muestra las utilidades del microscopio, sus partes y recomendaciones de uso.

1. LABORATORIO No.1
ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
INTRODUCCIÓN Holanda, conserva uno de los primeros
Desde los inicios de la microscopia, los microscopios conocidos, probablemente
investigadores vienen desarrollando fabricado por uno de los hermanos
métodos cada vez más sensibles, Janssen. Estos aparatos, eran
eficaces y con mejor resolución. Al extremadamente simples, por lo que solo
principio ellos debieron enfrentarse a los permitían el examen de cuerpos opacos.
problemas de aberraciones ópticas, A fines del siglo XVII el italiano Camping
imágenes borrosas y pobre desarrollo de construyó un microscopio que hizo
lentes, los cuales se mantuvieron hasta posible la observación de preparaciones
mediado del siglo XIX que aparecieron transparentes. Las imágenes obtenidas
los lentes objetivos que reducían la por estos microscopios eran muy
aberración cromática con una apertura deficientes.
numérica entre 0.65 y 1.25. Estos En Inglaterra el científico Robert Hooke,
avances se iniciaron con los reportes trató de construir lentes más eficaces,
sobre los métodos de iluminación que pero sus resultados no fueron
propuso el profesor August Kölher, en satisfactorios; sin embargo, sus
1893, y que sentaron las bases de la observaciones contribuyeron al
microfotografía moderna. En las últimas establecimiento de la microscopía como
décadas se ha incrementado la ciencia. Mientras, en el siglo XVII Jonh
aplicación de la microscopía óptica en los Marshall y otros fabricantes de
laboratorios de investigación de una microscopios, perfeccionaron mucho el
amplia variedad de disciplinas como la diseño mecánico, pero no la calidad de
biología celular y molecular, los lentes. Pero fue, durante el siglo XIX,
microbiología, inmunología y que se realizaron grandes progresos en
virología. El rápido desarrollo de los sistemas ópticos y en la microscopía
diferentes métodos como los de en general; aún así, fue imposible evitar
fluorescencia, contraste de fases, la dispersión de la luz en sus colores
confocal y de campo oscuro entre otros, componentes en la fabricación de
que sumados a los avances en la microscopios. Este fenómeno conocido
digitalización y análisis de imágenes, han como aberración cromática, producía una
permitido a los microscopistas obtener imagen borrosa y coloreada.
resultados rápidos, cuantificables y Las primeras lentes adecuadamente
confiables de una gran variedad de corregidas para microscopios,
especimenes biológicos. Al margen de denominadas acromáticas, hicieron su
estos avances, las bases del aparición alrededor de 1830; pero la
funcionamiento de los distintos tipos de aberración esférica, también producía
microscopios ópticos siguen siendo los una imagen desenfocada. En 1886, Ernot
mismos que se presentan en esta Abbe y Caol Zeiss en Alemania
práctica y con los cuales el estudiante fabricaron unas lentes apocromáticas
deberá familiarizarse. que corrigieron ambas aberraciones.
A finales del siglo XIX, los microscopios
BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO comenzaron a adquirir la forma que
Tres eminentes holandeses, Antón Van tienen actualmente, con los aportes de
Leeuwenhoek, Hans y Zaccharias Khöler.
Janssen, fabricantes de lentes, Desde el año 1900, los microscopios se
contribuyeron al desarrollo de la han modificado poco en sus principios
microscopía. El museo de Middleburg, en fundamentales, pero mucho en sus
5

2. detalles. Estos perfeccionamientos 1.3 CLASES DE MICROSCOPIOS:
incluyen, la incorporación de varios Existen dos tipos de microscopios:
objetivos, cada uno de aumento diferente simples y compuestos
y roscados a un tambor giratorio o Microscopios simples : Consta de
revolver. un solo sistema de lente
En 1935, Frizt Zenique inventó la técnica Microscopios compuestos:
del contraste de fase que hace posible la Constan de dos (2) sistemas de
observación de especimenes antes lentes: el objetivo y el ocular.
invisibles. El microscopio compuesto es un
El microscopio electrónico, desarrollado instrumento que aumenta
en vísperas de la segunda guerra considerablemente la imagen de los
mundial, ha sido de gran utilidad para el objetivos que en él se observan. Entre
estudio de moléculas químicas, virus y las variedades de éste microscopio
organelas celulares. encontramos el electrónico y el fotónico u
Existe un tipo de microscopio electrónico, óptico. Este último tipo de microscopio
llamado de barrido, que ha adquirido una está formado por una parte mecánica y
extraordinaria utilidad, ya que ofrece una parte óptica. (Figura No.1.1)
representaciones tridimensionales muy
reales de las células y las estructuras Parte Mecánica:
celulares. a. Pie o Base: Generalmente en forma
de herradura o rectangular, es el apoyo
de las demás piezas del microscopio. El
1.1 OBJETIVOS: pie debe ser sólido y pesado para
1.1.1 OBJETIVO GENERAL: asegurar su estabilidad.
• Valorar la importancia del b. Columna o Brazo: Este elemento
microscopio como instrumento básico relaciona el tubo del microscopio con el
para el estudio e investigación en las pie; sostiene la platina y el condensador
Ciencias Biológicas. y de ella se agarrará el microscopio
cuando se traslada durante los trabajos.
1.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS: En algunos microscopios la columna es
• Identificar las diferentes partes que móvil
constituyen el microscopio y
reconocer las funciones de cada una
de ellas
• Adquirir habilidad en el uso y manejo
correcto del microscopio, siguiendo
las indicaciones de las guías de
laboratorio.
1.2 MATERIALES
Microscopios
Porta-objetos y cubre-objetos
Papel limpia lentes
Goteros
Hilos de lana y algodón
Flores con polen Figura No.1.1 Microscopio Óptico
Para observar imágenes de las diferentes partes
del microscopio haz clic aquí
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3. c. Tubo del Ocular: Está colocado en la Parte óptica:
parte superior del microscopio, donde Esta integrada por los objetivos, oculares
están acoplados los oculares, que y el aparato de iluminación (espejo,
pueden tener movimiento vertical, con diafragma, condensador y filtros). Estos
ayuda de una cremallera sobre la elementos son los que permiten la
columna. En algunos microscopios el iluminación, ampliación y la visión
tubo del ocular es inclinado y se aumentada del objetivo.
mantiene fijo, en este caso se mueve la a. Objetivo: Es la pieza más importante
platina. del microscopio. Ellos se acoplan
d. Revólver o Disco Giratorio: Está mediante roscas estándar al revólver y
debajo del tubo ocular donde están pueden ser cambiados de posición con
acoplados los objetivos, presenta sólo rotarlos. Reciben el nombre de
movimiento giratorio para facilitar el objetivos porque son los lentes que están
cambio de un objetivo a otro. más cerca del objeto. La mayoría de los
e. Platina: Es una placa que puede ser microscopios tienen tres o cuatro
cuadrada, circular o rectangular, con un objetivos. Las lentes de los objetivos son
orificio central que permite el paso de la de aumentos diversos, los más usados
luz a través de ella. Su función es son:
sostener las placas con los preparados Objetivos de pequeños aumentos 3.5x;
biológicos que se van observar 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de grandes
f. Carro: es un dispositivo ubicado sobre aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de
la platina, cuya función es sujetar y inmersión 90x, 95x y 100x.
mover la placa que se va a estudiar.
Posee dos tornillos que permiten Las lentes de inmersión se emplean con
movimientos horizontales (hacia aceite de inmersión para conectar la
adelante, hacia atrás, hacia la derecha y lente frontal (lente inferior del objetivo) al
hacia la izquierda) del portaobjeto. porta-objeto. Entre el objetivo y el objeto
se produce una pérdida de luz por
Cuando la platina carece del anterior reflexión que se corrige adicionando al
dispositivo, lleva dos soportes para fijar preparado unas gotas de aceite de cedro
las placas llamadas ganchos o uñas. (aceite de inmersión) cuyo índice de
refracción 1.515, es próximo al cristal.
g. Mecanismos de Movimiento: Está Este aceite también reduce o suprime
integrado por el tornillo macrométrico y el por completo la refracción de los rayos
micrométrico de luz provenientes de la fuente
Tornillo Macrométrico: Acerca o luminosa.
aleja rápidamente el objetivo del
preparado a observar; su función es
lograr un enfoque más o menos claro
o aproximado del objeto.
Tornillo Micrométrico: Acerca o
aleja el objetivo del preparado, pero
lentamente, casi imperceptiblemente,
permite desplazamientos muy finos
de la platina o del tubo del ocular.
Durante la observación y enfoque
este tornillo debe estarse moviendo
permanentemente; su función es
darle nitidez al enfoque.
Figura No. 1.2 Especificaciones de los
objetivos.
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4. b. Ocular: Están colocados en la parte sucede cuando se trabaja con objetivos
superior del tubo ocular. Está formado de menor aumento (4x, 10x).
por dos sistemas de lentes dispuestos de g. Filtros: Entre la fuente de luz y el
un cilindro. Su finalidad es aumentar la condensador de algunos microscopios
imagen dada por el objetivo y existe un portafiltros en el cual se puede
eventualmente corregir algunos defectos colocar filtros a voluntad del observador.
de la misma. Reciben dicho nombre Los filtros son elementos de cuarzo o de
porque son las lentes que se encuentran vidrio, pueden ser de color azul, amarillo
más cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; o verde. Ellos interceptan el haz de rayos
5x; 6,3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x. luminosos antes de entrar al
El aumento de la imagen de un objeto condensador, esto se hace con el objeto
observado a través de un microscopio, de seleccionar un tipo de luz
se calcula multiplicando el número de determinada para una experiencia dada.
aumento del objetivo con el cual se está Para observar imágenes de filtros haz clic aquí.
trabajando por el número de aumento del
ocular que se está utilizando. 1.4 LA LUZ:
c. Aparato de iluminación: Está La luz es una forma de energía
conformado por la fuente de luz, el transportada continuamente por el
diafragma, el condensador y los filtros. espacio a velocidades muy elevadas
d. Fuente de luz: Puede ser natural o (330.000 Km/s en el vacío). La luz está
artificial, cuando es natural (solar) o formada por pequeños corpúsculos que
procede de un foco luminoso situado salen de un foco luminoso en forma de
fuera del microscopio, un espejo recoge ondas. El brillo de la luz es proporcional
la luz del medio y la refleja a través del a la altura o amplitud de la onda y su
objeto y del sistema de lentes. La luz color depende de la longitud de ésta. La
artificial la constituye generalmente un luz blanca está constituida por una gama
bombillo ubicado en el microscopio y de colores del espectro visible, éstos
conectado a un circuito eléctrico de bajo colores son: rojo, anaranjado, amarillo,
voltaje. verde, azul y violeta.
e. Diafragma: Está ubicado entre la Cada color corresponde a una longitud
fuente de luz y el condensador, de onda determinada, por consiguiente,
inmediatamente debajo de la platina, su la luz blanca se compone de muchos
función es regular la intensidad de luz rayos de luz, todos vibrando con
que atraviesa el objeto. El diafragma diferentes longitudes de onda. (Figuras
tiene una palanquita que al moverla 1.3 y 1.4).
hacia delante o hacia atrás agranda o
achica el orificio central, dejando pasar
mayor o menor cantidad de luz
respectivamente.
f. Condensador: Es un elemento cónico
que posee un sistema de dos lentes
convergentes que recogen o concretan
los rayos luminosos para enviarlos al
objetivo por el agujero de la platina.
Existe un tornillo manual que permite
guardar la altura del condensador. Esta
graduación es importante cuando se
trabaja con objetivos de gran aumento
(40x, 100x), ya que en la medida que se Figura No.1.3. Naturaleza Ondulatoria de
trabaja con éstos objetivos el la Luz
condensador debe subirse. Lo contrario
8

5. La luz de una sola longitud de onda se Los detalles solo se observan si la
llama monocromática. Si bien se utilizan preparación es lo suficientemente
casi solo microscopios de luz blanca, la delgada para que sea
mayoría de las lentes modernas están transparente con la luz que recibe. Para
diseñadas para el uso de luz realizar preparaciones microscópicas los
monocromática verde. porta y cubre-objetos deben limpiarse
antes de usarse. Un buen método es
guardarlos en alcohol y antes de
utilizarlos secarlos con un paño limpio y
libre de grasa. Los cubre-objetos deben
limpiarse con mucho cuidado porque son
frágiles.
Las preparaciones microscópicas pueden
ser acuosas o en seco.
Las preparaciones acuosas son las más
simples y fáciles usadas para examinar
cualquier objeto fluido, como agua de
estanque o sangre. Se deposita una
gotita del líquido que se desea observar
en el centro del porta-objeto, se coloca el
Figura No.1.4. Espectro de Luz Visible cubreobjeto sobre el porta, forme con las
dos láminas un ángulo de 45 grados y
1.5 LENTES: luego deje caer suavemente la laminilla
Las lentes son el componente más cubre-objeto sobre el preparado,
importante del microscopio; se fabrican evitando la formación de burbujas. Figura
de vidrio u otros materiales No.1.5.
transparentes.
Pueden ser convexas o cóncavas en El líquido no debe rebosar los bordes del
ambas superficies, planas en una cara o cubre-objeto, en caso de que suceda
tener cualquier combinación de éstas dos seque cuidadosamente el líquido
formas en su superficie. sobrante usando papel absorbente o
Las lentes son de dos tipos: positivas y papel toalla. La preparación queda así
negativas. lista para la observación. Estas
Lentes Positivas: Hacen converger preparaciones son de corta duración
los rayos de luz, es decir, los porque se secan rápidamente; para
concentra para formar una imagen hacerlas más duraderas debe cerrarse
real. herméticamente los bordes del cubre
Lentes Negativas: Hacen divergir los objeto; la duración de ésta preparación
rayos de luz, sin formar ninguna no es indefinida. Los bordes se pueden
imagen real. cerrar con vaselina o esmalte. Un cierre
más hermético se consigue cerrando con
1.6 PREPARACIONES bálsamo de Canadá (Euparal).
MICROSCÓPICAS:
Debemos tener en cuenta que a través Las preparaciones en seco como lo
del microscopio solamente se pueden índica su nombre, se hacen para
observar objetos que dejan pasar rayos observar objetos secos, tales como alas
de luz, por esta razón el preparado debe de insectos. Aquí se utiliza goma
ser lo más delgado y transparente arábiga, la cual se extiende sobre el
posible, pues un preparado grueso solo porta, luego se deposita el objeto sobre
nos permite observar una mancha negra. la superficie y se deja endurecer la
9

6. goma. Una vez endurecida la goma se que se emplea el reactivo incoloro de
pone un poco de bálsamo de Canadá Schiff par teñir el DNA en tonos rojizos
sobre el objeto y se coloca el cubre- purpúreos. (Figura 1.6)
objeto.
Figura No.1.5. Preparaciones Acuosas Figura No.1.6. Colorantes.
Haz clic aquí.
1.7 COLORANTES :
1.8 MANEJO DEL MICROSCOPIO:
Los colorantes son sales compuestas por
Antes de iniciar una observación
un ácido y una base. Se clasifican en
microscópica se debe iluminar
ácidos, básicos y neutros, según la parte
completamente el campo visual, para lo
de los mismos que imparta el color. En
cual se procede de la siguiente manera:
los colorantes ácidos el grupo cromóforo,
el que imparte el color, es el componente
1. Gire el revólver hasta que el objetivo
ácido, el componente básico es incoloro.
de menor aumento quede en posición de
Lo contrario sucede con los colorantes
trabajo, o sea que quede alineado con
básicos. Los colorantes neutros tienen
los oculares. Usted sentirá un golpecito
coloreado el componente ácido y el
(como un clic) cuando el objetivo llegue a
básico.
su posición de uso.
La mayoría de los colorantes son
2. Lleve el condensador a su posición
sintéticos, aunque se emplean todavía
más alta.
algunos naturales. La hematoxilina y el
3. Accione el tornillo macrométrico hasta
carmín son los colorantes naturales más
que el objetivo de menor aumento
importantes para la tinción de tejidos. El
descienda lo máximo posible o hasta que
carmín es producido por la conchinilla
la mesa ascienda lo máximo posible,
(Coccus cacti).
según sea el modelo del microscopio.
La hematoxilina se extrae de la madera
Esta operación se hace llegar hasta un
de un árbol de México, el palo
punto de parada (tope).
Campeche.
4. Mire a través del ocular o gire el
Otro colorante es la orceína que se
espejo hacia la fuente de luz hasta
extrae de líquenes. Existen tres técnicas
obtener un máximo de iluminación. Si el
de tinción de uso general: la coloración
campo visual no queda uniformemente
seca o de tejidos muertos, la coloración
iluminado, baje lentamente el
vital o de tejidos vivos y la histoquímica,
condensador hasta obtener una
en la cual se utilizan las reacciones de
iluminación uniforme. Si su microscopio
los colores para hacer visible los
es eléctrico siga los pasos 1, 2 y 3.
elementos estructurales de las células y
Enchufe el cable del transformador a la
de los tejidos. Una reacción histoquímica
fuente de energía.
muy conocida es la de Feulgen, en la
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7. Conecte el cable del microscopio al juntas. Mantenga las lentes limpias. No
transformador y luego accione el botón toque las lentes con los dedos, ya que el
de éste para que encienda la bombilla. sudor las daña. Nunca limpie las lentes
Mire por el ocular. con otra cosa que no sea papel especial
5. Una vez lograda una correcta para lentes.
iluminación coloque el preparado sobre 4. No permita que líquidos,
la platina. Mirando de lado, asegúrese especialmente ácidos o alcoholes, se
que el objeto a observar esté centrado pongan en contacto con su microscopio.
justo debajo del objetivo de menor 5. Use siempre cubre-objetos cuando
aumento. observe en agua u otros líquidos
6. Mirando a través del ocular mueva 6. Localice siempre el objeto con el
suavemente el tornillo macrométrico, si el objetivo de menor aumento
objeto está bien centrado aparecerá su 7. Los sedimentos de grasa, el aceite de
imagen en el campo visual. Déle nitidez inmersión y los residuos de éstos
al enfoque accionando el tornillo productos deben eliminarse
micrométrico. Mueva el carro en inmediatamente con un poco de
diferentes direcciones para seleccionar el disolvente como éter o xilol. Nunca se
mejor campo posible. Puede controlar la debe emplear alcohol, ya que disuelve el
intensidad de la luz, mediante el cemento utilizado en la fabricación de los
diafragma o el regulador de la intensidad lentes. La limpieza final es más efectiva
de la luz de la bombilla. usando un poco de agua destilada.
Para hacer un enfoque con mayor 8. Cuando no se esté usando el
aumento debe seguir las indicaciones microscopio, debe mantenerse siempre
anteriores. Una vez obtenido el enfoque cubierto con una funda.
correcto con menor aumento, mueva el 9. Al finalizar sus actividades de
revolver y coloque en posición de trabajo laboratorio, tenga en cuenta lo siguiente:
el objetivo de mayor aumento. Si su 9.1 Antes de apagar la fuente de luz,
microscopio está bien calibrado debe llevar el dispositivo que regula la
aparecer enfocada la imagen del objeto. intensidad luminosa hasta O (cero).
Este enfoque se refina accionando el 9.2 Dejar el microscopio con el objetivo
tornillo micrométrico. de menor aumento en la posición de
enfoque y la platina en su máxima
Cuando el microscopio es monocular posición superior.
debe acostumbrarse a mantener también 9.3 Desenchufar el microscopio y
abierto el ojo que no utilice en la colocarle la funda protectora.
observación microscópica, esto le evita
cansancio.
2.0 EJERCICIO DE APLICACIÓN:
Con las siguientes prácticas se ejercitará
1.9 RECOMENDACIONES QUE DEBEN inicialmente al estudiante en el uso y
OBSERVARSE PARA EL BUEN USO manejo del microscopio.
Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO:
1. El microscopio es un instrumento 1. Fibra de lana o algodón:
costoso y de precisión, con muchas Coloca varias fibras de lana o algodón de
partes delicadas, por lo tanto, debemos diferentes colores sobre un portaobjetos,
darle el mejor cuido posible. coloque el cubre-objetos, enfoque con
2. Si su Microscopio presenta algún menor y mayor aumento.
defecto, consulte con su profesor. No Esquematice sus observaciones.
trate de arreglarlo Usted.
3. Las lentes del microscopio cuestan
casi tanto como todas las demás partes
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8. 2. Granos de polen:
Coloque granos de polen del estigma de
una flor en un porta-objetos, con ayuda
de un gotero ponga una gota de agua,
ubique el cubre-objetos y observe con
menor y mayor aumento. Haga un
esquema de lo observado.
3.0 CUESTIONARIO:
1. Coloque los nombres a las diferentes
partes del microscopio numeradas en
la Fig. No. 1.6 e investigue las
funciones de cada una de ellas.
2. ¿Qué otros tipos de microscopios se
utilizan en la investigación biológica?
3. ¿Qué son objetivos secos?
4. ¿Qué son objetivos de inmersión?
5. Para qué se utiliza el aceite de cedro,
cuando usamos el objetivo de
inmersión?
Cuando se utiliza un microscopio de
espejo:
6. ¿Qué importancia tiene utilizar la
parte cóncava del espejo?
7. ¿Qué importancia tiene utilizar la
parte plana del espejo?
8. Investigue sobre el funcionamiento
de los diferentes microscopios
electrónicos y establezca diferencias
entre ellos.
9. Describa las principales técnicas de
preparación de muestras empleadas
en microscopía óptica.
10. ¿Qué son los colores
complementarios y que utilidad
tendrían en microscopía óptica.
3.1 ENLACES
http://tq.educ.ar/tq03027/tipos.htm :
Como usar el microscopio, tipos,
generalidades
http://www.itg.uiuc.edu/technology/at
las/: Página con atlas de imágenes
obtenidas en diferentes tipos de
microscopios.
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12

9. FIGURA 1.6 EL MICROSCOPIO ÓPTICO
13

10. GALERIA DE IMÁGENES
1. LAS PARTES DEL MICROSCOPIO
1.1 OCULARES 1.5 CONDENSADOR
1.2 OBJETIVOS Y REVOLVER 1.6 TORNILLOS
1.3 PLATINA Y CARRO 1.7 BRAZO
1.8 LA IMAGEN
1.4 DIAFRAGMA
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14

11. 2. FILTROS 3. TINCIÓN DE MUESTRAS
2.1 FILTROS POLARIZADORES
2.2 FILTROS MONOCROMATICOS
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2.3 UBICACIÓN DE LOS FILTROS
2.4 COLORES COMPLEMENTARIOS
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