1. METODO DE CUENTA
TOTAL DE MOHOS Y
LEVADURAS
Montes Díaz Elizabeth
Morales Salgado Isaac Andres
Duran Alvarado María Eugenia
Villada García Liliana
2. 10 g. de muestra + 90 ml. de Solución
salina isotónica al 0.09 %
10 -1
Los tubos contienen 9 ml. de solución
salina isotónica al 0.09 %
10 -2
10 -3
10 -4
Para la realización de disoluciones se
trasladara 1 ml. de dilución a
dilución.
10 -5
* A partir de este punto sembrar
0.1 ml. Dilucion en placas
que contienen Agar papa
dextrosa.
3. Preparación de soluciones
0.1 ml
10 ml o 10 g de muestra
1ml
10-1
90 ml SSI
0.1 ml
10-2
1 ml
0.1 ml
Incubar 25 C 2-5 días
10-3
Contar el numero de
colonias y multiplicarlo por el
inverso de la dilución
(ufc/gr muestra)
1 ml
10-4
0.1 ml
1 ml
0.1 ml
10
-5
4. Solución salina isotónica.
Efecto conservante
Agar papa dextrosa
Los hidratos de carbono y la infusión de papa favorecen
el crecimiento de levaduras y hongos en tanto que por el
bajo rango de pH , la flora acompañante se reduce
significativamente.
Las características morfológicas típicas de los hongos
se desarrollan muy bien en este medio de cultivo.
•
•
•
•
Composición por Litro:
Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusión papa - 4g
5. MOHOS
→ El termino moho se suele aplicar para designar a ciertos hongos
filamentosos multicelulares.
→ Crecen en la superficie de los alimentos.
→ Tienen un típico aspecto aterciopelado algodonoso, a veces
pigmentado.
→ Intervienen en la alteración de muchos tipos de alimentos.
→ Son útiles en la elaboración de ciertos alimentos
→ La parte principal de su crecimiento suele tener un aspecto blanco,
aunque puede tener colores distintos, color oscuro o color humo.
6. Caracteres de los cultivos
Algunos mohos tienen una textura laxa y un
aspecto lanoso , mientas que otros son
compactos.
Algunos tienen aspecto aterciopelado en su
superficie libre, el aspecto de otros es seco y
pulverulento, y el de otros es húmedo o
gelatinoso.
7. El aspecto del reverso de un moho que crece en
una placa de agar puede ser muy llamativo, por
ejemplo:
El color negro azulado opalescente o el color
negro verdoso de la cara inferior de
Cladosporium.
9. LEVADURAS
→ Aquellos hongos que generalmente no son
filamentosos, sino unicelulares y de forma ovoide o
esferoide, y que se reproducen por gemación o por
fisión.
→ Se encuentran en los alimentos y estas pueden ser
beneficiosas o perjudiciales.
Beneficiosas: elaboración de alimentos
Perjudiciales: producen alteraciones
→ Se caracterizan principalmente en base a sus caracteres
morfológicos, aunque para el microbiólogo de
alimentos, sus propiedades fisiológicas tienen mayor
importancia
10. Caracteres de los cultivos
Crecimiento en forma de velo en la superficie de
los medios líquidos indica que se trata de una
levadura oxidativa o formadora de velo.
La producción de un pigmento carotenoide
confirma que la levadura que ha crecido
pertenece al genero Rhodoturola.
El aspecto de crecimiento de los
microorganismos tiene importancia cuando
estos producen un moteado pigmentado en la
superficie de los alimentos
11. La mayoría de las colonias jóvenes de
levaduras son húmedas y algo
mucosas, aunque es posible que tengan
aspecto harinoso.
Algunas colonias tienen un color crema o
rosado.
Las levaduras son
oxidativas, fermentativas o bien su
actividad metabólica es a la vez de ambos
tipos.
12. En la superficie de un liquido, las levaduras
oxidativas pueden ser en forma de película, de
velo, o espuma y por ello se denominan
levadura formadoras de películas.
El aspecto de crecimiento de los
microorganismos tiene importancia cuando
estos producen un moteado pigmentado en la
superficie de los alimentos
Las levaduras fermentativas suelen crecer en
toda la masa del liquido y producen dióxido de
carbono.
13. Observación de características de
mohos
Cortar con un bisturí
alrededor de cada colonia
Colocar los fragmentos de
agar separados en el porta
objetos
Observar
el micelio
aéreo en
microscopio
de disección
Transferir parte del micelio a otro porta objetos y observar las estructuras en
un microscopio óptico. Comparar con bibliografía.
17. Observación de características de
levaduras
Extensión de la muestra
sobre el portaobjetos
.
Secado de la preparación
FROTIS
Extensión de la muestra
con el fin de separa los m.o.
SIMPLE
Fijado o adhesión de las células
al portaobjetos
Un solo
colorante
TINCION
DIFERENCIAL
Frotis se cubre con el colorante
Deja actuar (1 – 5 min.)
Se lava con agua y se seca
Mas de
un colorante
Forma y tipo de
agrupación de m.o.
Observan estructuras
celulares como endosporas
18.
19. ¿Por qué azul de metileno para la
tinción?
Tiñe todas las células bacterianas
rápidamente.
No produce un color intenso que
oscurezca los detalles celulares.
Útil para detectar la presencia de
bacterias en muestras naturales puesto
que la mayor parte del material celular no
se tiñe.
20. Seleccionar colonias grandes,
ovaladas aisladas o apiculares.
Adicionado con
Dextrosa
Sembrar
en medio
Wickerham
con campana
de Durham
Adicionado con
Rafinosa
22. Medio YM agar
(MALT WICKERHAM)
Composición :
Agar agar bacteriológico 15 g
Extracto de levadura 3 g
Extracto de malta 3 g
Peptona 5 g
Glucosa 10 g
Agua c.s p 1000 ml
23. Extracto de levadura.
Medio nutritivo empleado para el recuento de
microorganismos en aguas.
Extracto de malta
Medio para la detección, aislamiento y
enumeración de levaduras y mohos
Peptona
Nutre a los M.O para que se multipliquen a gran
velocidad. Se utiliza para estudios de
fermentación.
24. OBSERVACIONES
Tubos con:
Dextrosa y Rafinosa
turbidez y producción de CO2
Fermentación alcohólica
Extracto de malta
Posible formación de película superficial de micelio
Desarrollo de levaduras aerobias formadoras
de micelio
25. Realizan diluciones,
se siembra e incuba
Se cuentan colonias y
se seleccionan en:
Frotis y
Tinción
Hongos
Levaduras
Separan del agar y se observan
al microscopio:
De bisección y óptico
Siembra
Caldo de extracto de malta
Medio Weckerham
dextrosa
Formación de película superficial
en el medio
rafinosa
Desarrollo de
levaduras aerobias,
formadoras de micelio
Turbidez
Producción de CO2
Fermentación alcohólica
