A IMPLEMENTAÇÃO DO MÉTODO COLILERT ®  NUM LABORATÓRIO DE PEQUENA DIMENSÃO : AS BARREIRAS DO CONVENCIONALISMO E AS VANTAGEN...
RESUMO DA APRESENTAÇÃO <ul><li>Introdução </li></ul><ul><li>Quem somos e o que fazemos </li></ul><ul><li>A procura de solu...
INTRODUÇÃO <ul><li>Os métodos analíticos enzimáticos de detecção e enumeração de microrganismos em águas baseiam-se na tec...
INTRODUÇÃO <ul><li>O método Colilert -18®  da IDEXX é um método enzimático que usa a tecnologia de substrato definido  par...
QUEM SOMOS…O QUE FAZEMOS  <ul><li>O Laboratório de Análises Químicas (LAQ) é uma unidade analítica da Universidade do Alga...
QUEM SOMOS…O QUE FAZEMOS 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Laboratório de p...
A PROCURA DE SOLUÇÕES INOVADORAS <ul><li>Em 2004 a equipa do laboratório decidiu expandir as suas actividades criando paco...
A PROCURA DE SOLUÇÕES INOVADORAS 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas E a escolha foi ...
A DESCONFIANÇA EM RELAÇÃO AOS KITS <ul><li>“ Mas vocês fazem as análises com testes rápidos? Kits?...Pois…”   ( vox pop ) ...
A IMPLEMENTAÇÃO DO COLILERT-18 <ul><li>Implementação simples  (requisitos: pó magico, seladora, quantitrays, incubadora e ...
VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO A DIFERENTES MATRIZES <ul><li>Águas subterrâneas </li></ul><ul><li>Águas para consumo </li></ul>11 d...
VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO A DIFERENTES MATRIZES 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas Foram...
QUANTITRAY 2000 ® <ul><li>100 mL de amostra ou amostra préviamente diluida. </li></ul><ul><li>49 poços grandes, 48 poços p...
DIFICULDADES... E ERROS MAIS COMUNS <ul><li>Indefinição de cor, limiar de positivo / negativo </li></ul>11 de Dezembro de ...
DIFICULDADES... E ERROS MAIS COMUNS (II) <ul><li>Contagem de poços fluorescentes que não apresentam coloração amarela ao O...
ANÁLISE SWOT Colilert-18 & Quantitray 2000 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas AMEAÇA...
CONCLUSÕES <ul><li>O Colilert-18 associado ao Quantitray 2000 é um método rápido (18 horas), fácil de executar e de baixo ...
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Colilert Num Laboratorio De Pequena DimensãO

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Implementation of Colliert from IDEXX in a small environmental services lab. (in portuguese)

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  • Vocês usam Kits para fazer análises não é? IDEXX DST versus SMEWW
  • Vocês usam Kits para fazer análises não é? IDEXX DST versus SMEWW
  • Colilert Num Laboratorio De Pequena DimensãO

    1. 1. A IMPLEMENTAÇÃO DO MÉTODO COLILERT ® NUM LABORATÓRIO DE PEQUENA DIMENSÃO : AS BARREIRAS DO CONVENCIONALISMO E AS VANTAGENS COMPETITIVAS Paulo Pedro LAQ / Universidade do Algarve Campus de Gambelas, 8005-139 Faro email: laq@ualg.pt
    2. 2. RESUMO DA APRESENTAÇÃO <ul><li>Introdução </li></ul><ul><li>Quem somos e o que fazemos </li></ul><ul><li>A procura de soluções inovadoras </li></ul><ul><li>A desconfiança em relação aos Kits </li></ul><ul><li>A implementação do Colilert-18 </li></ul><ul><li>Validação e aplicação a diferentes matrizes </li></ul><ul><li>Quantitray 2000 </li></ul><ul><li>Dificuldades e erros mais comuns </li></ul><ul><li>Análise SWOT </li></ul><ul><li>Conclusões </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas
    3. 3. INTRODUÇÃO <ul><li>Os métodos analíticos enzimáticos de detecção e enumeração de microrganismos em águas baseiam-se na tecnologia de substrato definido (DST). </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas Nestes métodos o substrato definido é usado como fonte de nutrientes vital ao crescimento dos microrganismos em pesquisa. Durante a incubação é libertado do substrato definido um cromóforo ou fluoróforo, indicando a presença do microrganismo alvo. Esta tecnologia está disponível desde a década de 90, é utilizada em diversos países com aprovação das entidades oficiais.
    4. 4. INTRODUÇÃO <ul><li>O método Colilert -18® da IDEXX é um método enzimático que usa a tecnologia de substrato definido para a identificação de bactérias coliformes e Escherichia coli. </li></ul><ul><li>Em conjunto com o tabuleiro Quantitray® da IDEXX permite a enumeração (NMP) em multi-poços. </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas Agradecimentos: Msc Marta Sofia Valente Bernardo, “Comparação dos métodos aplicados na detecção de bactérias coliformes, Escherichia coli e Enterococcus sp . em águas para fins recreativos”, Universidade do Algarve, 2007. Nesta apresentação vamos identificar as razões que levaram à escolha desta metodologia na nossa organização, alguns dos problemas técnicos da aplicação a diferentes tipos de águas, e as vantagens em relação a outras metodologias disponíveis para o mesmo fim.
    5. 5. QUEM SOMOS…O QUE FAZEMOS <ul><li>O Laboratório de Análises Químicas (LAQ) é uma unidade analítica da Universidade do Algarve criada no final do ano de 2000 com o objectivo de apoiar a investigação e fornecer serviços analíticos a entidades externas na área ambiental. </li></ul><ul><li>Este centro de análises foi orientado para poder dar resposta a parte das determinações analíticas constantes no decreto-lei n.º 236/98 de 1 de Agosto e à Directiva Quadro da Água relativo ao controlo de qualidade das águas para diferentes utilizações. </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas
    6. 6. QUEM SOMOS…O QUE FAZEMOS 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Laboratório de pequena dimensão (aprox. 60m2). </li></ul><ul><li>Orientado para análises químicas (estrutura e equipamentos). </li></ul><ul><li>Recursos humanos em numero limitado e sem formação de base em microbiologia. </li></ul><ul><li>Com sistema da qualidade implementado mas sem acreditação pelo IPAC. </li></ul><ul><li>Sem estrutura/laboratório vocacionado para análises microbiológicas. </li></ul><ul><li>Grande diversidade de matrizes analisadas (águas, solos, sedimentos, tecidos de animais e plantas, sal, lamas de ETAR, etc..). </li></ul><ul><li>Objectivos claros de inovação e aplicação de nova tecnologia. </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas
    7. 7. A PROCURA DE SOLUÇÕES INOVADORAS <ul><li>Em 2004 a equipa do laboratório decidiu expandir as suas actividades criando pacotes de qualidade da água para clientes particulares. </li></ul><ul><li>Rapidez </li></ul><ul><li>Fiabilidade </li></ul><ul><li>Economia… </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas (Resultados em 24 horas) (Resultados comparáveis com métodos de referência) (Custo inferior a 30 EUR) 1º PROBLEMA Qualidade da água para consumo humano sem análises microbiológicas? (germes a 22º e 36ºC, coliformes totais, coliformes fecais, Escherichia coli , enterococos, clostridios) 2º PROBLEMA Rapidez e custo reduzido? (Resultados quantitativos/semi-quantitativos no máximo em 24 horas, custo que permitisse manter o pacote nos 30 EUR) 3º PROBLEMA Meios, estrutura laboratorial, formação dos colaboradores? (Requisitos minimos de laboratório, facilidade de aprendizagem..)
    8. 8. A PROCURA DE SOLUÇÕES INOVADORAS 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas E a escolha foi : COLILERT-18 + Quantitray 2000 da IDEXX Pacote básico de análises para águas de consumo, com resultados em 24 horas e determinação dos principais parâmetros químicos, físicos e bacteriológicos indicadores da qualidade da água. Inclui a determinação dos seguintes parâmetros: coliformes totais, Escherichia coli , pH, condutividade, oxidabilidade, eH, cloretos, nitratos, amónia, dureza, alcalinidade ou acidez e ferro. PVP < 30 EUR negativo negativo negativo negativo positivo Amplificação de ADN – PCR quant. RT negativo positivo negativo negativo Aprendizagem negativo positivo positivo positivo Equipamento positivo positivo negativo negativo Estrutura laboratorial negativo positivo positivo positivo Custo por analise positivo positivo negativo negativo Rapidez no resultado Detecção imunolo-gica Enzimáticos Multi-poços (Colilert-18) Filtração por Menbrana Fermentação em tubos multiplos
    9. 9. A DESCONFIANÇA EM RELAÇÃO AOS KITS <ul><li>“ Mas vocês fazem as análises com testes rápidos? Kits?...Pois…” ( vox pop ) </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Mas o Colilert : </li></ul><ul><li>É um método referenciado no Standard Methods For The Examination of Water and Wastewater (SMEWW 9223 B, 20 Edição) para enumeração de E.coli em águas superficiais. </li></ul><ul><li>Vários estudos publicados de ensaios de comparação com métodos clássicos inclusivé com o método de referência Europeu com filtração por membrana e incubação em meio gelosado de tergitol -TTC. (Fricker, Niemela & Lee, 2000) </li></ul>
    10. 10. A IMPLEMENTAÇÃO DO COLILERT-18 <ul><li>Implementação simples (requisitos: pó magico, seladora, quantitrays, incubadora e Lampada UV) </li></ul><ul><li>Aprendizagem fácil (20 minutos??..) </li></ul><ul><li>Execução rápida (10 minutos…O tempo para a seladora aquecer permitindo horários alargados para recepção de amostras ) </li></ul><ul><li>Contagem simples (utilização do Quantitray 2000® que permite contagens até 2419,6 NMP/100mL através de uma tabela de NMP) </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Resultado: </li></ul><ul><li>No espaço de 1 semana o laboratório estava em condições efectuar análises de Coliformes Totais e Escherichia coli em águas para consumo e subterrâneas. </li></ul>
    11. 11. VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO A DIFERENTES MATRIZES <ul><li>Águas subterrâneas </li></ul><ul><li>Águas para consumo </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Águas de superficie </li></ul><ul><li>Águas de transição </li></ul><ul><li>Águas para fins balneares </li></ul><ul><li>Águas residuais tratadas/bruto </li></ul><ul><li>Águas de processo </li></ul><ul><li>Areias de praias /solos </li></ul><ul><li>Alimentos </li></ul><ul><li>Comparação em paralelo com métodos normalizados de referência (EN ISO 9308-1: 2000 para E. Coli e MLSA) </li></ul><ul><li>Confirmação de positivos com galerias API </li></ul><ul><li>Análise de materiais de referência certificados para a E. coli / controlos positivos (NCTC 9001-HPA ) </li></ul><ul><li>Tratamento de resultados segundo a ISO 17994:2004 </li></ul>
    12. 12. VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO A DIFERENTES MATRIZES 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas Foram testadas em paralelo 40 amostras de águas naturais subterrâneas e superficiais (lagos, rios, estuários, costeiras) 17.3% MLSA Escherichia coli Coliformes Totais Colilert 18 vs MLSA Inconclusivo (analisar + amostras) Significativamente diferente ISO 17994:2004 Métodos equivalentes 95% (p<0.05) Métodos equivalentes 95% (p<0.05) Teste t Student para amostras emparelhadas 54.8 % 39.1% 82.5 % % de amostras c/ contagens superiores IDEXX Colilert-18 MLSA IDEXX Colilert-18
    13. 13. QUANTITRAY 2000 ® <ul><li>100 mL de amostra ou amostra préviamente diluida. </li></ul><ul><li>49 poços grandes, 48 poços pequenos. </li></ul><ul><li>Tabela de NMP de <1 a >2419,6 </li></ul><ul><li>Com diluições: </li></ul><ul><li>1/10 de 10 de 2,4X10 4 NMP </li></ul><ul><li>1/1000 de 1000 a 2,4X10 6 NMP </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas
    14. 14. DIFICULDADES... E ERROS MAIS COMUNS <ul><li>Indefinição de cor, limiar de positivo / negativo </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Amostras turvas ou com cor. </li></ul><ul><li>Amostras que desenvolvem ou apresentam fluorescencia natural no UV </li></ul>Dificuldades: <ul><li>Comparador IDEXX </li></ul><ul><li>Diluição das amostras </li></ul><ul><li>Colisure </li></ul>Soluções:
    15. 15. DIFICULDADES... E ERROS MAIS COMUNS (II) <ul><li>Contagem de poços fluorescentes que não apresentam coloração amarela ao ONPG </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas <ul><li>Ausência de contagem do poço grande. (49 poços grandes, 48 pequenos) </li></ul><ul><li>Poços sem liquido ou parcialmente preenchidos. </li></ul>
    16. 16. ANÁLISE SWOT Colilert-18 & Quantitray 2000 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas AMEAÇAS OPORTUNIDADES <ul><li>Falta de reconhecimento legal e normativo </li></ul><ul><li>Falta de procedimentos de calibração e ou normalização </li></ul><ul><li>Residuos de laboratório produzidos </li></ul><ul><li>Utilização com amostras, turvas, com cor. </li></ul><ul><li>Rapidez de execução e de resultados </li></ul><ul><li>Facilidade de aprendizagem </li></ul><ul><li>Gama de trabalho alargada </li></ul><ul><li>Dois métodos num só procedimento </li></ul><ul><li>baixo custo p/analise </li></ul><ul><li>definitivo (não necessita confirm.) </li></ul><ul><li>Robustez </li></ul><ul><li>Versatilidade na incubação. </li></ul>PONTOS FRACOS PONTOS FORTES <ul><li>Métodos moleculares cada vez mais rápidos e de baixo custo. </li></ul><ul><li>E. coli como principal indicador de contaminação fecal para os diversos tipos de águas. </li></ul><ul><li>Utilização da tecnologia quantitray na determinação de outros microrganismos </li></ul>
    17. 17. CONCLUSÕES <ul><li>O Colilert-18 associado ao Quantitray 2000 é um método rápido (18 horas), fácil de executar e de baixo custo. </li></ul><ul><li>Os resultados obtidos com águas de diversos tipos/origens são comparáveis aos obtidos com métodos de referência. </li></ul><ul><li>Em organizações, mesmo sem uma estrutura forte de microbiologia, a implementação do método é rápida, e não requer recursos humanos especializados. </li></ul>11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas Expectativas: Será possivel um dia ter métodos com o mesmo nível de robustez, simplicidade, rapidez e custo, para outros microrganismos?
    18. 18. MUITO OBRIGADO! 11 de Dezembro de 2009 I Reunião sobre Análises Microbiológicas de Águas

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