA DE LOS VIRUS EN LOS CULTIVOS CELULARES <ul><li>EFECTO CITOPÁTICO </li></ul><ul><li>- alteraciones morfológicas </li></ul><ul><li>- inclusiones citoplásmicas </li></ul><ul><li>- lisis (generalizadas, focales) </li></ul><ul><li>- fusiones (sincitios) </li></ul><ul><li>OTROS: hemaglutinación, hemadsorción … </li></ul>
  23. 31. EFECTO CITOPÁTICO: Lisis de la monocapa
  24. 32. EFECTO CITOPÁTICO (parcial)
  25. 33. EFECTO CITOPÁTICO (completo)
  26. 34. INCLUSIONES VIRALES EN LOS CULTIVOS CELULARES
  27. 35. CUERPOS DE INCLUSIÓN
  28. 36. HEMADSORCIÓN
  29. 37. IDENTIFICACION DE LOS VIRUS EN LOS CULTIVOS CELULARES <ul><li>Neutralización del efecto observado </li></ul><ul><li>(citopático, hemaglutinación ..) </li></ul><ul><li>Detección antígeno con Ac. específicos marcados </li></ul><ul><li>(IF, EIA, RIA) </li></ul><ul><li>Detección ac. nucleico </li></ul><ul><li>(hibridación, amplificación) </li></ul>
  30. 38. Fibroblastos infectados por CMV
  31. 43. SHELL VIAL
  32. 45. SHELL VIAL
  33. 46. Fibroblastos infectados por CMV
  34. 47. DIAGNÓSTICO DIRECTO DE VIRUS: Técnicas moleculares
  35. 48. DIAGNÓSTICO DE LAS VIRIASIS RESPIRATORIAS <ul><li>Clínica </li></ul><ul><li>Imagen Dtico. inespecífico </li></ul><ul><li>Epidemiología </li></ul><ul><li>Aislamiento en cultivo Dtico. tardío </li></ul><ul><li>Serológico </li></ul><ul><li>Detección de Ag Dtico. específico, rápido </li></ul><ul><li>Amplificación genética </li></ul>
  36. 49. Termociclador <ul><li>Ciclos de: </li></ul><ul><li>Desnaturalización </li></ul><ul><li>Anillamiento </li></ul><ul><li>Elongación </li></ul>PCR
  37. 50. La amplificación de ac. nucleicos en el diagnóstico de las enfermedades virales <ul><li>Diagnóstico (sensibilidad, único método) </li></ul><ul><li>Cuantificación (carga viral) </li></ul><ul><li>Epidemiología molecular (tipado) </li></ul><ul><li>Detección de la resistencia al tto. (VIH,VHB…) </li></ul><ul><li>Identificación de nuevos patógenos (VHC, HHP-8 …) </li></ul>
  38. 51. <ul><li>CUANTIFICACIÓN DEL VIRUS EN SANGRE </li></ul><ul><li>(plasma, suero ) </li></ul><ul><li>VIREMIA  nº de copias o UI / ml </li></ul><ul><li>DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDAD (CMV) </li></ul><ul><li>PROGRESIÓN DE LA INFECCIÓN (VIH) </li></ul><ul><li>RIESGO DE TRANSMISIÓN VERTICAL (MADRE-HIJO) </li></ul><ul><li>EFICACIA DE LA TERAPIA ANTIVIRAL </li></ul>
  39. 52. PCR CUANTITATIVA: Carga Viral (sangre total, plasma, suero) <ul><li>VIH  copias / ml [20-10.000.000] </li></ul><ul><li>VHC  UI / ml [15 - 69.000.000] </li></ul><ul><li>VHB  UI / ml [20 - 170.000.000] </li></ul><ul><li>CMV, Epstein-Barr, HHV6, virus JC/BK .... </li></ul>
  40. 53. DIAGNÓSTICO CITOMEGALOVIRUS <ul><li>Serología </li></ul><ul><li>Antigenemia (pp65) </li></ul><ul><li>Cultivo convencional </li></ul><ul><li>Cultivo shell vial </li></ul><ul><li>Métodos moleculares (PCR) </li></ul>

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