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Perfil de Expressão Diferencial de microRNAs
Plasmáticos como Ferramenta para o
Rastreamento do Câncer Colorretal
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B. W. Stewart and P. Kleihues, World Cancer Report, WHO-IARC. Lyon: IARC Press, 2003;
Peter Boyle, AACR Translational Canc...
INCIDÊNCIA
~32.600 para 2014
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~32.600 para 2014
MORTALIDADE
14.000 em 2014
MORTALIDADE
14.000 em 2014
Brasil. Mi...
 Custo do tto (2010): 14 bilhões de dólares nos EUA
 10 Fármacos aprovados para o manejo do CCR:
QT convencional (FOLFIR...
Epitélio
normal
Proliferação
Epitelial
Pólipo Adenoma Adenocarcinoma Metástase
Mutação
do APCAPC
e ação do TGF-TGF-ββ
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Descoberta acerca da
desregulação de micro-RNAs
(miRNAs) no Câner
Gastroenterology. 2015 Oct;149(5):1204-1225.e12.
miRNAs como
Repressores da
Expressão de
Oncogenes
miRNAs como
Repressores da
Expressão de Genes
Supressores Tumorais
Papel dos miRNAs na
tumorigênese colorretal?
Gastroenterology. 2015 Oct;149(5):1204-1225.e12.
Pergunta de Partida
Existe mudança do perfil
plasmático de miRNAs durante o
processo de tumorigênese
colorretal de tal for...
METODOLOGIA
Instituições Envolvidas
Laboratório de Farmacologia
da Inflamação e do Câncer
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METODOLOGIA
Comitê de Ética em Pesquisa
Protocolos de aprovação:
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MATERIAL E MÉTODOS – PACIENTES
DELINEAMENTO EXPERIMENTAL
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METODOLOGIA
CRITÉRIOS DE INCLUSÃO
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METODOLOGIA
CRITÉRIOS DE INCLUSÃO
• Pacientes com câncer colorretal: Maiores de 18 anos, com CCR
estágios iniciais; neopla...
• Menores de idade; Diagnóstico clínico de polipose adenomatosa
familiar (FAP); Presença de mais de 10 adenomas colorretai...
COLETA E EXTRAÇÃO DE RNAs TOTAIS
Aplicação do TCLEAplicação do TCLE
Centrifugação
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SEQUENCIAMENTO E VALIDAÇÃO
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Quantidade
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Input >100 ng 1470 miRNA’s
RESULTADOS PARCIAIS
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DELINEAMENTO EXPERIMENTAL
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PARTICIPANTE VOLUNTÁRIO/GRUPO
Controle Pólipo Adenoma CCR CCRm Total
Homens 2
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IDADE AO DIAGNÓSTICO
Pólipo Adenoma CCR CCRm Total
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Impacto da Pesquisa
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Aumento de 450 %
 Dados de 2007:
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R$ 82 m...
AGRADECIMENTOAGRADECIMENTO
Universidade Federal do Ceará
Prof. Dr. Ronaldo Ribeiro
Prof. Dr. Ronaldo Cesar Lima
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NETTONúcleo de Estudos de Toxicidade
do Tratamento Oncológico (UFC)
PRONEX
NETTONúcleo de Estudos de Toxicidade
do Tratame...
OBRIGADOOBRIGADO
Reitoria - UFC
AGRADECIMENTOS
Equipe
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Apresentação feita no Seminário de Discussão de Avaliações de Tecnologias em Saúde de projetos financiados pelo Departamento de Ciência e Tecnologia - DECIT do Ministério da Saúde.

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Perfil de expressão diferencial de microRNAs plasmáticos como ferramenta para o rastreamento do câncer colorretal.

  1. 1. Perfil de Expressão Diferencial de microRNAs Plasmáticos como Ferramenta para o Rastreamento do Câncer Colorretal Prof. Dr. Roberto C.P. Lima Jr. Universidade Federal do Ceará Faculdade de Medicina Depto de Fisiologia e Farmacologia Lab. Farmacologia da Inflamação e do Câncer Processo: 401176/2013-4 Chamada 06/2013 - Tema 2: Envelhecimento e Doenças Crônicas
  2. 2. B. W. Stewart and P. Kleihues, World Cancer Report, WHO-IARC. Lyon: IARC Press, 2003; Peter Boyle, AACR Translational Cancer Medicine meeting, Singapore 2007. Novos casos de câncer 2000 - 10,000,000 2010 - 15,000,000 2030 - 27,000,000 Novas mortes por câncer 2000 - 6,200,000 2010 - 10,000,000 2030 - 17,000,000 IMPACTO GLOBAL DO CÂNCER * Em 2030, estima-se que haverá 75-80 milhões de indivíduos sobreviventes ao câncer.
  3. 3. INCIDÊNCIA ~32.600 para 2014 INCIDÊNCIA ~32.600 para 2014 MORTALIDADE 14.000 em 2014 MORTALIDADE 14.000 em 2014 Brasil. Ministério da Saúde. Instituto Nacional do Câncer . Estimativa 2014. CÂNCER COLORRETAL EPIDEMIOLOGIA 3o Homens 2o Mulheres
  4. 4.  Custo do tto (2010): 14 bilhões de dólares nos EUA  10 Fármacos aprovados para o manejo do CCR: QT convencional (FOLFIRI, FOLFOX, XELOX) Trapias alvo: Bevacizumabe, Cetuximabe, Panitumumabe, Regorafenibe, Aflibercept, Ramucirumabe
  5. 5. Epitélio normal Proliferação Epitelial Pólipo Adenoma Adenocarcinoma Metástase Mutação do APCAPC e ação do TGF-TGF-ββ Mutação de K-ras e c-MycK-ras e c-Myc Mutação do p53 ep53 e Ação do TGF-TGF-ββ Tempo (30 a 40 anos) CÂNCER COLORRETAL PATOGÊNESE
  6. 6. Descoberta acerca da desregulação de micro-RNAs (miRNAs) no Câner Gastroenterology. 2015 Oct;149(5):1204-1225.e12.
  7. 7. miRNAs como Repressores da Expressão de Oncogenes miRNAs como Repressores da Expressão de Genes Supressores Tumorais
  8. 8. Papel dos miRNAs na tumorigênese colorretal?
  9. 9. Gastroenterology. 2015 Oct;149(5):1204-1225.e12.
  10. 10. Pergunta de Partida Existe mudança do perfil plasmático de miRNAs durante o processo de tumorigênese colorretal de tal forma que estes pudéssem ser utilizados como biomarcadores diagnósticos?
  11. 11. METODOLOGIA
  12. 12. Instituições Envolvidas Laboratório de Farmacologia da Inflamação e do Câncer UFC
  13. 13. METODOLOGIA Comitê de Ética em Pesquisa Protocolos de aprovação: •Hospital Geral César Cals (Protocolo 1.056.889) •Instituto do Câncer do Ceará (Protocolo 1.044.601) •Hospital Universitário Walter Cantídio (Protocolo 792.546)
  14. 14. MATERIAL E MÉTODOS – PACIENTES DELINEAMENTO EXPERIMENTAL MATERIAL E MÉTODOS – PACIENTES DELINEAMENTO EXPERIMENTAL METODOLOGIA Delineamento do Estudo
  15. 15. METODOLOGIA CRITÉRIOS DE INCLUSÃO • Controle sadio: Indivíduos saudáveis, maiores de 18 anos, sem histórico familiar com colonoscopia recente confirmando ausência de lesões neoplásicas colorretais. • Pacientes com pólipo: Maiores de 18 anos com pólipo, retirados com procedimento de colonoscopia (polipectomia). • Pacientes com adenoma: Maiores de 18 anos com adenoma maior que 10 mm, ou que apresentem alto grau de displasia. Retirada com procedimento de colonoscopia (polipectomia).
  16. 16. METODOLOGIA CRITÉRIOS DE INCLUSÃO • Pacientes com câncer colorretal: Maiores de 18 anos, com CCR estágios iniciais; neoplasia maior que 1,0 cm (descritos em biópsia, conforme laudo de médico patologista), liberados para cirurgia (colectomia ou retossigmoidectomia). • Pacientes com câncer colorretal metastático: Maiores de 18 anos, com CCR e metástase, estágios avançados; neoplasia CCR maior que 1,0 cm ou pós ressecção cirúrgica apresentando doença em atividade.
  17. 17. • Menores de idade; Diagnóstico clínico de polipose adenomatosa familiar (FAP); Presença de mais de 10 adenomas colorretais; Diagnóstico de câncer em outro sítio no momento do recrutamento; Doença Inflamatória do Intestino (IBD); Quimioterapia ou radioterapia no momento da coleta de sangue; Exame colonoscópio incompleto; Preparação inadequada para a colonoscopia; Presença de hemólise na amostra de plasma. Ainda, no caso de adenoma: pacientes com lesões serrilhadas não serão incluídos. METODOLOGIA CRITÉRIOS DE EXCLUSÃO
  18. 18. COLETA E EXTRAÇÃO DE RNAs TOTAIS Aplicação do TCLEAplicação do TCLE Centrifugação 2500 rpm/5min Coleta de sangue Extração de RNA plasmático (miRNeasy) Armazenamento à -80°C
  19. 19. SEQUENCIAMENTO E VALIDAÇÃO DOS miRNAs Quantidade Amostra miRNA Input >100 ng 1470 miRNA’s
  20. 20. RESULTADOS PARCIAIS
  21. 21. MATERIAL E MÉTODOS – PACIENTES DELINEAMENTO EXPERIMENTAL MATERIAL E MÉTODOS – PACIENTES DELINEAMENTO EXPERIMENTAL Controle N=17 Controle N=17 Pólipo N=10 Pólipo N=10 Adenoma N=8 Adenoma N=8 Adenocarcinoma N=20 Adenocarcinoma N=20 Adenocarcinoma com metástase N=20 Adenocarcinoma com metástase N=20 RESULTADOS Avanços na Coleta de Amostras
  22. 22. PARTICIPANTE VOLUNTÁRIO/GRUPO Controle Pólipo Adenoma CCR CCRm Total Homens 2 (6,25%) 4 (12,5%) 4 (12,5%) 10 (31,2%) 12 (37,5%) 32 Mulheres 15 (34,9%) 6 (14%) 4 (9,3%) 10 (23,3%) 8 (18,6%) 43 Total 17 10 8 20 20 75 RESULTADOS Dados Epidemiológicos
  23. 23. IDADE AO DIAGNÓSTICO Pólipo Adenoma CCR CCRm Total Homens Até 40 anos 0 0 1 (100%) 0 1 41 à 60 anos 2 (14,3%) 1 (7,1%) 5 (35,7%) 6 (42,8%) 14 Acima de 61 anos 2 (13,3%) 3 (20%) 4 (26,6%) 6 (40%) 15 Mulheres Até 40 anos 1 (50%) 0 1 (50%) 0 2 41 à 60 anos 2 (18,1%) 2 (18,1%) 2 (18,1%) 5 (45,4%) 11 Acima de 61 anos 3 (20%) 2 (13,3%) 7 (46,6%) 3 (20%) 15 RESULTADOS Dados Epidemiológicos
  24. 24. Impacto da Pesquisa para o SUS?
  25. 25. http://www.inca.gov.br/releases/press_release_view_arq.asp?ID=1607 Aumento de 450 %  Dados de 2007: R$ 18 milhões R$ 82 milhões CÂNCER COLORRETAL Custo do Tratamento no Brasil  CCR inicial X CCR avançado? Avançado: Custo 8x maior  Tratamento X Prevenção Tratamento Custo 7x maior
  26. 26. AGRADECIMENTOAGRADECIMENTO Universidade Federal do Ceará Prof. Dr. Ronaldo Ribeiro Prof. Dr. Ronaldo Cesar Lima Dra. Deysi Wong Dra. Josiane Quetz Camila Meirelles Lívia Nobre Heitor Muniz Carlos Wagner Wanderley Camila Fernandes Instituto do Ceará Dra. Rosane Sant’Ana Dra. Maria Perpetuo Saldanha Dr. Carlos Hirth Hospital Geral Dr. Cesar Cals Dr. Daniel Pessoa Hospital Universitário Walter Cantídio Prof. Dr. Marcellus Ponte Souza AC Camargo-CIPE Profa. Dra. Silvia Rogatto Dra. Hellen Kuasne
  27. 27. NETTONúcleo de Estudos de Toxicidade do Tratamento Oncológico (UFC) PRONEX NETTONúcleo de Estudos de Toxicidade do Tratamento Oncológico (UFC) PRONEX AGRADECIMENTOS Apoio Financeiro
  28. 28. OBRIGADOOBRIGADO Reitoria - UFC
  29. 29. AGRADECIMENTOS Equipe

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