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CULTIVO Y AISLAMIENTO DE
ESTAFILOCOCOS DE MUESTRA DE
PIEL


OBJETIVO: Estudiar las características de los
microorganismos del grupo de los estafilococos, y su
relación con su patogenia en la piel.
CARACTERÍSTICAS
-

Células esférica casi de 1 um

-

En racimo

-

Colonias lisas, prominentes,brillantes

-

Gram +

-

Fermentan

carbohidratos

(glucosa, maltosa, sacarosa) con producción de
ácido láctico pero, no gas.
-

Producción de pigmentos

-

Crecimiento óptimo 37⁰C (mesófilos)

-

Catalasa +

-

De los estafilococos, S.aureus es el único que tiene
coagulasa-positiva.

-

El género Staphylococcus se compone actualmente de
33 especies.

-

No Produce esporas


Los Staphylococcus de importancia médica son:
a) S. aureus

b) S. epidermidis

c) S. saprophyticus
-Alfa: Produce una coloración verde
sobre y alrededor de la colonia
-Beta: Produce una hemolisis total de
los eritrocitos que rodean la colonia, y en
ocasiones de mayor tamaño (colonias
doradas).
-Gamma: Efectos sobre los eritrocitos,
son estreptococos no hemolíticos.

Toxinas

PATOGENIA

Enzimas

Coagulasa: actúa transformando el
fibrinógeno en fibrina
Lipasas: permiten colonizar aéreas en
la piel
Hialuronidasa: actúa sobre el ácido
hialuronico
Nucleasa: Actúa sobre el ADN

Enterotoxinas

Provocan intoxicación
y envenenamiento por
la ingestión de
alimentos
contaminados
TIPOS DE CULTIVO


Vogel Johnson Agar.

Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos coagulasa
positivo fermentadores de manitol. Por inoculación directa: sembrar en
forma masiva.
Staphylococcus aureus

Colonias negras, rodeada de
una zona amarilla.

Staphylococcus
epidermidis

Negras, pequeñas, sin zona
amarilla alrededor.


S 110.

Para el aislamiento y diferenciación presuntiva de

estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación
de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras
muestras.

Directa,

en

superficie,

por

estriado

o

por

extensión. Siembra directa, en superficie, por estriado o por
extensión.
Microorganismo

Pigmento Fermentaci
ón de
manitol

Hidrólisis
de la
gelatina

Prueba de
la
coagulasa

S. aureus

+

+

+

+

S. epidermidis

-

-

+

-


Agar sal manitol, muestra la fermentación de manitol de los
estafilococos.
+

Colonias se verán
amarillas rodeadas de
una zona del mismo
color.

-

Colonias rojas rodeadas
de una zona del mismo
color o purpura.


Agar sangre

El objetivo de la siembra es

el cultivo de muestras diversas para

obtener crecimiento bacteriano en colonias aisladas ( cultivo y
aislamiento), además del estudio de reacciones hemolíticas en una
amplia variedad de microorganismos.
IMPORTANCIA MÉDICA
Agente etiológico de un gran número de enfermedades en el
hombre
Todos los tejidos de la economía pueden ser colonizados e
infectados


Pueden desarrollar resistencia: La colonización es
un gran peligro


ENFERMEDADES

Impétigo

Forúnculo
Celulitis
Abscesos

 Ántrax estafilocócico
Pénfigo del recién nacido
OTROS APARATOS Y SISTEMAS
Aparato respiratorio:
Sinusitis, Otitis, Faringitis, neumonitis, abscesos
pleurales,
 Aparato Digestivo: Enterocolitis, Absesos en
hígado, peritonitis, intoxicación,
 SNC: Meningoencefalitis,
 Aparato genitourinario: Cistitis, prostatitis, nefritis
 Sistema cardiovascular:
Endocarditis, miocarditis, pericarditis
 Ojos y anexos: Conjuntivitis, foliculitis,
 Septisemias

PROCEDIMIENTO
1.

Dividir las cajas con medio de cultivo en dos, con un lápiz graso.

2.

En una de las secciones sembrar la cepa de Staphylococcus aureus
por estría cruzada, en cada una de las cajas de medio de cultivo.

3.

Con un hisopo estéril, tomar la muestra de piel, oprimiendo
suavemente.
MATERIAL
1 Gradilla
 1 Mechero
 1 Placa de agar sangre
 1 placa de agar sal manitol
 1 Placa de agar S-110
 1 Paquete de isopos
 1 Cepa Staphylococcus aureus
 Microscopio opcional y aceite de inmersión y
colorantes para tinción Gram

4. Descargar la muestra en la otra sección

5. La prueba de la coagulasa se efectúa tomando una asada de la cepa
e inocular por suspensión en el tubo de plasma citratado, incubar a 37
⁰C durante 4, 8 y 24 hrs, observar la formación de coágulo. Si en este

tiempo no se ha formado reportar la prueba como negativa.
6.

Para efectuar la prueba de la catalasa, tomar una asada de la cepa
y suspender en una gota de agua sobre un porta objetos,
adicionarle una a dos gotas de peróxido de hidrógeno y esperar la

formación inmediata de burbujas, de ser así reportar la prueba
como positiva.

7.

Hacer una tabla donde se indiquen todos los resultados

8.

Interpretar resultados
BIBLIOGRAFÍA




Pahissa, Albert, Infecciones producidas por Staphylococcus
aureus, Marge medica books;2009.
Romero Cabello R, Microbiología y parasitología
humanas, 3ra Ed., Edit. Médica Panamericana, México, 2007

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Cultivo y aislamiento de estafilococos de muestra de (1)

  • 1. CULTIVO Y AISLAMIENTO DE ESTAFILOCOCOS DE MUESTRA DE PIEL
  • 2.  OBJETIVO: Estudiar las características de los microorganismos del grupo de los estafilococos, y su relación con su patogenia en la piel.
  • 3. CARACTERÍSTICAS - Células esférica casi de 1 um - En racimo - Colonias lisas, prominentes,brillantes - Gram + - Fermentan carbohidratos (glucosa, maltosa, sacarosa) con producción de ácido láctico pero, no gas.
  • 4. - Producción de pigmentos - Crecimiento óptimo 37⁰C (mesófilos) - Catalasa + - De los estafilococos, S.aureus es el único que tiene coagulasa-positiva. - El género Staphylococcus se compone actualmente de 33 especies. - No Produce esporas
  • 5.  Los Staphylococcus de importancia médica son: a) S. aureus b) S. epidermidis c) S. saprophyticus
  • 6. -Alfa: Produce una coloración verde sobre y alrededor de la colonia -Beta: Produce una hemolisis total de los eritrocitos que rodean la colonia, y en ocasiones de mayor tamaño (colonias doradas). -Gamma: Efectos sobre los eritrocitos, son estreptococos no hemolíticos. Toxinas PATOGENIA Enzimas Coagulasa: actúa transformando el fibrinógeno en fibrina Lipasas: permiten colonizar aéreas en la piel Hialuronidasa: actúa sobre el ácido hialuronico Nucleasa: Actúa sobre el ADN Enterotoxinas Provocan intoxicación y envenenamiento por la ingestión de alimentos contaminados
  • 7. TIPOS DE CULTIVO  Vogel Johnson Agar. Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos coagulasa positivo fermentadores de manitol. Por inoculación directa: sembrar en forma masiva. Staphylococcus aureus Colonias negras, rodeada de una zona amarilla. Staphylococcus epidermidis Negras, pequeñas, sin zona amarilla alrededor.
  • 8.  S 110. Para el aislamiento y diferenciación presuntiva de estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras. Directa, en superficie, por estriado o por extensión. Siembra directa, en superficie, por estriado o por extensión. Microorganismo Pigmento Fermentaci ón de manitol Hidrólisis de la gelatina Prueba de la coagulasa S. aureus + + + + S. epidermidis - - + -
  • 9.  Agar sal manitol, muestra la fermentación de manitol de los estafilococos. + Colonias se verán amarillas rodeadas de una zona del mismo color. - Colonias rojas rodeadas de una zona del mismo color o purpura.
  • 10.  Agar sangre El objetivo de la siembra es el cultivo de muestras diversas para obtener crecimiento bacteriano en colonias aisladas ( cultivo y aislamiento), además del estudio de reacciones hemolíticas en una amplia variedad de microorganismos.
  • 11. IMPORTANCIA MÉDICA Agente etiológico de un gran número de enfermedades en el hombre Todos los tejidos de la economía pueden ser colonizados e infectados
  • 12.  Pueden desarrollar resistencia: La colonización es un gran peligro
  • 14. OTROS APARATOS Y SISTEMAS Aparato respiratorio: Sinusitis, Otitis, Faringitis, neumonitis, abscesos pleurales,  Aparato Digestivo: Enterocolitis, Absesos en hígado, peritonitis, intoxicación,  SNC: Meningoencefalitis,  Aparato genitourinario: Cistitis, prostatitis, nefritis  Sistema cardiovascular: Endocarditis, miocarditis, pericarditis  Ojos y anexos: Conjuntivitis, foliculitis,  Septisemias 
  • 15. PROCEDIMIENTO 1. Dividir las cajas con medio de cultivo en dos, con un lápiz graso. 2. En una de las secciones sembrar la cepa de Staphylococcus aureus por estría cruzada, en cada una de las cajas de medio de cultivo. 3. Con un hisopo estéril, tomar la muestra de piel, oprimiendo suavemente.
  • 16. MATERIAL 1 Gradilla  1 Mechero  1 Placa de agar sangre  1 placa de agar sal manitol  1 Placa de agar S-110  1 Paquete de isopos  1 Cepa Staphylococcus aureus  Microscopio opcional y aceite de inmersión y colorantes para tinción Gram 
  • 17. 4. Descargar la muestra en la otra sección 5. La prueba de la coagulasa se efectúa tomando una asada de la cepa e inocular por suspensión en el tubo de plasma citratado, incubar a 37 ⁰C durante 4, 8 y 24 hrs, observar la formación de coágulo. Si en este tiempo no se ha formado reportar la prueba como negativa.
  • 18. 6. Para efectuar la prueba de la catalasa, tomar una asada de la cepa y suspender en una gota de agua sobre un porta objetos, adicionarle una a dos gotas de peróxido de hidrógeno y esperar la formación inmediata de burbujas, de ser así reportar la prueba como positiva. 7. Hacer una tabla donde se indiquen todos los resultados 8. Interpretar resultados
  • 19. BIBLIOGRAFÍA   Pahissa, Albert, Infecciones producidas por Staphylococcus aureus, Marge medica books;2009. Romero Cabello R, Microbiología y parasitología humanas, 3ra Ed., Edit. Médica Panamericana, México, 2007